一种具有抗油脂氧化功能的活性肽及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种具有抗油脂氧化功能的活性肽及其制备方法和应用，属于植物源性的生物活性肽技术领域。本发明专利技术选用油料加工副产物即提油后油料作物作为原料，经过蛋白提取、红外预处理、蛋白酶解、冷冻干燥、提取亲脂部分和真空浓缩并干燥等步骤，制备得到了具有清除DPPH自由基、金属离子螯合、抑制脂质过氧化、延长植物油氧化诱导时间、增强乳液稳定性等功能特性的抗油脂氧化肽，可以作为天然抗氧化剂应用在油脂及其他含油脂食品的贮藏和保鲜中，解决油脂氧化致使产品劣变、产生有害产物的问题，延长食品货架期；本发明专利技术方法对于遏制油脂氧化、保障食品安全、促进技术进步具有重大的现实意义和社会意义。

An Active Peptide with Anti-lipid Oxidation Function and Its Preparation Method and Application

The invention discloses an active peptide with anti-lipid oxidation function, a preparation method and application thereof, belonging to the technical field of plant-derived bioactive peptide. The invention adopts the by-product of oil processing, namely, oil extraction and oilseed crops as raw materials, and through the steps of protein extraction, infrared pretreatment, proteolysis, freeze-drying, extraction lipophilic part and vacuum concentration and drying, the preparation has the functions of scavenging DPPH free radicals, chelating metal ions, inhibiting lipid peroxidation, prolonging the oxidation induction time of vegetable oils, and enhancing the stability of emulsion, etc. Anti-lipid oxidation peptides with energy characteristics can be used as natural antioxidants in the storage and preservation of oils and other oily foods to solve the problem of deterioration and harmful products caused by lipid oxidation and prolong the shelf life of foods; the method of the invention has great practical and social significance for curbing lipid oxidation, ensuring food safety and promoting technological progress.

【技术实现步骤摘要】
一种具有抗油脂氧化功能的活性肽及其制备方法和应用
本专利技术属于植物源性的生物活性肽
，具体涉及一种具有抗油脂氧化功能的活性肽及其制备方法和应用。
技术介绍
油脂在人们日常生活和化学工业上都占有十分重要的地位，而且随着食用油脂生产及加工技术的不断进步，油脂的应用范围已越来越广泛。作为食品工业的主要原料之一，其品质及抗氧化稳定性直接影响到食品质量的好坏。随着人民生活的不断改善，对食品质量的要求也日益提高。因此，深入了解和认识油脂的氧化作用过程，研究和开发延续油脂氧化作用的方法就显得十分重要。近年来，抗氧化肽因其来源广且安全性高成为备受瞩目的天然抗氧化剂。自从Pokorn提出“一些肽和蛋白水解物能降低自动氧化速率及脂肪过氧化物含量”后，抗氧化肽的研究引起了食品领域的广泛关注。与具毒副作用而被限量限制添加的合成抗氧化剂(BHA、BHT等)相比，抗氧化肽具有稳定性高、活性强、高营养、易吸收、安全低毒等诸多优势。目前抗氧化肽在食品系统的应用主要集中于肉质品，通过抑制或延缓脂质过氧化从而达到抗氧化保鲜的目的。目前研究的抗氧化肽由于其低油溶性使得其无法应用于油脂体系，无法解决植物油氧化带来的安全隐患与经济损失。国内外关于抗氧化肽在油脂中的应用研究较少，抗氧化肽对植物油影响的研究尚停留在抗氧化的初级阶段，通过研究分子供氢能力与金属离子螯合作用表明其抗油脂氧化能力，如何提取能够用于油脂中的抗氧化肽以及抗氧化肽在植物油体系中的作用机制仍有待进一步研究探讨。
技术实现思路
【技术问题】为了解决现有技术中的抗氧化肽无法用于油脂抗氧化的问题。【技术方案】为解决上述问题，本专利技术提供了一种具有抗油脂氧化功能的生物活性肽及其制备方法，以富含疏水性蛋白的豆类为主要原料，制备得到的抗氧化肽能够用于油脂抗氧化，且具有较强的抗氧化功能。首先，本专利技术提供了一种具有抗油脂氧化功能的活性肽的制备方法，所述方法包括如下步骤：(1)准备蛋白质：从提取了油之后的油料作物中提取蛋白质，干燥得到蛋白干粉，备用；(2)红外预处理：将步骤(1)得到的蛋白干粉进行红外预处理，预处理的温度为50～150℃，时间为5～45min；(3)蛋白酶酶解处理：将步骤(2)得到的预处理后的蛋白干粉配置成溶液，然后利用蛋白酶进行酶解处理；(4)冷冻干燥：将酶解上清液冷冻干燥得到多肽粉；(5)提取亲脂性多肽：将冻干后的多肽粉溶于有机溶剂中，温度30～60℃下在10～100Hz的超声波中处理20～120min，随后在0～5℃下离心，收集上清液；(6)真空浓缩并干燥：将步骤(5)得到的上清液真空浓缩并除去残留有机溶剂，即可得到具有抗油脂氧化功能的活性肽。在本专利技术的一种实施方式中，所述油料作物已经过提油处理。在本专利技术的一种实施方式中，步骤(1)中，所述油料作物优选富含疏水性氨基酸的作物。在本专利技术的一种实施方式中，步骤(1)中，所述油料作物为黄豆、黑豆或绿豆中的一种或几种。在本专利技术的一种实施方式中，步骤(1)中所述提取出蛋白质的方法为碱溶酸沉法，具体的为：将提油后的油料作物重悬于pH为7～10的稀碱溶液中0.5～5h，离心取上清液后再用酸将pH调至3～6，经分离后将沉淀重悬于水中并中和至pH为6～8，干燥得到蛋白干粉，备用。在本专利技术的一种实施方式中，步骤(1)中，所述用酸调pH优选调节至蛋白质的等电点附近。在本专利技术的一种实施方式中，步骤(1)中，所述稀碱溶液为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸氢钠等中的任一种。在本专利技术的一种实施方式中，步骤(1)中，所述酸为盐酸、醋酸、柠檬酸或乳酸等。在本专利技术的一种实施方式中，步骤(1)中，所述离心为8000～12000rpm下离心8～15min。在本专利技术的一种实施方式中，步骤(1)中，所述干燥优选为冷冻干燥，温度为-100～-50℃，真空度为1～15Pa，干燥时间为1～5d；具体的冷冻干燥的操作为：将调回中性的蛋白溶液于-100～-50℃冷冻成固态，进行真空冷冻干燥，真空1～15Pa，温度-100～-50℃，干燥1～5d。在本专利技术的一种实施方式中，步骤(2)中，所述预处理的条件优选温度为90～120℃，时间15～25min；与传统热处理利用热传导与热对流加热样品不同，红外热处理过程中，电磁波碰撞物料表面后，物料吸收能量而使内部分子发生机械振动，由内向外产热，从而达到加热的目的，热量分布均匀。通过红外预处理，使得球状蛋白变性，肽链展开有利于增大其与蛋白酶的接触面积，其次，红外预处理使得蛋白质的功能特性得到明显改善，且有利于生物活性物质的释放。在本专利技术的一种实施方式中，步骤(3)中，所述蛋白干粉配置成溶液，其质量体积比浓度为5～20％(w/v，g/mL)，优选为5～13％。在本专利技术的一种实施方式中，步骤(3)中，所述酶解处理在蛋白酶的最适酶解条件下，保温震荡反应0.5～15h，灭酶，冷却，调节浆液pH至6～8，分离得到的酶解上清液。在本专利技术的一种实施方式中，所述灭酶为热水浴、红外等灭酶方法，优选70～100℃水浴灭酶。在本专利技术的一种实施方式中，步骤(3)中，所述分离为5000～10000rpm条件下离心5～20min。在本专利技术的一种实施方式中，步骤(3)中，所述蛋白酶为能够特异性切割疏水性氨基酸的蛋白酶，优选为碱性蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、弹性蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶或无花果树蛋白酶中的任一种或几种。在本专利技术的一种实施方式中，步骤(3)中，所述蛋白酶的浓度为1.5～2.5wt％。在本专利技术的一种实施方式中，步骤(3)中，针对不同的蛋白酶，其最适酶解条件为：碱性蛋白酶的最佳酶解条件为温度40～60℃，pH8.0～11.0，反应时间1～7h；菠萝蛋白酶的最佳酶解条件是温度40～60℃，pH6.0～8.0，反应时间2～8h；无花果树蛋白酶的最佳酶解条件为温度40～60℃，pH4.0～7.0，反应时间2～8h；胰蛋白酶的最佳酶解条件为温度25～45℃，pH7.0～9.0，反应时间0～5h；胰凝乳蛋白酶的最佳酶解条件为温度20～50℃，pH7.0～10.0，反应时间0～5h；弹性蛋白酶的最佳酶解条件为温度15～50℃，pH6.0～9.0，反应时间0～5h；木瓜蛋白酶的最佳酶解条件为温度40～60℃，pH6.0～8.0，反应时间1～8h。在本专利技术的一种实施方式中，步骤(3)中，所述酶解上清液于0～9℃暂存；此外，酶解上清液若不能及时使用，则需进行冷冻保存，冷冻温度为-50～0℃，冷冻原料液在使用时，需进行低温解冻，尽量减少冷冻解冻过程对蛋白的破坏。在本专利技术的一种实施方式中，步骤(3)中，所述冷却优选为快速冷却。在本专利技术的一种实施方式中，步骤(4)中，所述冷冻干燥的具体操作为：将酶解上清液置于-100～0℃冷冻成固态，进行真空冷冻干燥，真空度为1～15Pa，温度为-100～-50℃，干燥1～5d，得到的多肽粉。在本专利技术的一种实施方式中，步骤(5)中，所述有机溶剂为正己烷、石油醚、甲醇、乙醇、正丁醇或二氯甲烷中的任一种或两种。在本专利技术的一种实施方式中，步骤(5)中，所述离心为5000～10000rpm下离心5～20min。在本专利技术的一种实施方式中，所述真空浓缩为20～50℃下真空离心浓缩，将浓缩的多肽溶液在20～50℃干燥，除去残留有机溶剂。在本专利技术的一种实施本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种具有抗油脂氧化功能的活性肽的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)准备蛋白质：从提取了油之后的油料作物中提取蛋白质，干燥得到蛋白干粉，备用；(2)红外预处理：将步骤(1)得到的蛋白干粉进行红外预处理，预处理的温度为50～150℃，时间为5～45min；(3)蛋白酶酶解处理：将步骤(2)得到的预处理后的蛋白干粉配置成溶液，然后利用蛋白酶进行酶解处理；(4)冷冻干燥：将酶解产物的上清液进行冷冻干燥得到多肽粉；(5)提取亲脂性多肽：将冻干后的多肽粉溶于有机溶剂中，温度30～60℃下在10～100Hz的超声波中处理20～120min，随后在0～5℃下离心，收集上清液；(6)真空浓缩并干燥：将步骤(5)得到的上清液真空浓缩并除去残留有机溶剂，即可得到具有抗油脂氧化功能的活性肽。

【技术特征摘要】
1.一种具有抗油脂氧化功能的活性肽的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)准备蛋白质：从提取了油之后的油料作物中提取蛋白质，干燥得到蛋白干粉，备用；(2)红外预处理：将步骤(1)得到的蛋白干粉进行红外预处理，预处理的温度为50～150℃，时间为5～45min；(3)蛋白酶酶解处理：将步骤(2)得到的预处理后的蛋白干粉配置成溶液，然后利用蛋白酶进行酶解处理；(4)冷冻干燥：将酶解产物的上清液进行冷冻干燥得到多肽粉；(5)提取亲脂性多肽：将冻干后的多肽粉溶于有机溶剂中，温度30～60℃下在10～100Hz的超声波中处理20～120min，随后在0～5℃下离心，收集上清液；(6)真空浓缩并干燥：将步骤(5)得到的上清液真空浓缩并除去残留有机溶剂，即可得到具有抗油脂氧化功能的活性肽。2.根据权利要求1所述的一种具有抗油脂氧化功能的活性肽的制备方法，其特征在于，所述油料作物为富含疏水性氨基酸的作物。3.根据权利要求1或2所述的一种具有抗油脂氧化功能的活性肽的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述提取出蛋白质的方法为碱溶酸沉法，具体为：将提油后的油料作物重悬于pH为7～10的稀碱溶液中0.5～5h，离心取上清液后再用酸将pH调至3～6，经分离后将沉淀重悬于水中并中和至pH为6～8，干燥得到蛋白干粉，备用。4.根据权利要求1～3任一所述的一种具有抗油脂氧化功能的活性肽的制备方法，其特征在于，所述蛋白酶为能够特异性切割疏水性氨基酸的蛋白酶，包括碱性蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、弹性蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶或无花果树蛋白酶中的任一种或几种。5.根据权利要求1～4所述的一种具有抗油脂氧化功能的活性肽的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述蛋白酶的浓度为1.5～2.5wt％；所述蛋...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘元法，郑召君，李嘉欣，李进伟，徐勇将，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32