诊断SARS-CoV-2感染的方法和试剂技术

本发明专利技术涉及用于诊断SARS

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】诊断SARS
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2感染的方法和试剂


[0001]本专利技术涉及用于诊断SARS
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2感染的方法，所述方法包括检测来自受试者的样品中针对SEQ ID NO：1的抗体优选IgA类抗体的存在或不存在的步骤，用于冠状病毒感染的鉴别诊断的方法，针对 SEQ ID NO：1的抗体优选IgA类抗体用于诊断SARS
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2感染或用于鉴别诊断冠状病毒感染优选用于区分SARS
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2、MERS和 NL63、229E、OC43和HKU1感染的用途，以及试剂盒，其包含含有SEQ ID NO：1或其变体的多肽，所述多肽优选包被在诊断上有用的承载体上，以及选自包含以下的组的一种或多种、优选所有试剂：针对SEQ ID NO：1的抗体；洗涤缓冲液；用于检测抗体的存在的工具，所述抗体优选为IgA类抗体；优选与IgA类抗体特异性结合的第二抗体，所述第二抗体优选包含可检测标记；和稀释缓冲液。

技术介绍

[0002]分离出一种新型冠状病毒，并根据其系统发育、分类学和既定惯例，冠状病毒研究组(CSG)将其识别为严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS
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1)的姐妹株，并将其标记为严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS
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2)。尽管SARS
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2的病原性通常低于 SARS
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1和中东呼吸综合征冠状病毒(MERS
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CoV)，但它具有相对高的传播性。由于症状可能很轻微并且可能与感冒相混淆，因此存在患者可能不知道自己已被感染并可能帮助病毒进一步传播的危险。
[0003]SARS
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2是一种冠状病毒，其具有四种主要结构蛋白，特别是刺突蛋白(S)、包膜蛋白(E)、膜蛋白(M)和核衣壳蛋白(N)。 N蛋白拥有RNA基因组，而其他三种结构蛋白是病毒包膜的组分。S 蛋白负责允许病毒附着并融合至宿主细胞的膜。它包含介导附着的S1 结构域和介导病毒细胞膜与宿主细胞的融合的S2结构域。S1结构域包含受体结合结构域(RBD)，其是人宿主细胞上受体血管紧张素转化酶2(ACE2)的结合位点。因此，RBD是阻断病毒与其宿主细胞之间的相互作用从而赋予免疫力的中和抗体的结合位点。相对于高死亡率和严重疾病相关的SARS
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1和SARS
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2，存在与轻度和过往疾病相关的其他冠状病毒，例如冠状病毒229E、NL63、OC43 和HKU1。这些冠状病毒经常与普通感冒相关，特别是在儿童中。
[0004]由于高传播性和健康影响，用于诊断SARS
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2感染的可靠方法至关重要。过去，血清学和实时逆转录聚合酶链反应(RT
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PCR) 方法的组合被用来检测和确认冠状病毒感染。
[0005]RT
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PCR方法基于感兴趣的冠状病毒的一种或多种核酸，更特别地病毒核糖核酸(RNA)的检测。基于RT
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PCR的方法是快速的，并且基于来自咽喉或鼻咽拭子的样品，可以在疾病的第一周内用于检测 SARS
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2。但是，它们的有用性在很大程度上取决于样品中可检测到核酸的时间，其因病毒而异。特别地，对在疾病早期获得的样品进行的诊断测试得出的阴性结果可能是毫无意义的。此外，通常需要来自患者上呼吸道的样品。这样的样品的不恰当或不足的回收、延长的运输时间以及病毒RNA的相关降解或仪器故障也可能导致假阴性结果。因此，应检查几个样品，其中有来自感染的第1周的样品，和在3
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4周后获得的随访
样品。
[0006]Corman等人发表了用于检测SARS
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2的基于实时RT
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PCR 的测定(Corman VM,Landt O,Kaiser M等人,Detection of 2019novel coronavirus(2019
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nCoV)by real
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time RT
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PCR.Euro Surveill. 2020；25(3):2000045.doi:10.2807/1560
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7917.ES.2020.25.3.2000045)，其于2020年1月在WHO的网页上首次发布。
[0007]还经常使用血清学测试。这些测试基于针对某些病毒特异性抗原的抗体的检测。但是，血清学测定也存在严重障碍：
[0008]经常观察到的一个问题是它们有限的灵敏度。为了使血清学测定产生阳性结果，需要在患者血液中存在病毒抗原特异性抗体。通常，无法预测在新的病毒感染后首次产生和可检测抗体的时间点，因为它取决于多种因素，包括病毒本身、病毒载量即在给定量的患者血液中的病毒数量、与患者相关的因素(例如年龄，性别，健康状况，免疫状况等)、感兴趣的抗体的免疫球蛋白类别以及选择用于建立诊断测试的抗原靶标。尤其是在疾病的非常早期阶段，即在患者的身体能够以可检测的量引发特异性抗体反应之前，尽管存在感染，但血清学测定可能产生阴性结果。考虑到要检测的抗体是否属于某种免疫球蛋白 (Ig)类别，进一步的血清学测试可能有助于监测疾病的进程，并将急性与过去的感染或疫苗接种区别开来。因此，当前大多数可用于检测病毒感染包括SARS
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1感染的血清学测定都集中在IgG或IgG 和IgM类抗体的检测上。然而，除了由于抗体反应的固有延迟而特别地在感染的非常早期的阶段产生假阴性结果的风险外，用于诊断 SARS
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1感染的血清学测定还容易产生假阳性结果，推测是由于针对常见季节性冠状病毒(CoV)的抗体群体中高的血清阳性率和针对免疫原性病毒蛋白的保守部分的交叉反应性抗体的相关存在。针对这样的与抗原密切相关的季节性冠状病毒的这种交叉反应也不允许进行鉴别诊断，例如将威胁生命的变体SARS
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1与其他冠状病毒区分开。在Meyer,Drosten&M
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ller,Virus Research 194(2014)； 175
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186中综述了用于诊断和区分冠状病毒，特别是用于诊断 SARS
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1的血清学测定的挑战和陷阱。与早期冠状病毒的血清学诊断相关的这些多重挑战(例如，感染早期阶段的灵敏度差；和由交叉反应抗体的存在而导致的特异性差)也适用于检测最近出现的严重急性呼吸综合本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于诊断SARS
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2感染的方法，所述方法包括以下步骤：检测来自受试者的样品中针对SEQ ID NO：1的抗体优选IgA类抗体的存在或不存在。2.一种用于冠状病毒感染的鉴别诊断的方法，优选用于区分SARS
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CoV；优选SARS
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2；MERS、NL63、229E、OC43和HKU1感染的方法，其包括以下步骤：检测来自受试者的样品中针对SEQ ID NO：1的抗体、优选IgA和/或IgG类抗体、更优选IgA类抗体的存在或不存在。3.根据权利要求1或2中任一项所述的方法，其中除了检测针对SEQ ID NO：1的IgA类抗体之外，还检测针对SEQ ID NO：1的IgG和/或IgM类抗体的存在。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述样品是血液样品，优选地选自包含以下的组：全血、血清或血浆。5.根据权利要求1
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4中任一项所述的方法，其中使用标记的第二抗体检测针对SEQ ID NO：1的IgA类抗体，所述第二抗体优选结合IgA类抗体。6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中使用选自包含比色法、免疫荧光、酶活性检测、化学发光和放射活性的组的方法检测IgA抗体。7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中在早期阶段检测到感染。8.针对SEQ ID NO：1的抗体、优选IgA类抗体用于诊断SARS
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2感染或用于鉴别诊断冠状病毒感染的用途，优选用于区分SARS
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CoV...

【专利技术属性】
技术研发人员：K，
申请(专利权)人：柏林夏里特综合医药大学，
类型：发明
国别省市：