浓缩活心丸中体外培育牛黄含量的检测方法技术

本发明专利技术属于药物检测领域，公开了一种浓缩活心丸中体外培育牛黄含量的检测方法。所述浓缩活心丸中体外培育牛黄含量以高效液相色谱法测定，避光操作，检测条件及方法如下：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈‑1％冰醋酸溶液＝95:5为流动相；检测波长为450nm；先制备对照品溶液与供试品溶液，然后精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。浓缩活心丸每1g含体外培育牛黄以胆红素(C33H36N4O6)计，不得少于5.5mg。本发明专利技术所述浓缩活心丸中体外培育牛黄含量的检测方法具有准确度高、精密度好、专属性强的优点，能够很好的对浓缩活心丸中体外培育牛黄的含量进行测定，指导浓缩活心丸质量控制。

Detection Method of Calculus Bovis in Concentrated Huoxin Pills in Vitro

The invention belongs to the field of drug detection, and discloses a method for detecting the content of bovine bezoar cultured in vitro in concentrated Huoxin pills. The content of bovine bezoar cultured in vitro in the concentrated Huoxin pills was determined by high performance liquid chromatography (HPLC). The detection conditions and methods were as follows: octadecyl silane bonded silica gel was used as filler; acetonitrile-1% glacial acetic acid solution = 95:5 was used as mobile phase; the detection wavelength was 450 nm; the reference solution and the sample solution were prepared first, and then the reference solution and the sample solution were precisely extracted. 5-10 ml, injection liquid chromatography, determination, that is. Concentrated Huoxin Pills should contain no less than 5.5 mg of bilirubin (C33H36N4O6) per g of bovine bezoar cultured in vitro. The method for detecting the content of bovine bezoar cultured in vitro in the concentrated Huoxin pill has the advantages of high accuracy, good precision and strong specificity, and can well determine the content of bovine bezoar cultured in vitro in the concentrated Huoxin pill and guide the quality control of the concentrated Huoxin pill.

【技术实现步骤摘要】
浓缩活心丸中体外培育牛黄含量的检测方法
本专利技术涉及属于药物检测领域，具体涉及一种浓缩活心丸中体外培育牛黄含量的检测方法。
技术介绍
体外培育牛黄具有清心，豁痰，开窍，凉肝，熄风，解毒的功效。用于热病神昏，中风痰迷，惊厥抽搐，癫痫发狂，咽喉肿痛，口舌生疮，痈肿疔疮。体外培育牛黄是国家一类中药新药，药学研究表明体外培育牛黄的性状、结构、成分及其含量、药理、临床疗效与天然牛黄基本一致，无明显不良反应。牛黄中的胆红素是解热、抗炎和抗感染的主要活性成分，以胆红素作为指标成分对牛黄进行含量测定是科学、合理的。体外培育牛黄是浓缩活心丸中的一种成分，活心丸为2010年度国家药品标准提高品种，由广州悦康生物制药有限公司生产。现行标准收载于部颁标准中药成方制剂第十八册(标准文号：WS3-B-3452-98)。在原标准中并没有关于体外培育牛黄的含量测定，因此有必要为其提供一种专属性强、精密度好的体外培育牛黄含量的检测方法，更好的对浓缩活心丸的质量进行全面的控制。
技术实现思路
本专利技术是要解决活心丸质量检测原有标准中没有对体外培育牛黄进行定量测定的问题，提出的一种浓缩活心丸中体外培育牛黄含量的检测方法，提高对浓缩活心丸的质量控制。本专利技术提供的浓缩活心丸中体外培育牛黄含量的检测方法，所述浓缩活心丸的处方为：灵芝20g，人工麝香1.2g，熊胆2.4g，体外培育牛黄1.2g，珍珠2.4g，人参18g，蟾酥1.8g，附子(黑顺片)9g，冰片1.2g，红花2.0g；，所述浓缩活心丸中体外培育牛黄含量的检测方法包括以下几个步骤：步骤1、对照品溶液的制备：取胆红素对照品适量，精密称定，加二氯甲烷制成每1ml含15μg的溶液；步骤2、供试品溶液的制备：取所述浓缩活心丸，研细，取约50mg，精密称定，置具塞容器中，精密加入含0.15％十六烷基三甲基氯化铵的10％草酸溶液3-10ml，涡旋至充分混匀，精密加入水饱和的二氯甲烷25ml，称定重量，超声处理45-60min后，放冷，再称定重量，用水饱和的二氯甲烷补足减失的重量，摇匀，离心，取二氯甲烷液，用孔径为0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；步骤3、精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。进一步优化为，在步骤2中加入含0.15％十六烷基三甲基氯化铵的10％草酸溶液量为3ml。进一步优化为，在步骤2中超声处理要求为：功率350W,频率37kHz，处理45min。进一步优化为，在步骤3中色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-1％冰醋酸溶液(95:5)为流动相；检测波长为450nm。优点：本专利技术所述浓缩活心丸中体外培育牛黄含量的检测方法在准确度试验中测得胆红素平均回收率在101.40～103.59％之间，说明所述检测方法的准确度较好；精密度实验中测得RSD为1.5％(n＝6)，说明所述检测方法重现性良好；缺体外培育牛黄阴性对照样品无干扰，说明所述检测方法专属性强；线性关系考察结果，以进样量(mg)(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，线性回归方程为：胆红素y＝6217.2026x–13.8479，R＝1，说明胆红素在0.01517～1.5169mg的范围内，线性关系良好，所述检测方法能准确有效的测定胆红素含量。本专利技术所述浓缩活心丸中体外培育牛黄含量的检测方法填补了浓缩活心丸质量原标准中体外培育牛黄含量检测的空白，本专利技术不仅能够有效鉴别活心丸中微量成份体外培育牛黄的有无，更可以准确有效的测定体外培育牛黄的含量，对浓缩活心丸的质量控制具有重要意义。附图说明图1是体外培育牛黄液相色谱图(A胆红素对照品；B样品；C缺体外培育牛黄阴性对照样品)；图2是胆红素的线性图谱；图3是胆红素紫外光谱扫描图；图4是胆红素的高效液相色谱图(不同色谱柱)。具体实施方式(一)试验材料1、仪器：高效液相色谱仪：安捷伦1100；超声仪：ElmasonicS300H超声波清洗器，功率350W，频率37kHz；色谱柱：A：Shim-packCLC-ODS(150mm×4.6mm，5μm)；B：UltimateAQ-C18(250mm×4.6mm，5μm)；C：DikmaDiamonsil(150mm×4.6mm，5μm)；天平SartoriuCP224S、CP225D；2、试剂：乙腈为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。3、对照品：胆红素对照品，批号为100077－200805，含量以99.6％计，购自中检院。4、供试品：批号为12030101、12050101、12060101、12070101、12080101的所述浓缩活心丸，由广州悦康生物制药有限公司提供。5、阴性样品：缺体外培育牛黄阴性样品。由广州悦康生物制药有限公司制备提供。(二)实施例实施例1色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-1％冰醋酸溶液＝95:5为流动相；检测波长为450nm。理论板数按胆红素峰计算应不低于2000。对照品溶液的制备：取胆红素对照品适量，精密称定，加二氯甲烷制成每1ml含15μg的溶液，即得。供试品溶液的制备：分别取上述5批供试品，研细，各取约50mg，精密称定，分别置于具塞锥形瓶中，精密加入(含0.15％十六烷基三甲基氯化铵)的10％草酸溶液3ml，涡旋至充分混匀，精密加入水饱和的二氯甲烷25ml，称定重量，以功率350W、频率37kHz超声处理45分钟，放冷，再称定重量，用水饱和的二氯甲烷补足减失的重量，摇匀，离心，取二氯甲烷液，用孔径为0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。测定：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～10μl，注入液相色谱仪，测定，即得各供试品中胆红素含量，结果见表1。表1供试品含量测定结果以下通过验证试验说明本专利技术检测方法的可行性。(三)验证试验1、准确度(加样回收率试验)考察回收用对照溶液的制备：精密称取质量分数为99.6％的胆红素对照品0.01523g，置100ml容量瓶中，加二氯甲烷使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每1ml含胆红素0.1523mg的回收用对照品溶液；取含胆红素8.8876mg/g，批号为12070101的供试品，研细，取6份，每份约25mg，精密称定，精密加入回收用对照品溶液1.5ml。按含量测定方法测定，计算胆红素的回收率。结果见表2，胆红素的回收率为102.6％，RSD为0.8％(n＝6)，说明本方法的准确度较好。。表2准确度(加样回收)试验结果2、精密度(重复性)考察取批号为12070101的供试品，研细，取6份，每份约50mg，精密称定，依上述方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定。结果见表3，胆红素RSD为1.5％(n＝6)，说明本方法重现性良好。表3重复性试验结果3、专属性考察按供试品溶液的制备方法同法制成缺体外培植牛黄的阴性样品溶液，吸取对照品溶液、供试品溶液与阴性样品溶液10μl，注入液相色谱仪，结果表明缺体外培植牛黄阴性对照样品无干扰，见图1。4、线性关系的考察精密称取质量分数为99.6％胆红素对照品0.01523g，置100ml容量瓶中，加水饱和的二氯甲烷使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每1ml含胆红素0.1517mg的溶液，作为对照品溶液母液。Ⅰ：精密吸取对照品溶液母液2.5ml，置25本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种浓缩活心丸中体外培育牛黄含量的检测方法，所述浓缩活心丸的处方为：灵芝20g，人工麝香1.2g，熊胆2.4g，体外培育牛黄1.2g，珍珠2.4g，人参18g，蟾酥1.8g，附子(黑顺片)9g，冰片1.2g，红花2.0g；其特征在于，所述浓缩活心丸中体外培育牛黄含量的检测方法包括以下几个步骤：步骤1、对照品溶液的制备：取胆红素对照品适量，精密称定，加二氯甲烷制成每1ml含15μg胆红素对照品的溶液，作为对照品溶液；步骤2、供试品溶液的制备：取所述浓缩活心丸，研细，取约50mg，精密称定，置具塞容器中，精密加入含0.15％十六烷基三甲基氯化铵的10％草酸溶液3ml，涡旋至充分混匀，精密加入水饱和的二氯甲烷25ml，称定重量，超声处理45min后，放冷，再称定重量，用水饱和的二氯甲烷补足减失的重量，摇匀，离心，取二氯甲烷液，用孔径为0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液；步骤3、精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～10μl，注入液相色谱仪，测定。

【技术特征摘要】
1.一种浓缩活心丸中体外培育牛黄含量的检测方法，所述浓缩活心丸的处方为：灵芝20g，人工麝香1.2g，熊胆2.4g，体外培育牛黄1.2g，珍珠2.4g，人参18g，蟾酥1.8g，附子(黑顺片)9g，冰片1.2g，红花2.0g；其特征在于，所述浓缩活心丸中体外培育牛黄含量的检测方法包括以下几个步骤：步骤1、对照品溶液的制备：取胆红素对照品适量，精密称定，加二氯甲烷制成每1ml含15μg胆红素对照品的溶液，作为对照品溶液；步骤2、供试品溶液的制备：取所述浓缩活心丸，研细，取约50mg，精密称定，置具塞容器中，精密加入含0.15％十六烷基三甲基氯化铵的10％草酸溶液3ml，涡旋至充分混匀，精密加入水饱...

【专利技术属性】
技术研发人员：上官康，
申请(专利权)人：广州悦康生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44