指示微生物生长的指示管及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种指示微生物生长的指示管及其应用。本发明专利技术的生长指示管作为一种通用的容器，采用干燥方法进行显色指示颗粒的储存与运输，保证在使用之前，指示颗粒一直保持在干燥状态，避免了湿度对氧化还原指示剂(如四氮唑盐)的影响，不易降解变色。本发明专利技术还提供了检测微生物生长的试剂盒。本发明专利技术的指示管使用方便，通用性好，灵敏度高，毒性低。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微生物检测领域；更具体地，本专利技术涉及指示微生物生长的指示管及其应用。
技术介绍
临床上致病菌获得能量的基质主要是糖类，通过糖的氧化或酵解释放能量，并以高能磷酸键的形式(ADP、ATP)储存能量。细菌生物氧化的类型分为呼吸与发酵。在生物化过程中，细菌的营养物(如糖)经脱氢酶作用所脱下的氢，需经过一系列中间递氢体(如辅酶I、辅酶II、黄素蛋白等)的传递转运，最后将氢交给受氢体。以无机物为受氢体的生物氧化过程，称为呼吸，其中以分子氧为受氢体的称需氧呼吸；而以无机化合物(如硝酸盐、硫酸盐)为受氢体的称厌氧呼吸。生物氧化中以各种有机物为受氢体的称为发酵，大多数病原菌只进行需氧呼吸或发酵。多数细菌生长发酵时能还原无色的氯化三苯四氮唑(2，3，5-triphenyltetrazolium chloride，TTC)为红色的三苯甲臢(TTF)(如下式)，形成红色集落，三苯甲臢比较稳定，不会被空气中的氧气自动氧化。细胞的生长或细胞活性的检测经常使用四氮唑MTT(Tetrazolium)法，其原理是活细胞线粒体上的琥珀酸脱氢酶与外源性的MTT发生氧化还原反应，被还原成不溶于水的蓝紫色结晶物沉积于细胞内(如下式)，而死细胞无此功能。DMSO能溶解细胞中的紫色臢结晶物，然后酶联免疫检测仪在490nm波长处测定光吸收值，就可以间接反映活细胞的数量。总之，活细胞、细菌生长时均会产生能量代谢，代谢中所需能量，绝大多<br>数是通过生物氧化作用而获得的，生物氧化即在酶的作用下生物细胞内所发生的系列氧化还原反应。发生氧化还原反应就会发生氢质子传递，因此，可通过脱氢酶受氢体又称氧化还原指示剂(Redox indicator)来检测。氧化还原指示剂是一类脱氢酶受氢体，本质是一类自身具有氧化还原性质的有机试剂，能在特定的电极电位发生明显的颜色变化，其氧化型与还原型具有不同的颜色。常用的氧化还原指示剂包括：2，3，5-氯化三苯基四氮唑(2，3，5-triphenyltetrazolium chloride，TTC)，3-(4’，5’-二甲基-2-噻唑基)-2，4-二苯基四氮唑溴化物，噻唑蓝，溴化噻唑蓝四氮唑，噻唑蓝，噻唑兰，3-(4，5-二甲基-2-噻唑)-2，5-二苯基溴化四氮唑，3-(4，5-二甲基-2-噻唑基)-2，5-二苯基四氮唑溴化物，溴化-3-(4，5-二甲基-2-噻唑基)-2，5-二苯基四氮唑，3-(4，5-二甲基-2-噻唑基)-2，5-二苯基-2H-溴代四唑(MTT)，2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-苯基-四唑氯(2-(p-iodophenyl)-3-(p-nitrophenyl)-5-phenyl-tetrazolium chloride，INT)，四硝基四氮唑蓝(2，2’，5，5’-tetra-(p-nitrophenyl)-3，3’-(3-dimethoxy-4-diphenylene)-ditetrazoliumchloride，TNBT)、氮四唑蓝(2，2’-di-(p-nitrophenyl)-5，5’-diphenyl-3，3’-dimethoxy-4，4’-diphenylene)-ditetrazolium chloride，NBT)2，2’-p-二亚苯基-3，3’，5，5’-tetraphenylditetrazoliumchloride(neotetrazolium chloride)(NTC)、OTC，PTC，MTC，WST等。其中，四氮唑类(Tetrazolium)物质是氧化还原指示剂中最常见的试剂。这类氧化还原指示剂能非常灵敏的检测还原性物质，其本身被还原成可见光下可容易辨别的深色臢类物质，在生化检测、细胞培养及常规细菌的培养、鉴定、药敏中得到了广泛的应用。但是，四氮唑类物质存在以下缺点：1、四氮唑盐不稳定，对温度、湿度和光较为敏感，极易降解，尤其在水溶液中易生成有色产物，其储存液即使保存在低温(-20℃)环境也不得超过一个月。四氮唑盐的降解或变色大大降低了检测的灵敏度，因此，一般建议四氮唑盐溶液新鲜配制并尽快用完，这严重限制了四氮唑盐的用途，尤其是在需要有一定保质期的培养、鉴定、药敏试剂或产品方面的应用。2、事实上，四氮唑类物质对细菌生长或大或小均有毒性，研究表明，四氮唑盐TTC含量在0.005％时，革兰氏阴性菌红色指示效果最佳，且对细菌影响也较小，但对大多数革兰氏阳性菌(如分枝杆菌等)，呈现较强的抑制作用，若再降低使用浓度，其对阳性菌指示效果不佳。例如，若将TTC做指示剂进行食品微生物集落计数测定，可能会误使微生物超标的不合格食品错判为合格食品。3、不能事先加入到一些慢生菌(如分枝杆菌、真菌等)的培养基中指示其生长，尤其是结核分枝杆菌。应该说四氮唑类在细胞培养及快速生长细菌的培养、鉴定、药敏已经用得非常广泛，但在分枝杆菌尤其是结核分枝杆菌使用上受到限制，原因是：(1)结核分枝杆菌生长要求的营养条件非常苛刻，对四氮唑类物质更加敏感，加入的量大了抑制其生长、小了看不到颜色的变化；(2)结核分枝杆菌生长极其缓慢(繁殖一代的周期需18-20小时)，一方面能量代谢非常低下，生长初始只有少量菌量时根本不能使指示剂还原显色。另一方面，37℃几天、十几天甚至二十几天的培养，培养基中的四氮唑盐很容易降解，降低了四氮唑盐的指示能力。因此，目前通常的方法是，先不将四氮唑盐加入到培养基中，而是先对结核分枝杆菌进行一段时间(一般7-10天)的培养，等长到一定的菌量(这个量裸眼基本能看到了)，此时再加入四氮唑盐，2-4小时后显色，以确定菌的死活，或对菌量进行定量(测定光密度吸收值)。针对以上四氮唑盐指示细菌生长出现的问题，本领域需要找到解决策略，以简化操作步骤，提高检测效率和检测准确性。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供检测微生物的试剂和方法。在本专利技术的第一方面，提供一种指示微生物生长的指示管，其特征在于，所述的指示管包括：一容器；以及置于该容器内部的颗粒，所述的颗粒包括：50-600目的粒状物以及附着于该粒状物表面的氧化还原指示剂。在一个优选例中，所述的粒状物的大小是100-400目；更佳地是150-300目；最佳地是200目。在另一优选例中，所述的粒状物的形状选自(但不限于)：球形、椭球形、立方体形、长方体形、柱形、锥形或不规则形状。在另一优选例中，所述的氧化还原指示剂是自身具有氧化还原性质的有机试剂，能在特定的电极电位发生明显的颜色变化本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种指示微生物生长的指示管，其特征在于，所述的指示管包括：一容器；以及置于该容器内部的颗粒，所述的颗粒包括：５０－６００目的粒状物以及附着于该粒状物表面的氧化还原指示剂。

【技术特征摘要】
1.一种指示微生物生长的指示管，其特征在于，所述的指示管包括：
一容器；以及置于该容器内部的颗粒，所述的颗粒包括：50-600目的粒状物
以及附着于该粒状物表面的氧化还原指示剂。
2.如权利要求1所述的指示管，其特征在于，所述的颗粒表面还附着有能进
行质子传递的物质和/或稳定剂。
3.如权利要求1所述的指示管，其特征在于，所述的氧化还原指示剂选自：
四氮唑盐，亚甲基蓝，忍天青或其组合；和/或
所述的能进行质子传递的物质选自：吩嗪甲基硫酸盐，吩嗪乙基硫酸盐或
其组合；和/或
所述的稳定剂是无机酸或有机酸；较佳地选自：硼酸，柠檬酸或琥珀酸或
其组合。
4.如权利要求1所述的指示管，其特征在于，所述的粒状物是硅胶颗粒。
5.如权利要求1所述的指示管，其特征在于，所述的指示管还包括：一可密
封所述容器的盖子。...

【专利技术属性】
技术研发人员：綦迎成，李君莲，张子羿，丁元生，
申请(专利权)人：新疆维吾尔自治区胸科医院，上海积彩医疗器械有限公司，
类型：发明
国别省市：65