一种牛胚胎的体外培养液及培养方法技术

本发明专利技术申请提供一种牛胚胎的体外培养液及培养方法，属于牛胚胎的体外培养技术领域，包括如下材料：氯化钠

【技术实现步骤摘要】
一种牛胚胎的体外培养液及培养方法


[0001]本专利技术申请涉及牛胚胎的体外培养
，具体涉及一种牛胚胎的体外培养液及培养方法
。

技术介绍

[0002]胚胎一般是指怀孕最初两个月内的幼体
。
囊胚
、
胚的早期发育和胚胎发育是一个连续过程
。
在体节时期，三个胚层都发生了变化
。
外胚层在背部中线凹陷成沟，称神经沟，沟的两岸称神经脊
。
神经脊逐渐接近
、
愈合，致使神经演变为纵贯胚体的神经管
。
神经管和神经脊将来演化为神经系统
。
内胚层随着胚体卷曲成管状，称原肠，原肠依部位又分为前肠
、
中肠和后肠，胚胎的体外培养是近些年来的新式培养技术，能够在体外完成胚胎的形成与发育
。
[0003]中国专利公开了（
CN108753689B
）牛体外受精胚胎培养的方法
。
该方法包括如下步骤：卵母细胞的采集和体外成熟；体外受精；胚胎体外培养及保存
。
在体外受精时，成熟的
COCs
在本专利技术受精培养液中培养，在胚胎体外培养时，将胚胎周围的颗粒细胞用剥卵针去除干净，放入胚胎培养液中培养，培养完毕后将可用胚胎在冷冻液中液氮冷冻保存
。
该方法呈现诸多如说明书所述优异技术效果
。
现如今的胚胎体外培养方法虽然也能够完成胚胎的体外培育，但其内并未设置有专门针对于精液的纯化与获能过程，从而无法提高获取的精子的质量与活性，无法提高受精卵形成的成功率，整体方法的应用效果不佳，为了解决上述问题，亟待需要一种牛胚胎的体外培养液及培养方法
。
[0004]专利技术申请内容有鉴于此，本专利技术申请提供一种牛胚胎的体外培养液及培养方法，本专利技术申请可以实现牛胚胎的稳定培养
。
[0005]为解决上述技术问题，本专利技术申请提供一种牛胚胎的体外培养液及培养方法，包括如下材料：氯化钠
、
葡萄糖
、
链霉素
、
半乳糖酸钙
、
胎牛血清
、
血清白蛋白
、
海藻糖与培养液基液
。
[0006]作为上述技术方案的进一步描述：所述果氯化钠
、
葡萄糖
、
链霉素
、
半乳糖酸钙
、
胎牛血清
、
血清白蛋白
、
海藻糖与培养液基液的重量份数分别为1‑3份
、3
‑5份
、1
‑3份
、4
‑6份
、8
‑
10
份
、7
‑
10
份
、2
‑6份与
14
‑
20
份，其中培养液基液为
SOF
液
。
[0007]本文还公开了一种牛胚胎的体外培养方法，包括如下步骤：
S1、
从液氮罐中取出一支冻存的牛精液细管，并将其立即置于水体中进行一段时间的水浴；
S2、
将解冻后的牛精液进行纯化处理；
S3、
使用吸液器将沉淀在纯化液底层的精液吸取，加入培养箱内，加入体外培养液，向培养箱内通入二氧化碳一段时间；
S4、
取体外培养的卵母细胞，置于培养箱内，箱内注入
S3
内获取的牛精液；
S5、
调节培养箱内的温度及二氧化碳浓度，培养一段时间，且利用卵针去除卵丘细胞；
S6、
等待一段时间，观察卵裂率；
S7、
将受精后的卵母细胞取出，对其进行多次清洗；
S8、
将清洗后的受精卵继续移入培养箱内，注入体外培养液，等待定时换液；
S9、
等待胚胎发育
。
[0008]作为上述技术方案的进一步描述：所述
S1
中，从液氮罐中取出一支冻存的牛精液细管，并将其立即置于
35
‑
40℃
水体中进行2‑
5min
的水浴
。
[0009]作为上述技术方案的进一步描述：所述
S2
中，将解冻后的牛精液进行纯化处理，具体过程为，使牛精液缓慢流入梯度纯化液中，以
2500
‑
2800r/min
的速率离心处理
13
‑
18min。
[0010]作为上述技术方案的进一步描述：所述
S3
中，使用吸液器将沉淀在纯化液底层的精液吸取，加入培养箱内，加入体外培养液，向培养箱内通入二氧化碳
15
‑
20min
，使牛精子获能
。
[0011]作为上述技术方案的进一步描述：所述
S5
中，调节培养箱内的温度至
38
‑
42℃
，调节二氧化碳浓度为5‑8％，培养8‑
11h
，且利用卵针去除卵丘细胞
。
[0012]作为上述技术方案的进一步描述：所述
S6
中，等待2‑3天，观察卵裂率
。
[0013]作为上述技术方案的进一步描述：所述
S7
中，将受精后的卵母细胞取出，对其进行5‑8次的清洗
。
[0014]作为上述技术方案的进一步描述：所述
S8
中，将清洗后的受精卵继续移入培养箱内，注入体外培养液，等待
90
‑
100h
进行换液
。
[0015]综上所述，与现有技术相比，本申请包括以下至少一种有益技术效果：
1、
该方法设置有对于牛精液的纯化处理过程，能够将一些无用的或死亡的精子进行去除，从而能够获取最优质的活性最高的精子，同时在后续还设置有专门针对于筛选后的精子的获能过程，从而能够有效提高筛选后精子的活性，为后续的受精奠定了坚实的基础，提高了受精成功率
。
[0016]2、
该方法在后续对于培养的受精卵进行处理时，利用卵针去除卵丘细胞，能够有效避免培养过程中受精卵受到污染，提高胚胎发育效果，整体方法实际应用效果好
。
附图说明
[0017]图1为本专利技术申请一种牛胚胎的体外培养液的培养方法的流程图
。
具体实施方式
[0018]为使本专利技术申请实施例的目的
、
技术方案和优点更加清楚，下面将结合本专利技术申请实施例的附图1，对本专利技术申请实施例的技术方案进行清楚
、
完整地描述
。
显然，所描述的
实施例是本专利技术申请的一部分实施例，而不是全部的实施例
。
基于所描述的本专利技术申请的实施例，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种牛胚胎的体外培养液，其特征在于：包括如下材料：氯化钠
、
葡萄糖
、
链霉素
、
半乳糖酸钙
、
胎牛血清
、
血清白蛋白
、
海藻糖与培养液基液
。2.
根据权利要求1所述的一种牛胚胎的体外培养液，其特征在于：所述果氯化钠
、
葡萄糖
、
链霉素
、
半乳糖酸钙
、
胎牛血清
、
血清白蛋白
、
海藻糖与培养液基液的重量份数分别为1‑3份
、3
‑5份
、1
‑3份
、4
‑6份
、8
‑
10
份
、7
‑
10
份
、2
‑6份与
14
‑
20
份，其中培养液基液为
SOF
液
。3.
一种牛胚胎的体外培养方法，其特征在于：包括如下步骤：
S1、
从液氮罐中取出一支冻存的牛精液细管，并将其立即置于水体中进行一段时间的水浴；
S2、
将解冻后的牛精液进行纯化处理；
S3、
使用吸液器将沉淀在纯化液底层的精液吸取，加入培养箱内，加入体外培养液，向培养箱内通入二氧化碳一段时间；
S4、
取体外培养的卵母细胞，置于培养箱内，箱内注入
S3
内获取的牛精液；
S5、
调节培养箱内的温度及二氧化碳浓度，培养一段时间，且利用卵针去除卵丘细胞；
S6、
等待一段时间，观察卵裂率；
S7、
将受精后的卵母细胞取出，对其进行多次清洗；
S8、
将清洗后的受精卵继续移入培养箱内，注入体外培养液，等待定时换液；
S9、
...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐美芳，汪聪勇，魏盼辉，段凯，崔文广，韩帅，栗敏杰，吕博博，张亚芳，潘黎明，邱峰，杜鹃，生卫东，陈志楠，李盼，李红婵，
申请(专利权)人：河南省鼎元种牛育种有限公司，
类型：发明
国别省市：