【技术实现步骤摘要】
一种基于连续光近红外激发的多光子结构光照明超分辨成像方法
[0001]本专利技术涉及光学显微领域,尤其涉及一种基于连续光近红外激发的多光子结构光照明超分辨成像方法
。
技术介绍
[0002]传统的光学显微由于光学衍射极限的限制,横向分辨率仅为
200nm
左右,无法对更小的生物分子和结构进行观察,结构光照明显微镜
(Structured illumination microscopy,SIM)
以其成像速度快
、
光毒性小
、
无需特殊荧光标记等优势,已成为生命科学领域尤其是活细胞成像中最受欢迎的超分辨成像手段
。
典型的线性
SIM(Linear SIM,L
‑
SIM)
可获得普通宽场成像显微镜约2倍的分辨率提升,非线性
SIM(Nonlinear SIM,NL
‑
SIM)
通过引入非线性效应可在
L
‑
SIM
的基础上进一步拓展成像分辨率,非线性效应包括饱和非线性效应和多光子非线性效应
。
[0003]在饱和结构光超分辨技术中,利用荧光分子的饱和激发产生非线性饱和结构光,进一步提高了成像分辨率,然而饱和非线性效应通常依赖超高光强,极易造成严重的荧光漂白现象,难以实现活细胞长时间成像,类似地,现有的多光子非线性
SIM
的实现需要依赖高功率脉冲光,且多光子数较低,一般为2,无法实现更高阶的多光子数 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.
一种基于连续光近红外激发的多光子结构光照明超分辨成像方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1、
将近红外连续光调制为条纹激发光场,激发携带上转换纳米探针的成像样品,实现多光子结构光照明成像,其中多光子非线性效应,包括双光子
、
三光子和四光子非线性效应;
S2、
采集多光子结构光照明显微原始图像,其中包括多个条纹结构光方向和相位不同的荧光结构光图像;
S3、
对采集的原始图像进行后期算法处理,重构出超分辨图像
。2.
根据权利要求1所述的连续光近红外激发的多光子结构光照明超分辨成像方法,其特征在于,步骤
S1
中使用的激发光是波长为
980nm、800nm
和
730nm
的近红外连续激光
。3.
根据权利要求2所述的连续光近红外激发的多光子结构光照明超分辨成像方法,其特征在于,步骤
S1
中通过近红外连续光激发由
Tm
3+
作为激活离子
、Yb
3+
作为敏化剂共掺杂的上转换纳米颗粒产生非线性双光子
、
三光子和四光子过程,实现条纹结构光场的压缩
。4.
根据权利要求3所述的连续光近红外激发的多光子结构光照明超分辨成像方法,其特征在于,非线性结构光可表示为其中
I(r)
为激发光光强,
m
为条纹结...
【专利技术属性】
技术研发人员:王保举,张鹏,潘彬雄,刘子叶,陈智睿,詹求强,
申请(专利权)人:华南师范大学,
类型:发明
国别省市:
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。