用于治疗脊髓增生病的JAK抑制剂制造技术

本发明专利技术提供了在哺乳动物中治疗脊髓增生病、脊髓发育异常综合征和其它其中ＪＡＫ２的活化对病理学有贡献的疾病的方法，该方法包括对哺乳动物给用有效量的稠合的吡咯并咔唑衍生物，其中稠合的吡咯并咔唑衍生物抑制ＪＡＫ２的活化。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及脊髓增生病(NfPDs)和脊髓发育异常综合征的治疗。具体地说，本专利技术涉及使用作为JAK2抑制剂的化合物，特别是使用稠合吡咯并咔唑化合物来治疗MPDs和脊髓发育异常综合征。
技术介绍
脊髓增生病(MPDs)是一种特征在于一种或多种造血谱系超量产生的无性系恶性病，该造血谱系具有导致细胞过多骨髓(BM)的相对正常的分化。认为MPDs出现在单一的多能祖细胞或干细胞中，其支配BM和血液。经过培养的得自MPDs患者的造血祖细胞显示生长性改变和生长因子非依赖性。对于某些MPDs的分子基础还不清楚的，直到一系列新近的报告识别了在JAK2的假激酶(pseudokinase)结构域中的单个氨基酸替换V617F，在真性红细胞增多症(PV)、特发性血小板增多(ET)和慢性特发性骨髓纤维化(CIMF)中作为盛行的分子损害。这一突变在75％-97％的PV患者和约40％-50％的ET和CIMF患者中被发现(James等人，2005，Trends in Molecular Medicine 11，546-554)。重要地是，在85种其它激酶的自抑制性(autoinhibitory)结构域或激酶结构域中没有发现其它的突变(Levine等人，2005，Cancer Cell 7，387-397)。另外，还在脊髓发育异常综合征(MDS)中识别了V617F突变。基于预测的JAK2结构，V617F置换破坏了JH2与蛋白质的激酶(JH1)结构域之间的自抑制性相互作用。因此，V617F突变体具有组成活性并且当在BaF3/EPOR细胞中表达时被赋予生长因子非依赖性和组成STAT5活化(Levine等人，Cancer Cell 2005，7，387-397；Kralovics等人，2005，N.Engl J.Med.352，1779-1790))。运载V617F突变的红系祖细胞当缺乏外源性红细胞生成素(EPO)时生长并形成内源性红系集落(EEC)(MPDs的一个标志)，并且siRNA介导的JAK2失活减少EEC形成。最后，用表达V617F突-->变体而非野生型JAK2的鼠骨髓细胞进行移植的小鼠发展成的病理特征密切地相似于人中的PV，包括血红蛋白/血细胞比容的高度增加，白细胞增多，巨核细胞增生，骨髓外造血，导致脾大(spleenomegaly)和骨髓的骨髓纤维化(James等人，2005，Nature 434，1144-1148；Wemig等人，2006，Blood.2006 Feb 14，[先于印刷的电子公开])。临床上，CIMF患者中突变体的存在与更具攻击性的疾病和显著更差的存活率有关(Campbell等人，2006，Blood，2098-2100)。本领域需要抵制与突变的或活化的JAK2有关的表现型和用于治疗与JAK2活化有关的骨髓增生性疾病和脊髓发育异常综合征。
技术实现思路
受体结合型酪氨酸激酶(trk)是跨膜蛋白，其包含胞外配体结合结构域、跨膜序列和胞质酪氨酸激酶结构域。酪氨酸激酶在细胞信号转导中发挥作用。细胞增殖、分化、移行、代谢和程序死亡死亡是酪氨酸激酶介导的细胞应答的实例。JAK2是非受体酪氨酸激酶。已经发现JAK2抑制剂可被用来治疗脊髓增生病和其它的其中JAK2的组成型表达对病理状态有贡献的疾病。因此本专利技术提供了使用包含稠合吡咯并咔唑衍生物的组合物来治疗脊髓增生病和相关病症的方法。可用本专利技术的方法治疗的与活化JAK2有关的脊髓增生病和相关病症包括但不限于骨髓增生性疾病，诸如，例如真性红细胞增多症(PV)、特发性血小板增多(ET)、伴骨髓外化生的骨髓纤维化(MMM)(也被称作慢性特发性骨髓纤维化(CIMF))、未分类的脊髓增生病(uMPDs)、嗜酸性白细胞增多综合征(HES)和系统性肥大细胞增多症(SM)。在本专利技术的方法中，将治疗有效量的JAK2抑制剂给用至受试者。-->对于平均体重为70千克的成人，给药方案可以是例如约20毫克约120毫克，每天两次。在一些实施方案中，对于通常成人的剂量为约40毫克到约100毫克，每天两次。在其它实施方案中，对于通常成人的剂量为约60毫克到约80毫克，每天两次。在本专利技术的方法中，在存在稠合吡咯并咔唑衍生物时，某些蛋白质的活性与不存在稠合吡咯并咔唑时相比被降低。这些蛋白质包括但是不限于JAK2、STAT5、STAT3、SHP2、GAB2、AKT和ERK。附图说明图1表示CEP-701对JAK2激酶活性的抑制。图2表示等位基因特异PCR(画面A)和限制酶切分析(画面B)的结果，所述试验的进行是为了证实在HEL92细胞中存在V617F突变。K562细胞(其不隐匿这一突变)用作野生型对照。画面A：对于等位基因特异PCR，突变体特异性引物产生诊断突变的203bp产物(箭头)；364bp产物用作PCR的内对照。M，分子量标记；泳道1和2，是显示364bp突变体和野生型等位基因以及203bp突变体特异等位基因的HEL92细胞。泳道3，是仅显示364bp野生型等位基因的对照K562细胞。画面B：对于限制酶切分析，包括V617F突变的PCR产物从HEL 92和K562 DNA产生并且被BsaXI限制酶酶切消化。未消化的(用“-”表示)和被BsaXI消化的(用“+”表示)PCR产物用M(分子量的标记)表示。生成K562 DNA的预测的限制图谱。试验了每个细胞系的两个独立的DNA制备物。图3表示CEP-701对HEL 92细胞中JAK2/STAT信号发放的作用。HEL 92细胞与0.1μM、0.3μM、1.0μM和3.0μM的CEP-701培养24小时，如图所示。对JAK2/STAT信号发放的作用的评价通过如图所示的使用磷酸特异性STAT3和STAT5抗体的蛋白质印迹进行，或者通过JAK2的免疫沉淀/蛋白质印迹规程IP/WB)进行：总的JAK2抗体用于IP并且通过使用磷酸酪氨酸抗体的WB评价磷酸化作用。Bclx1的表达通过蛋白质印迹测定。图4表示CEP-701对HEL92细胞生长的作用。如图所示，HEL92-->细胞与浓度渐增的CEP-701培养24小时和48小时。对细胞生长的作用通过MTS试验评价。在10％FCS(画面A和B)或没有血清(画面C和D)中进行实验。画面A系显示了在10％胎牛血清(FBS)存在的条件下培养24小时的结果。画面B表示在10％FBS存在的条件下培养48小时的结果。画面C表示在不存在FBS的条件下培养24小时的结果。画面D表示在不存在FBS的条件下培养48小时的结果。对于画面A-D，将渐增量的CEP-701加入到单独的培养基中(如阴影条形图所示)；未经处理的细胞在第一条形图中示出。图5表示在每24小时补充化合物的条件下CEP-701对HEL92细胞生长的作用。HEL92细胞在2％FCS中与浓度渐增的CEP-701(如图所示)培养72小时。每24小时补充CEP-701。对细胞生长的作用通过MTS试验进行评价。未经处理的细胞在第一条形图中示出。图6表示CEP-701在HEL92细胞中对细胞程序死亡诱导的作用。HEL92细胞与浓度渐增的CEP-701(如图所示)培养24小时、48小时和72小时。细胞程序死亡的诱导通过组蛋白/DNA释放试验进行分析。画面A表示24小时试验本文档来自技高网...

【技术保护点】
治疗脊髓增生病的方法，该方法包括对患者给用治疗有效量的作为ＪＡＫ２抑制剂的化合物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US 2006-7-21 60/832,627;US 2007-7-19 11/880,0631.治疗脊髓增生病的方法，该方法包括对患者给用治疗有效量的作为JAK2抑制剂的化合物。2.权利要求1的方法，其中JAK2抑制剂是稠合的吡咯并咔唑。3.治疗脊髓增生病的方法，该方法包括对患者给用治疗有效量的下式所示的化合物、或其立体异构体或可药用盐的形式，其中：环B和F独立地为苯基或杂芳基；R1独立地为H；烷基；芳基；芳基烷基；杂芳基；杂芳基烷基；-COR9；-OR10；-CONR7R8；-NR7R8；-(CH2)pNR7R8；-(CH2)pOR10；-O(CH2)pOR10；或-O(CH2)pNR7R8；R2独立地为H；-SO2R9；-CO2R9；-COR9；含1-8个碳的烷基；含2-8个碳的烯基；含2-8个碳的炔基；或含5-7个碳的单糖，其中单糖的每个羟基独立地任选地被以下基团替代：含1-4个碳的烷基、含2-5个碳的烷基羰基氧基或含1-4个碳的烷氧基；和其中烷基、烯基或炔基任选地被1-3个R27基团取代；其中当X为CHR16或NR16时，则R2和R16可任选地通过其2位和5位结合在一起形成连接呋喃并且其中连接呋喃的2位和5位任选地分别被R28和R29取代；和连接呋喃的3位被R17和R18二取代；R3，R4，R5和R6独立地为H；芳基；杂芳基；F；Cl；Br；I；-CN；-CF3；-NO2；-OR10；(CH2)pOR10；-O(CH2)pNR7R8；-OCOR9；-OCONHR9；-CH2OR14；-NR7R8；-NR10COR9；-NR10CO2R9；-NR10CONR7R8；-S(O)yR11；-CO2R9；-COR9；-CONR7R8；-CHO；-CH＝NOR11；-CH＝NR9；-CH＝NNR12R13；-(CH2)pS(O)yR9；-CH2SR15；-CH2S(O)yR14；-(CH2)pNR7R8；-(CH2)pNHR14；含1-8个碳的烷基；含2-8个碳的烯基；或含2-8个碳的炔基；其中烷基、烯基或炔基各自任选独立地被1-3个R27取代；X是：含1-3个碳并任选被至少一个以下基团取代的亚烷基：OH、＝O、＝NOR11、OR11、-OCOR9、-OCONR7R8、-O(CH2)pNR7R8、-O(CH2)pOR10、芳基、芳基烷基、杂芳基、-SO2R9；-CO2R9、-COR9、含1-8个碳的烷基、含2-8个碳的烯基、含2-8个碳的炔基、或含5-7个碳的单糖，其中单糖的每个羟基独立地任选地被以下基团替代：含1-4个碳的烷基、含2-5个碳的烷基羰基氧基或含1-4个碳的烷氧基；和其中烷基、烯基或炔基任选地被1-3个R27基团取代；-O-；-S(O)y-；N(R16)；CHR16；-CH2Z-；-Z-CH2-；或-CH2ZCH2-；其中Z为C(OR11)(R11)、O、S、C(＝O)、C(＝NOR11)或NR11；其中当X为CHR16或NR16时，则R2和R16可任选地通过其2位和5位结合在一起形成连接呋喃并且其中连接呋喃的2位和5位任选地分别被R28和R29取代；和连接呋喃的3位被R17和R18二取代；A1和A2独立地为H、-OR11、-SR11或-N(R11)2；或者结合在一起形成＝O、＝S或＝NR11的部分；B1和B2独立地为H、-OR11、-SR11或-N(R11)2；或者结合在一起形成＝O、＝S或＝NR11的部分；前提条件是A1和A2、或B1和B2的至少一对结合在一起形成＝O；R7和R8独立地为H或含1-4个碳的烷基；或者，与其所连接的氮一起形成5-7元杂环烷基；R9独立地为含1-4个碳的烷基、芳基或杂芳基；R10独立地为H或含1-4个碳的烷基；R11独立地为H、含1-4个碳的烷基、含6-10个碳的芳基或杂芳基；R12和R13独立地为H、烷基、含6-10个碳的芳基或杂芳基；或者，与其所连接的氮一起形成5-7元杂环烷基；R14独立地为氨基酸的在除去羧基的羟基之后的残基；R15独立地为含1-4个碳的烷基；R16独立地为H、含1-4个碳的烷基、含2-8个碳的烯基、含2-8个碳的炔基、芳基或杂芳基；其中烷基、烯基、炔基、芳基或杂芳基各自任选独立地被1-3个R27取代或者当X为CHR16或NR16时，则R2和R16可任选地通过其2位和5位结合在一起形成连接呋喃并且其中连接呋喃的2位和5位任选地分别被R28和R29取代；和连接呋喃的3位被R17和R18二取代；R17独立地为OH、含1-6个碳的O-正-烷基或含2-6个碳的O-酰基；R18独立地为H；含1-4个碳的烷基；CONHC6H5；CH2Y，其中Y为OR19、SOR20、NR21R22或SR23；N3；CO2R15；S-GIc；CONR24R25；CH＝NNHCONH2；CONHOR10；CH＝NOR10；CH＝NNHC(＝NH)NH2；CH＝NN(R26)2；或CH2NHCONHR16；或者R17和R18可以任选地结合在一起形成-CH2NHCO2-、-CH2OC(CH3)2O-、＝O或-CH2N(CH3)CO2-；R19独立地为H、含1-4个碳的烷基或含2-5个碳的酰基；R20独立地为含1-4个碳的烷基、芳基或含氮原子的杂环烷基；R21和R22独立地为H、含1-4个碳的烷基、Pro、Ser、Gly、Lys或含2-5个碳的酰基，前提条件是R21和R22中只有一个为Pro、Ser、Gly、Lys或酰基；R23独立地为芳基、含1-4个碳的烷基或含氮原子的杂环烷基；R24和R25独立地为H；含1-6个碳的烷基；苯基；或含1-6个碳的羟基烷基；或者，与其所连接的氮一起形成5-7元杂环烷基；R26独立地为芳基；R27独立地为芳基；杂芳基；F；Cl；Br；I；-CN；-NO2；-OR10；-O(CH2)pNR7R8；-OCOR9；-OCONHR9；O-四氢吡喃基；-NR7R8；-NR10COR9；-NR10CO2R9；-NR10CONR7R8；-NHC(＝NH)NH2；-NR10SO2R9；-S(O)yR11；-CO2R9；-CONR7R8；-CHO；-COR9；-CH2OR7；-CH＝NNR12R13；-CH＝NOR11；-CH＝NR9；-CH＝NNHCH(N＝NH)NH2；-SO2NR12R13；-P(＝O)(OR11)2；或-OR14；R28独立地为含1-4个碳的烷基、含1-4个碳的烷氧基、含7-10个碳的芳基烷基、-(CH2)pOR10、-(CH2)pOC(＝O)NR7R8或-(CH2)pNR7R8；R29独立地为H、含1-4个碳的烷基、含1-4个碳的烷氧基、含7-10个碳的芳基烷基、-(CH2)pOR10、-(CH2)pOC(＝O)NR7R8或-(CH2)pNR7R8；p为1-4的整数；和y为0、1或2。4.权利要求3的方法，其中化合物具有下式所示的结构、或其立体异构体或可药用盐的形式：其中：R1独立地为H；烷基；苯基；含7-10个碳的芳基烷基；5-6元杂芳基；杂芳基烷基；-COR9；-OR10；-CONR7R8；-NR7R8；-(CH2)pNR7R8；-(CH2)pOR10；-O(CH2)pOR10；或-O(CH2)pNR7R8；R3，R4，R5和R6独立地为H；苯基；5-6元杂芳基；F；Cl；Br；I；-CN；CF3；-NO2；-OR10；(CH2)pOR10；-O(CH2)pNR7R8；-OCOR9；-OCONHR9；-CH2OR14；-NR7R8；-NR10COR9；-NR10CO2R9；-NR10CONR7R8；-S(O)yR11；-CO2R9；-COR9；-CONR7R8；-CHO；-CH＝NOR11；-CH＝NR9；-CH＝NNR12R13；-(CH2)pS(O)yR9；-CH2SR15；-CH2S(O)yR14；-(CH2)pNR7R8；-(CH2)pNHR14；含1-8个碳的烷基；含2-8个碳的烯基；或含2-8个碳的炔基；其中烷基、烯基或炔基任选地被1-3个R27基团取代；X为-CH-或N；A1和A2独立地为H、-OR11、-SR11或-N(R11)2；或者，结合在一起形成＝O、＝S或＝NR11部分；B1和B2独立地为H、-OR11、-SR11或-N(R11)2；或者，结合在一起形成＝O、＝S或＝NR11部分；前提条件是A1和A2、或B1和B2的至少一对结合在一起形成＝O；R7和R8独立地为H或含1-4个碳的烷基；或者，与其所连接的氮一起形成5-7元杂环烷基；R9独立地为含1-4个碳的烷基、芳基或杂芳基；R10独立地为H或含1-4个碳的烷基；R11独立地为H、含1-4个碳的烷基、含6-10个碳的芳基或杂芳基；R12和R13独立地为H、烷基、含6-10个碳的芳基或杂芳基；或者，与其所连接的氮一起形成5-7元杂环烷基；R14独立地为氨基酸的在除去羧基的之后的残基；R15独立地为含1-4个碳的烷基；R16独立地为H、含1-4个碳的烷基、芳基或杂芳基；R17独立地为OH、含1-6个碳的O-正-烷基或含2-6个碳的O-酰基；R18独立地为H；含1-4个碳的烷基；CONHC6H5；CH2Y，其中Y为OR19、SOR20、NR21R22或SR23；N3；CO2R15；S-Glc；CONR24R25；CH＝NNHCONH2；CONHOR10；CH＝NOR10；...

【专利技术属性】
技术研发人员：帕维尔多布然斯基，布鲁斯A鲁杰里，
申请(专利权)人：赛福伦公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]