一种肌肉缺损动物模型的建立方法技术

本发明专利技术涉及一种肌肉缺损动物模型的建立方法，属于医药领域。本发明专利技术的肌肉缺损动物模型的建立方法包括如下步骤：(1)备物、(2)麻醉、(3)剃毛、(4)消毒与画线、(5)分离、(6)切除建模、(7)植入缝合、(8)剪耳标、复苏与回笼、以及(9)拍照与记录。本发明专利技术创伤创面有时深达肌层，导致肌肉缺损，通过在大鼠动物实验中建立肌肉缺损模型，探讨对比合成支架及现有填充物对骨骼肌修复作用的效果，以寻求更好促进骨骼肌修复的生物材料，具有现实临床意义。

A Method for Establishing Animal Model of Muscle Defect

【技术实现步骤摘要】
一种肌肉缺损动物模型的建立方法
本专利技术属于医药领域，具体涉及一种肌肉缺损动物模型的建立方法。
技术介绍
在生理状况下，骨骼肌是一种非常稳定的组织。当骨骼肌受到物理损伤或者处于某种特殊疾病状况下，包括过度使用、外伤、感染以及丧失血液循环等，骨骼肌即造成损伤。在损伤状态下，骨骼肌能够自我修复和再生，这种再生功能主要依赖于卫星细胞的激活、增殖和分化。当受到损伤等刺激时，处于静息状态的卫星细胞会被激活，并且最终分化、融合形成多核的肌管细胞。卫星细胞的增殖和分化不仅能够增加肌纤维数量，还可以改变肌纤维的类型，而卫星细胞的多潜能性还可能通过转变为脂肪生成细胞，而增加肌内脂肪的含量，从而改变肌肉愈合的质量骨骼肌具有一定的修复能力，但是在反复过度使用、出现严重外伤或其它过程之后，该修复过程可能变得缓慢甚至无效。治疗骨骼肌损伤的目的在于促进骨骼肌纤维再生并同时抑制细胞外基质过度纤维化，防止瘢痕的形成，尽可能使损伤骨骼肌恢复正常收缩功能。研究证明，成纤维细胞生长因子，肝细胞生长因子、胰岛素样生长因子、血小板衍生物生长因子等能调节骨骼肌干细胞-卫星细胞的增殖，从而促进骨骼肌修复，另外，一些中药成分对于促进骨骼肌修复也具有良好作用。然而，目前并没有十分有效的促进骨骼肌修复的生物材料，因而寻求更好促进骨骼肌修复的生物材料尤其重要。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种新的肌肉缺损动物模型的建立方法，采用该方法能够获得大鼠肌肉缺损模型，更利于促进骨骼肌修复的生物材料的研究。为解决该技术问题，本专利技术提供的技术方案是：一种肌肉缺损动物模型的建立方法，包括如下步骤：(1)备物、(2)麻醉、(3)剃毛、(4)消毒与画线、(5)分离、(6)切除建模、(7)植入缝合、(8)剪耳标、复苏与回笼、以及(9)拍照与记录。所述步骤(1)备物步骤包括准备小动物麻醉机、异氟烷、支架材料、可即邦、灭菌手术器械、纱布、优力舒弹性绷带、无菌手术铺巾、剃毛机、脱毛膏、无菌手套和生理盐水，所述灭菌手术器械包括剪刀、镊子、持针器、圆针、角针和5.0缝线。所述步骤(2)麻醉包括取SD大鼠一只，异氟烷吸入麻醉，调整麻醉机维持麻醉。所述步骤(3)剃毛步骤包括取仰卧位，用剃毛机剃除后肢下段皮毛，然后用脱毛膏均匀涂抹剃毛区域，再擦干净脱毛膏。所述步骤(4)消毒与画线包括先用碘伏在皮肤表面消毒3次，以胫骨粗隆及胫骨跖骨交接处为标记点，用灭菌手术刀在大鼠后肢下段前外侧作一10mm左右纵行切口，与胫骨距离大约1-2mm，随后钝性分离皮肤与筋膜，在覆盖TA的筋膜上再做一10mm左右纵形切口，然后小心钝性分离筋膜，尽量保持其完整性。所述步骤(5)分离包括当TA暴露后，用精密手术钢尺与医用皮肤记号笔标记欲切除区域，位于TA中部1/3，长大约10mm，宽大约5mm，小止血钳钝性分离TA，用一薄不锈钢板插入TA下方。所述步骤(6)切除建模包括先用手术刀片沿标记线在缺损两端做水平切口，切口深度大概为肌肉厚度的1/3-1/2，避免把肌腱切断，然后沿标记做两条纵形切口，离TA近远中边缘大概2-3mm，四条切口首尾相接，用医用镊子提起欲切除区域边缘表浅组织，然后边翻起，边用手术刀片分离、切除，将切下的肌肉称重，然后继续切除直到切除肌肉重量达到TA总重量的20％左右。所述步骤(7)植入缝合包括将支架或可即邦进行适当裁剪后放置于缺损处，随后5-0可缝线分层缝合筋膜、皮肤，碘伏消毒后用压力绷带包扎5-10分钟。所述步骤(9)拍照与记录步骤包括开闪光灯，垂直手术面拍摄，远近保持在对焦圈和创面大小相近的距离，在创面下2-3cm的地方用长条纸进行标记，格式为：日期+处理+耳标+第几天，分别拍摄术后即时、第14、21、28天的创面情况，包括建模及植入后，计算公式为：W(TA)＝0.0017*W(body)-0.0716，单位：g。本专利技术的有益效果：(1)本专利技术选择4-8周龄的SD大鼠，体重约250g，胫骨前肌较大，便于建模与取材，实验动物选择合理。(2)本专利技术选择胫骨前肌，定位标志明显，部位固定，易于寻找，便于操作与实验观察记录，可重复性高。(3)本专利技术在建模过程中，分别缝合筋膜与皮肤，可保持植入物固定在位，防止因植入物移位导致的实验误差；缝线亦可作为取材时的定位标志，便于寻找植入物确切位置。(4)本专利技术创伤创面有时深达肌层，导致肌肉缺损，通过在大鼠动物实验中建立肌肉缺损模型，探讨对比合成支架及现有填充物对骨骼肌修复作用的效果，以寻求更好促进骨骼肌修复的生物材料，具有现实临床意义。附图说明图1为暴露胫骨前肌实验操作图。图2为制造肌肉缺损实验操作图。图3为放置材料实验操作图。图4为缝合固定实验操作图。图5为取材实验操作图。具体实施方式下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分数、比率、比例或份数按重量计。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域技术人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本专利技术方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。实施例1肌肉缺损动物模型的建立1、备物：小动物麻醉机、异氟烷、支架材料、可即邦、灭菌手术器械(剪刀、镊子、持针器、圆针、角针、5.0缝线)、纱布、优力舒弹性绷带、无菌手术铺巾、剃毛机、脱毛膏、无菌手套、生理盐水2、麻醉：取SD大鼠一只，异氟烷吸入麻醉，调整麻醉机维持麻醉。3、剃毛：取仰卧位，用剃毛机剃除后肢下段皮毛，然后用脱毛膏均匀涂抹剃毛区域，再擦干净脱毛膏。4、消毒与画线：先用碘伏在皮肤表面消毒3次，以胫骨粗隆及胫骨跖骨交接处为标记点，用灭菌手术刀在大鼠后肢下段前外侧作一10mm左右纵行切口，与胫骨距离大约1-2mm，随后钝性分离皮肤与筋膜。在覆盖TA的筋膜上再做一10mm左右纵形切口，然后小心钝性分离筋膜，尽量保持其完整性。5、分离：当TA暴露后，用精密手术钢尺与医用皮肤记号笔标记欲切除区域，位于TA中部1/3，长大约10mm，宽大约5mm。小止血钳钝性分离TA，用一薄不锈钢板插入TA下方，如图1-2所示。6、切除建模：先用手术刀片沿标记线在缺损两端做水平切口，切口深度大概为肌肉厚度的1/3-1/2，避免把肌腱切断。然后沿标记做两条纵形切口，离TA近远中边缘大概2-3mm，四条切口首尾相接。用医用镊子提起欲切除区域边缘表浅组织，然后边翻起，边用手术刀片分离、切除。将切下的肌肉称重，然后继续切除直到切除肌肉重量达到TA总重量的20％左右。7、植入缝合：将支架或可即邦进行适当裁剪后放置于缺损处，随后5-0可缝线分层缝合筋膜、皮肤，碘伏消毒后用压力绷带包扎5-10分钟，如图3-4所示。8、剪耳标、复苏、回笼。9、拍照与记录：开闪光灯，垂直手术面拍摄，远近保持在对焦圈和创面大小相近的距离，在创面下2～3cm的地方用长条纸进行标记，格式为：日期+处理+耳标+第几天(如20180501+con/KB/DS+L1/R1+D0/14/21/28)。分别拍摄术后即时、第14、21、28天的创面情况，包括建模及植入后。计算公式：W(TA)＝0.0017*W(本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种肌肉缺损动物模型的建立方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)备物、(2)麻醉、(3)剃毛、(4)消毒与画线、(5)分离、(6)切除建模、(7)植入缝合、(8)剪耳标、复苏与回笼、以及(9)拍照与记录。

【技术特征摘要】
2019.05.05 CN 20191036582561.一种肌肉缺损动物模型的建立方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)备物、(2)麻醉、(3)剃毛、(4)消毒与画线、(5)分离、(6)切除建模、(7)植入缝合、(8)剪耳标、复苏与回笼、以及(9)拍照与记录。2.根据权利要求1所述的肌肉缺损动物模型的建立方法，其特征在于，所述步骤(4)消毒与画线包括先用碘伏在皮肤表面消毒3次，以胫骨粗隆及胫骨跖骨交接处为标记点，用灭菌手术刀在大鼠后肢下段前外侧作一10mm左右纵行切口，与胫骨距离大约1-2mm，随后钝性分离皮肤与筋膜，在覆盖TA的筋膜上再做一10mm左右纵形切口，然后小心钝性分离筋膜，尽量保持其完整性。3.根据权利要求1所述的肌肉缺损动物模型的建立方法，其特征在于，所述步骤(5)分离包括当TA暴露后，用精密手术钢尺与医用皮肤记号笔标记欲切除区域，位于TA中部1/3，长大约10mm，宽大约5mm，小止血钳钝性分离TA，用一薄不锈钢板插入TA下方。4.根据权利要求1所述的肌肉缺损动物模型的建立方法，其特征在于，所述步骤(6)切除建模包括先用手术刀片沿标记线在缺损两端做水平切口，切口深度大概为肌肉厚度的1/3-1/2，避免把肌腱切断，然后沿标记做两条纵形切口，离TA近远中边缘大概2-3mm，四条切口首尾相接，用医用镊子提起欲切除区域边缘表浅组织，然后边翻起，边用手术刀片分离、切除，将切下的肌肉称重，然后继续切除直到切...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈蕾，冯景浩，陈雅南，吴军，祁少海，
申请(专利权)人：中山大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：广东,44