一种陈皮与枳实药材的多区域薄层鉴别区分方法技术

本发明专利技术涉及一种陈皮与枳实药材的多区域薄层鉴别区分方法。其特征在于：用甲醇溶解或超声分别得到对照品、供试品与对照药材溶液，在脂溶性区域检出了枳实的专属区别斑点3个，陈皮的专属区别斑点7个；在中极性区域检出了枳实的专属区别斑点2个，陈皮的专属区别斑点3个；在极性区域检出了枳实的专属区别斑点1个，陈皮的专属区别斑点3个。解决了多年来因二药材成分类似，无法采用薄层鉴别区分的难题，为不同工艺制备的含陈皮和枳实复方制剂，提供了多区域同时鉴别参考方法。方法简便、快捷、高效，在不同的区域具有不同的专属区别斑点，为首次报道。

A multi region TLC method for the identification of tangerine peel and Fructus aurantii

【技术实现步骤摘要】
一种陈皮与枳实药材的多区域薄层鉴别区分方法
本专利技术涉及一种陈皮与枳实药材的多区域薄层鉴别区分方法。即，采用薄层鉴别的方法，在脂溶性、中极性和极性三个区域，寻找到有关陈皮和枳实药材的多成分专属区别斑点，用以区分两种药材及其组成的不同制剂。
技术介绍
中药陈皮和枳实都是中国药典历版所收载品种，陈皮为芸香科植物橘CitrusreticulataBlanco及其栽培变种的干燥成熟果皮；枳实则为芸香科植物酸橙CitrusaurantiumL.及其栽培变种或甜橙CitrussinensisOsbeck的干燥幼果；二者是同科不同种的植物。经常听到的一句古语：“橘生淮南则为橘，生于淮北则为枳，叶徒相似，其实味不同。所以然者何？水土异也”，从另一个方面说明了橘和枳是很近似的植物，所含的化学成分也多类同。文献报道陈皮和枳实都含大量黄酮类化合物，如黄酮、黄烷酮、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮苷、芸香柚皮苷及多甲氧基黄酮类化合物等；生物碱也很类似如辛弗林和N-甲基酪胺等。所以目前在陈皮和枳实(或枳壳)都存在的复方制剂中都是以橙皮苷为对照，空白样品为双阴性，同时检出陈皮和枳实(或枳壳)【1、2】。文献1报道的香砂养胃软胶囊中陈皮、枳实定性鉴别方法如下：取香砂养胃软胶囊5粒，剪开，取出内容物，用乙醚洗涤两次，每次20ml，滤过，弃去滤液，药渣挥干乙醚，加甲醇20ml，超声提取20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙酸乙酯提取2次，每次20ml，合并提取液，水浴蒸干，残渣加水3～5ml，加热使溶解，滤过，滤液通过聚酰胺柱(内径2cm，长15cm，聚酰胺5g，柱层析用，14-30目)，以水50ml洗脱，弃去水液，再用70％乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。再取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。按处方配比模拟标准工艺制成缺陈皮、枳实的阴性样品，再按供试品溶液的制备方法，制成阴性样品溶液。吸取上述3种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水-冰醋酸(16∶8∶2∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷1％三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点，而阴性样品溶液在相应的位置上无上述主斑点。文献1的鉴别方法，繁琐、费时，仅样品处理就要花费时间5～6小时，有机溶剂150ml，而且还是以橙皮苷为对照，双阴性，无法识别样品中的陈皮与枳实。文献2报道的胃炎宁合剂中5种药材的薄层鉴别，其中陈皮和枳壳(枳实和枳壳是同一种植物酸橙，枳实是其干燥幼果，枳壳是其干燥未成熟果实)的同时鉴别方法如下：取胃炎宁合剂40ml，用乙酸乙酯振摇提取3次，每次40ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取橙皮苷对照品，加甲醇制成1mg·1ml-1的溶液，作为对照品溶液。再取陈皮和枳壳对照药材各1g，分别加乙酸乙酯15ml，浸渍24小时，过滤，滤液蒸干，同法制成两种对照药材溶液。再取缺陈皮与枳壳的阴性样品，同法制成阴性样品溶液。吸取供试品溶液和阴性样品溶液各10μl、两种对照药材、对照品溶液各5μl分别点于同一用0.5％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水(100∶17∶13)为展开剂，展开，展距约3cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-水(20∶10∶1∶1)的上层溶液为展开剂，展开，展距约8cm，取出，晾干，喷1％三氯化铝甲醇溶液，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点；阴性样品无此斑点。文献2的鉴别方法，虽然比文献1简化了，但样品前处理也要花费时间2小时，有机溶剂150ml，加上专制的碱性硅胶G薄层板和二次展开，也是比较麻烦的。仍然是以橙皮苷为对照，双阴性，也无法区别陈皮与枳壳。由上述两篇文献说明了目前陈皮与枳实的鉴别现状，不但方法繁琐、费时，重要的是薄层鉴别是无法区别二者的，也就是无法监控二者的投料情况。为解决复方制剂中陈皮和枳实无法同时鉴别的难题，提供简便、快捷，高效，易于普及推广的薄层鉴别区分方法，进行了陈皮和枳实的同时薄层鉴别区分斑点专题研究。在脂溶性、中极性和极性三个区域，寻找到陈皮和枳实药材的不同专属区别斑点，用以区别同一种制剂中的该两种药材。
技术实现思路
通过展开剂的不同组合与其比例、显色剂、薄层载体以及检测条件等参数研究，专利技术了陈皮和枳实药材的多区域薄层鉴别区分方法。即，用甲醇溶解或超声分别得到对照品、供试品与对照药材溶液，在脂溶性区域检出了枳实的专属区别斑点3个，陈皮的专属区别斑点7个；在中极性区域检出了枳实的专属区别斑点2个，陈皮的专属区别斑点3个；在极性区域检出了枳实的专属区别斑点1个，陈皮的专属区别斑点3个。解决了多年来因二药材成分类似，无法采用薄层鉴别区分的难题，为不同工艺制备的含陈皮和枳实复方制剂，提供了多区域同时鉴别参考方法。方法简便、快捷、高效，在不同的区域具有不同的专属区别斑点，为首次报道。以便更好地进行药材与复方制剂的质量评价与监督。本专利技术解决其技术问题所采用的方案为：(1)陈皮与枳实药材脂溶性成分薄层区别取陈皮药材0.2g、枳实药材0.1g、陈皮与枳实药材以重量比2∶1混合的混合物0.3g，分别加甲醇2ml，超声处理20分钟，上清液作为各自的供试品溶液；另取陈皮对照药材0.2g、枳实对照药材0.1g，同法制备各自对照药材溶液；吸取供试品溶液和对照药材溶液各5～6μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为6∶4∶2∶0.5的环己烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液的上层溶液为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视；药材的供试品色谱中，在与各自对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色的荧光斑点；混合物供试品色谱中，在与陈皮对照药材色谱相应的位置上，显5个相同荧光斑点，其中2个为陈皮的专属斑点；置紫外光灯254nm下检视；陈皮与混合物供试品色谱中，在与陈皮对照药材色谱相应的位置上，显2个棕褐色专属斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，枳实与混合物供试品色谱中，在与枳实对照药材色谱相应的位置上，显4个亮蓝色荧光斑点，其中3个为枳实专属斑点；陈皮与混合物供试品色谱中，在与陈皮对照药材色谱相应的位置上，显2～3个黄绿色荧光专属斑点，其中1个为鲜亮的黄绿色。(2)陈皮与枳实药材中极性成分薄层区别取柚皮苷和橙皮苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含柚皮苷1mg溶液，作为柚皮苷对照品溶液；橙皮苷加甲醇制成饱和溶液，作为橙皮苷对照品溶液；吸取对照品溶液各10μl、鉴别(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各5～6μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为6∶3∶3∶0.5的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，热风吹干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视；枳实与混合物供试品色谱中，在与枳实对照药材色谱相应的位置上，显2个相同的亮蓝色专属荧光斑点；陈皮与混合物供试品色谱中，在与陈皮对照药材色谱相应的位置上，显2～3个相同颜色荧光专属斑点；再置本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种陈皮与枳实药材的多区域薄层鉴别区分方法，其特征在于：(1)陈皮与枳实药材脂溶性成分薄层区别 取陈皮药材0.2g、枳实药材0.1g、陈皮与枳实药材以重量比2∶1混合的混合物0.3g，分别加甲醇2ml，超声处理20分钟，上清液作为各自的供试品溶液；另取陈皮对照药材0.2g、枳实对照药材0.1g，同法制备各自对照药材溶液；吸取供试品溶液和对照药材溶液各5～6μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为6∶4∶2∶0.5的环己烷‑乙酸乙酯‑甲醇‑浓氨试液的上层溶液为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视；药材的供试品色谱中，在与各自对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色的荧光斑点；混合物供试品色谱中，在与陈皮对照药材色谱相应的位置上，显5个相同荧光斑点，其中2个为陈皮的专属斑点；置紫外光灯254nm下检视；陈皮与混合物供试品色谱中，在与陈皮对照药材色谱相应的位置上，显2个棕褐色专属斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，枳实与混合物供试品色谱中，在与枳实对照药材色谱相应的位置上，显4个亮蓝色荧光斑点，其中3个为枳实专属斑点；陈皮与混合物供试品色谱中，在与陈皮对照药材色谱相应的位置上，显2～3个黄绿色荧光专属斑点，其中1个为鲜亮的黄绿色；(2)陈皮与枳实药材中极性成分薄层区别 取柚皮苷和橙皮苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含柚皮苷1mg溶液，作为柚皮苷对照品溶液；橙皮苷加甲醇制成饱和溶液，作为橙皮苷对照品溶液；吸取对照品溶液各10μl、鉴别(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各5～6μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为6∶3∶3∶0.5的三氯甲烷‑乙酸乙酯‑甲醇‑浓氨试液为展开剂，展开，取出，热风吹干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视；枳实与混合物供试品色谱中，在与枳实对照药材色谱相应的位置上，显2个相同的亮蓝色专属荧光斑点；陈皮与混合物供试品色谱中，在与陈皮对照药材色谱相应的位置上，显2～3个相同颜色荧光专属斑点；再置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与各自对照品和对照药材色谱相应的位置上，分别显一个共有的红色斑点，而陈皮与混合物供试品色谱中，在与陈皮对照药材色谱相应的位置上，还显3个棕色的专属斑点；(3)陈皮与枳实药材极性成分薄层区别 吸取(2)项下的对照品溶液10μl、供试品溶液和对照药材溶液各5～6μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为3∶2∶4∶0.5的三氯甲烷‑乙酸乙酯‑甲醇‑浓氨试液为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与各自对照品和对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色荧光斑点；置紫外光灯254nm下检视；供试品色谱中，在与各自对照品和对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置暗室内透过灯光检视，枳实和混合物供试品色谱中，在与柚皮苷和枳实对照药材色谱相应的位置上，分别显1个红色的专属斑点；陈皮和混合物供试品色谱中，在与橙皮苷和陈皮对照药材色谱相应的位置上，除显1个红色的专属斑点外，还在与陈皮对照药材色谱相应的位置上，显2个棕褐色专属斑点。...

【技术特征摘要】
1.一种陈皮与枳实药材的多区域薄层鉴别区分方法，其特征在于：(1)陈皮与枳实药材脂溶性成分薄层区别取陈皮药材0.2g、枳实药材0.1g、陈皮与枳实药材以重量比2∶1混合的混合物0.3g，分别加甲醇2ml，超声处理20分钟，上清液作为各自的供试品溶液；另取陈皮对照药材0.2g、枳实对照药材0.1g，同法制备各自对照药材溶液；吸取供试品溶液和对照药材溶液各5～6μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为6∶4∶2∶0.5的环己烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液的上层溶液为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视；药材的供试品色谱中，在与各自对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色的荧光斑点；混合物供试品色谱中，在与陈皮对照药材色谱相应的位置上，显5个相同荧光斑点，其中2个为陈皮的专属斑点；置紫外光灯254nm下检视；陈皮与混合物供试品色谱中，在与陈皮对照药材色谱相应的位置上，显2个棕褐色专属斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，枳实与混合物供试品色谱中，在与枳实对照药材色谱相应的位置上，显4个亮蓝色荧光斑点，其中3个为枳实专属斑点；陈皮与混合物供试品色谱中，在与陈皮对照药材色谱相应的位置上，显2～3个黄绿色荧光专属斑点，其中1个为鲜亮的黄绿色；(2)陈皮与枳实药材中极性成分薄层区别取柚皮苷和橙皮苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含柚皮苷1mg溶液，作为柚皮苷对照品溶液；橙皮苷加甲醇制成饱和溶液，作为橙皮苷对照品溶液；吸取对照品溶液各10μl、鉴别(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各5～6μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为6∶3∶3∶0.5的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，热风吹干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视；枳实...

【专利技术属性】
技术研发人员：牛丽颖，甄亚钦，高乐，王迎春，李葆林，王鑫国，
申请(专利权)人：河北中医学院，
类型：发明
国别省市：河北,13