蝇卵整体染色透明的方法技术

本发明专利技术涉及一种蝇卵整体染色透明的方法，包括步骤：将不同发育时期的蝇卵置于100℃的质量分数为2％的氢氧化钾溶液中10s，然后充分冲洗，再放入无水乙醇中浸泡10min，之后采用质量浓度为20mg/L的苏木色精染色液染色1h，然后充分冲洗脱色；再依次采用乙醇水溶液、无水乙醇、水杨酸甲酯和无水乙醇以1:1的体积比混合而成的溶液及水杨酸甲酯进行浸泡处理，之后采用SX‑7型Olympus体视显微镜观察，DP‑26成像系统拍照。本发明专利技术通过采用水杨酸甲酯透明法对不同发育时期的蝇卵进行染色，可以不破坏蝇卵的完整性，直观清晰地观察整个卵胚的发育状况，从而显示口咽器、后气门和体节逐渐形成的过程。

A transparent method for dyeing fly eggs as a whole

The invention relates to a method for transparent dyeing of fly eggs as a whole, which comprises the following steps: putting fly eggs at different developmental stages in potassium hydroxide solution with a mass fraction of 2% at 100 C for 10 seconds, then rinsing them fully, soaking them in anhydrous ethanol for 10 minutes, then dyeing them with hematoxylin dye solution with a mass concentration of 20 mg/L for 1 hour, and then rinsing them thoroughly and decoloring them in turn with ethanol water solution; The solution of liquid, absolute ethanol, methyl salicylate and absolute ethanol mixed in volume ratio of 1:1 and methyl salicylate were soaked, then observed by SX_7 Olympus stereomicroscope, and photographed by DP 26 imaging system. By using methyl salicylate transparent method to dye fly eggs at different developmental stages, the method can not destroy the integrity of fly eggs, directly and clearly observe the development of the whole egg embryo, thereby showing the gradual formation process of oropharyngeal organs, posterior valves and body segments.

【技术实现步骤摘要】
蝇卵整体染色透明的方法
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种蝇卵整体染色透明的方法。
技术介绍
在法医学实践中，死亡时间对确定发案时间，认定和排除嫌疑人有无作案时间等具有重要意义，因此判断尸体的死亡时间常对案件的侦破起到关键作用，死亡时间的推断也成为了法医学工作实践和研究的重要内容之一。近年来，法医昆虫学在死亡时间推断方面的研究得到迅速发展。只要有尸体的地方，尸食性蝇类成虫就会在第一时间到达尸体，并在尸体上产卵、发育。根据尸体上蝇卵胚的不同发育状态，可以更为细化地推断死亡时间提供依据。蝇卵，是蝇变态发育过程中的一个时期。一般为乳白色，呈香蕉形或椭圆形，长约1-1.5毫米，卵壳背面有一条孵出线，孵化时幼虫即从此处钻出。在蝇卵的发育过程中，常规方法不能观察到蝇卵胚的发育情况，为了更好的研究不同发育时期的蝇卵胚的形成及发育过程，需要对蝇卵进行染色。然而，目前并没有很好的染色技术，可以不破坏蝇卵的完整性，能清晰的观察到整个卵胚的发育过程。
技术实现思路
针对现有技术中的缺陷，本专利技术目的在于提供一种蝇卵整体染色透明的方法，以在保证不破坏蝇卵的完整性的前提下，直观清晰的观察整个卵胚的发育过程，从而显示口咽器、后气门和体节逐渐形成的过程。为实现上述目的，本专利技术提供了一种蝇卵整体染色透明的方法，包括步骤：将经过前期处理的蝇卵染色，然后冲洗脱色，再依次采用第一浸泡液、第二浸泡液、第三浸泡液和第四浸泡液进行浸泡处理，即可。前期处理包括步骤：将蝇卵置于100℃的氢氧化钾溶液中10s，然后充分冲洗，再放入无水乙醇中浸泡10min，得到经过前期处理的蝇卵。优选地，氢氧化钾溶液的质量分数为2％；蝇卵为不同发育时期的蝇卵。染色是采用苏木色精染色液进行染色，苏木色精染色液的质量浓度为20mg/L。优选地，染色的时间为1h。第一浸泡液为乙醇水溶液，乙醇水溶液的体积分数为95％，浸泡的时间为2h。第二浸泡液为无水乙醇，浸泡的时间为12h。第三浸泡液为水杨酸甲酯和无水乙醇以1:1的体积比混合而成的溶液，浸泡的时间为1h。第四浸泡液为水杨酸甲酯，浸泡的时间为24h。经过第四浸泡液处理后的蝇卵采用SX-7型Olympus体视显微镜观察，并采用DP-26成像系统拍照。本专利技术提供的技术方案，具有如下的有益效果：(1)本专利技术通过采用水杨酸甲酯透明法对不同发育时期的蝇卵进行染色，在保证不破坏蝇卵的完整性的前提下，直观清晰的观察整个卵胚的发育状况，从而观察到口咽器、后气门和体节逐渐形成的过程：(2)本专利技术经过大量的创造性实验，不断的优化整个方法中的各个参数，包括采用的试剂及加入量、温度、浸泡时间和染色时间等，最终得到了本专利技术提供的具体方法，对参数的任意调整均将严重影响染色和观察效果；本专利技术提供的方法效果好，且操作简单，可重复性强。本专利技术的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。附图说明图1为本专利技术实施例1中的1h蝇卵染色后的光学显微图；图2为本专利技术实施例2中的3h蝇卵染色后的光学显微图；图3为本专利技术实施例3中的5h蝇卵染色后的光学显微图；图4为本专利技术实施例4中的7h蝇卵染色后的光学显微图；图5为本专利技术实施例5中的9h蝇卵染色后的光学显微图。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本专利技术的技术方案，因此只是作为示例，而不能以此来限制本专利技术的保护范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。本专利技术提供一种蝇卵整体染色透明的方法，包括步骤：S1：将不同发育时期的蝇卵置于100℃的质量分数为2％的氢氧化钾溶液中10s，然后充分冲洗，再放入无水乙醇中浸泡10min，得到经过前期处理的蝇卵；S2：将经S1处理后的蝇卵采用质量浓度为20mg/L的苏木色精染色液染色1h，然后充分冲洗脱色；S3：将经S2处理后的蝇卵在体积分数为95％的乙醇水溶液中浸泡2h；S4：将经S3处理后的蝇卵在无水乙醇中浸泡12h；S5：将经S4处理后的蝇卵在水杨酸甲酯和无水乙醇以1:1的体积比混合而成的溶液中浸泡1h；S6：将经S5处理后的蝇卵在水杨酸甲酯中浸泡24h；S7：将经S6处理后的蝇卵采用SX-7型Olympus体视显微镜观察，并采用DP-26成像系统拍照。下面结合具体实施例对本专利技术提供的技术方案作进一步说明。实施例1本实施例提供一种蝇卵整体染色透明的方法，包括步骤：S1：将1小时的蝇卵置于100℃的质量分数为2％的氢氧化钾溶液中10s，然后充分冲洗，再放入无水乙醇中浸泡10min，得到经过前期处理的蝇卵；S2：将经S1处理后的蝇卵采用质量浓度为20mg/L的苏木色精染色液染色1h，然后充分冲洗脱色；S3：将经S2处理后的蝇卵在体积分数为95％的乙醇水溶液中浸泡2h；S4：将经S3处理后的蝇卵在无水乙醇中浸泡12h；S5：将经S4处理后的蝇卵在水杨酸甲酯和无水乙醇以1:1的体积比混合而成的溶液中浸泡1h；S6：将经S5处理后的蝇卵在水杨酸甲酯中浸泡24h；S7：将经S6处理后的蝇卵采用SX-7型Olympus体视显微镜观察，并采用DP-26成像系统拍照。结果：1h蝇卵染色后的光学显微图(×40倍)如图1所示，从图中可以看出，蝇卵的完整性好，可以直观清晰的观察整个卵胚的发育状况。实施例2本实施例提供一种蝇卵整体染色透明的方法，包括步骤：S1：将3小时的蝇卵置于100℃的质量分数为2％的氢氧化钾溶液中10s，然后充分冲洗，再放入无水乙醇中浸泡10min，得到经过前期处理的蝇卵；S2：将经S1处理后的蝇卵采用质量浓度为20mg/L的苏木色精染色液染色1h，然后充分冲洗脱色；S3：将经S2处理后的蝇卵在体积分数为95％的乙醇水溶液中浸泡2h；S4：将经S3处理后的蝇卵在无水乙醇中浸泡12h；S5：将经S4处理后的蝇卵在水杨酸甲酯和无水乙醇以1:1的体积比混合而成的溶液中浸泡1h；S6：将经S5处理后的蝇卵在水杨酸甲酯中浸泡24h；S7：将经S6处理后的蝇卵采用SX-7型Olympus体视显微镜观察，并采用DP-26成像系统拍照。结果：3h蝇卵染色后的光学显微图(×40倍)如图2所示，从图中可以看出，蝇卵的完整性好，可以直观清晰的观察整个卵胚的发育状况。实施例3本实施例提供一种蝇卵整体染色透明的方法，包括步骤：S1：将5小时的蝇卵置于100℃的质量分数为2％的氢氧化钾溶液中10s，然后充分冲洗，再放入无水乙醇中浸泡10min，得到经过前期处理的蝇卵；S2：将经S1处理后的蝇卵采用质量浓度为20mg/L的苏木色精染色液染色1h，然后充分冲洗脱色；S3：将经S2处理后的蝇卵在体积分数为95％的乙醇水溶液中浸泡2h；S4：将经S3处理后的蝇卵在无水乙醇中浸泡12h；S5：将经S4处理后的蝇卵在水杨酸甲酯和无水乙醇以1:1的体积比混合而成的溶液中浸泡1h；S6：将经S5处理后的蝇卵在水杨酸甲酯中浸泡24h；S7：将经S6处理后的蝇卵采用SX-7型Olympus体视显微镜观察，并采用DP-26成像系统拍照。结果：5h蝇卵染色后的光学显微图(×40倍)如图3所示，从图中可以本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种蝇卵整体染色透明的方法，其特征在于，包括步骤：将经过前期处理的蝇卵染色，然后冲洗脱色，再依次采用第一浸泡液、第二浸泡液、第三浸泡液和第四浸泡液进行浸泡处理，即可。

【技术特征摘要】
1.一种蝇卵整体染色透明的方法，其特征在于，包括步骤：将经过前期处理的蝇卵染色，然后冲洗脱色，再依次采用第一浸泡液、第二浸泡液、第三浸泡液和第四浸泡液进行浸泡处理，即可。2.根据权利要求1所述的蝇卵整体染色透明的方法，其特征在于：所述前期处理包括步骤：将蝇卵置于100℃的氢氧化钾溶液中10s，然后充分冲洗，再放入无水乙醇中浸泡10min，得到经过前期处理的蝇卵。3.根据权利要求1所述的蝇卵整体染色透明的方法，其特征在于：所述氢氧化钾溶液的质量分数为2％；所述蝇卵为不同发育时期的蝇卵。4.根据权利要求1所述的蝇卵整体染色透明的方法，其特征在于：所述染色是采用苏木色精染色液进行染色；所述苏木色精染色液的质量浓度为20mg/L。5.根据权利要求1所述的蝇卵整体染色透明的方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：张红玲，
申请(专利权)人：贵州医科大学，
类型：发明
国别省市：贵州,52