精子DNA碎片率、活性氧和8-羟基脱氧鸟苷联合评价男性不育的方法技术

本发明专利技术涉及精子DNA碎片率、活性氧和8‑羟基脱氧鸟苷联合评价男性不育的方法，测定来自精液样品中精子DNA碎片率(DFI)、活性氧(ROS)和8‑羟基脱氧鸟苷(8‑OHdG)的水平，将精子DNA碎片率、活性氧和8‑羟基脱氧鸟苷的水平与精子功能质量相关联，以精子DFI＝19.26％、ROS＝1.91ng/ml和8‑OHdG＝50.76ng/l为判断临界值，当精子DFI、ROS和8‑OHdG水平高于所述临界值时，判断精子不育。

【技术实现步骤摘要】
精子DNA碎片率、活性氧和8-羟基脱氧鸟苷联合评价男性不育的方法
本专利技术涉及精子DNA碎片率、活性氧和8-羟基脱氧鸟苷联合评价男性不育的方法。
技术介绍
男性不育困扰着全球约10％-15％的育龄夫妇。现有的评估精液质量的指标依赖于传统的精液常规分析，精液常规分析仅仅检测精子数量、存活力和形态等指标，这些指标只反映基本的精液质量，不能反映精子功能特性，往往一些患者精液常规正常，女方因素也正常，就是不能怀孕。为了更好地衡量男性生育能力和预测生殖结局，临床需要准确地评估精子功能。精子DNA的完整性对精子功能的影响一直受到广泛的关注，精子DNA碎片率(DNAfragmentationindex,DFI)、活性氧(Reactiveoxgenspecies,ROS)和8-羟基脱氧鸟苷(8-Hydroxydeoxyguanosine,8-OHdG)反映了遗传物质DNA的损伤程度，有研究数据表示，精子DNA损伤的影响可以存在于生育的不同阶段，可能与受精率、胚胎发育、种植率、妊娠率、流产率以及后代的先天性异常等有关。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供精子DNA碎片率、活性氧和8-羟基脱氧鸟苷联合评价男性不育的方法。本专利技术的目的通过以下技术方案来实现：精子DNA碎片率、活性氧和8-羟基脱氧鸟苷联合评价男性不育的方法，测定来自精液样品中精子DNA碎片率(DFI)、活性氧(ROS)和8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的水平，将精子DNA碎片率、活性氧和8-羟基脱氧鸟苷的水平与精子功能质量相关联，以精子DFI＝19.26％、ROS＝1.91ng/ml和8-OHdG＝50.76ng/l为判断临界值，当精子DFI、ROS和8-OHdG水平高于所述临界值时，判断精子不育。本专利技术以精子DFI、ROS和8-OHdG水平为指标联合评价精子功能状况，更加能够准确地反映精子的功能水平。附图说明图1是精子DFI在不育组和有生育力组中表达情况。图2精子DFI与精液各参数的相关性。图3精浆ROS与精液各参数的相关性。图4精浆8-OHdG与精液各参数的相关性。图5精子DFI、ROS和8-OHdG在不育症中的预测值。具体实施方式1.取冷冻精液标本复苏后，根据《世界卫生组织人类精液检查与处理实验室手册》(第5版)的要求检测精子浓度及活力。冷冻精液标本90例，其中60例为60位有生育能力者的精液标本，为生育力组；30例为不育者的精液标本，为不育组。2.精子DFI、ROS和8-OHdG检测采用精子染色质结构试验(SCSA法)检测不育组和有生育力组精子DFI。其中A液主要成分为：0.01mol/LTris-HCl、0.15mol/LNaCl、1mmol/LEDTA；B液为0.08mol/LHcl、0.5mol/LNaCl、0.1％TritionX-100；C液为37mmol/L柠檬酸、0.126mol/LNa2HPO4、1mmol/LEDTA、0.15mol/LNaCl、1mg/mlAO。应用流式细胞每份精子悬液测量10000个精子，计算红色荧光精子的比例，结果利用精子DNA完整性计算及报告系统计算得出。应用ELISA方法检测不育组和有生育力组精液中ROS和8-OHdG水平。3.统计学分析数据采用SPSS22.0软件进行统计分析。计量资料用x±s表示，两组比较用t检验，相关性采用Spearman秩相关分析。P≤0.05为具有统计学意义。4.实验结果不育症组精子前向运动百分率为11.79±0.83％、总活动力为22.84±1.24％、精子浓度为73.72±15.64×106/ml、精液量为2.87±0.23ml、正常精子形态6.93±0.51％、DFI为32.52±2.02％、ROS为3.35±0.17ng/ml、8-OHdG为78.62±4.52ng/l；有生育力组前向运动百分率为41.78±1.15％、总活动力为64.04±1.49％、精子浓度为122.94±6.70×106/ml、精液量为3.84±0.15ml、正常精子形态14.77±0.47％、精子DFI为11.05±0.67％、ROS为1.43±0.11ng/ml、8-OHdG为34.59±1.81ng/l；不育症组与有生育力组之间精子前项运动百分率、总活动力、精子浓度、正常精子形态、DFI、ROS和8-OHdG均具有显著性差异，通过敏感性和特异度计算，不育症组与有生育力组之间精子DFI、ROS和8-OHdG的约登指数(YudenIndex)分别为19.26％、1.91ng/ml和50.76ng/l，据此可作为判断有无生育力的临界值。通过相关性分析发现，如图2-4所示，精子DFI与ROS和8-OHdG互为正相关关系；精子DFI、ROS和8-OHdG分别与前向运动百分率、总活力、正常精子形态呈显著负相关关系。由此，将精精子DFI与ROS和8-OHdG的水平与精子功能质量相关联，当精子DFI＞19.26％、ROS＞1.91ng/ml和8-OHdG＞50.76ng/l时，判断精子不育。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.精子DNA碎片率、活性氧和8‑羟基脱氧鸟苷联合评价男性不育的方法，其特征是，测定来自精液样品中精子DNA碎片率(DFI)、活性氧(ROS)和8‑羟基脱氧鸟苷(8‑OHdG)的水平，将精子DNA碎片率、活性氧和8‑羟基脱氧鸟苷的水平与精子功能质量相关联，以精子DFI＝19.26％、ROS＝1.91ng/ml和8‑OHdG＝50.76ng/l为判断临界值，当精子DFI、ROS和8‑OHdG水平高于所述临界值时，判断精子不育。

【技术特征摘要】
1.精子DNA碎片率、活性氧和8-羟基脱氧鸟苷联合评价男性不育的方法，其特征是，测定来自精液样品中精子DNA碎片率(DFI)、活性氧(ROS)和8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的水平，将精子DNA碎片率、活性氧和8...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦卫兵，唐运革，韩璐，刘晓华，伍嘉宝，
申请(专利权)人：广东省计划生育科学技术研究所广东省计划生育专科医院，
类型：发明
国别省市：广东,44