一种从乌药中分离去甲异波尔定的方法技术

本发明专利技术公开了一种从乌药中分离去甲异波尔定的方法，经过制备乌药粗提取液、初步纯化和分离纯化乌药粗提取物，得到去甲异波尔定；本发明专利技术合理的利用高速逆流色谱技术，可以实现高效率、简便、快捷从乌药中提取得到去甲异波尔定的效果；并且提取得到的去甲异波尔定的纯度高；同时本发明专利技术提供的技术方案提取效率高，提取过程去甲异波尔定的损耗率低，具有优异的发展前景。

【技术实现步骤摘要】
一种从乌药中分离去甲异波尔定的方法
本专利技术涉及天然产物活性成分的分离纯化
，具体为一种从乌药中分离去甲异波尔定的方法。
技术介绍
乌药为樟科山胡椒属植物乌药(Linderaaggregata(Sims)Kos-term.)的干燥块根，主产于浙江、湖南、广东、安徽等地，是一种重要的常用中药材。乌药具有治疗风湿痛、经痛、改善中枢神经系统、镇痛、抗炎以及胃肠道双向调节作用，既能促使胃肠蠕动，又能缓解胃肠道平滑肌痉挛，还可以改善功能性胃肠病患者泛酸、嗳气、食欲不振、腹胀、腹痛、腹泻便秘等临床症状。研究表明，乌药中化学成分主要有倍半萜及内酯、异喹啉生物碱等，其中异喹啉类生物碱具有广泛的生理活性，具有抗菌、抗肿瘤、镇痛、抗心律失常、抗血小板聚集、降压、调节免疫等功能，同时副作用较小，具有很高的开发利用价值。去甲异波尔定是乌药中的主要异喹啉生物碱，不仅具有体外抗氧化作用(药学学报200641(10)：956～962)，还可用于治疗自身免疫性疾病，如：多肌炎、慢性活动性肝炎、混合性结缔组织病、原发性胆汁性肝硬变、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性噬中性白细胞减少症、狼疮性肾炎、慢性萎缩性胃炎、自身免疫性不育、子宫内膜异位症等疾病，在临床上具有重要应用价值。但是，现有技术中并没有公开一种从乌药中快速、高效、稳定地提取去甲异波尔定的方法。而高速逆流色谱法是一种近年来快速发展的、连续高效的液液分配色谱技术，已在生物、医药、食品、材料等领域得到广泛的应用，尤其是在天然产物活性成分的分离纯化领域倍受重视。因此，提供一种利用高速逆流色谱分离乌药中去甲异波尔定的方法，是本领域技术人员亟需解决的问题。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了一种利用高速逆流色谱分离乌药中去甲异波尔定的方法，以实现高效率、简便、快速的从乌药中分离去甲异波尔定的技术效果。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种分离乌药中去甲异波尔定的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：(1)制备乌药粗提取液：将乌药经过蒸馏水浸泡、浸提、过滤和离心分离过程，得到乌药粗提取液；(2)初步纯化：利用大孔吸附树脂柱，依次使用蒸馏水和质量浓度为70％的乙醇对上述制备得到的乌药粗提取液进行洗脱，得到的乙醇洗脱液经过浓缩、冷冻干燥后得到乌药粗提取物；(3)分离纯化乌药粗提取物：利用高速逆流色谱对上述乌药粗提取物进行分离提纯，得到去甲异波尔定。优选的，所述步骤(1)具体包括如下步骤：(a)称取乌药原料，并称取3～5倍质量的蒸馏水；将乌药加入到蒸馏水中浸泡过夜；(b)然后在70～100℃水浴条件下浸提30～60min，并适时搅拌，接着进行过滤分别得到滤液和滤渣；(c)向上述得到的滤渣中加入3倍质量的蒸馏水，并重复上述步骤(b)；(d)合并步骤(b)和步骤(c)得到的滤液，经过离心分离，得到上清液即为乌药粗提取液。优选的，所述步骤(2)具体包括如下步骤：(A)先量取500mLAB-8大孔吸附树脂用95％乙醇浸泡12～24h，装柱；然后使用蒸馏水对上述大孔吸附树脂柱进行洗涤至流出液无醇味；(B)取上述步骤(1)中得到的乌药粗提取液加入盐酸调节pH值至2～3，然后以3～5BV/h流速上样，上样完成后静置30～60min；(C)接着加入蒸馏水进行洗脱，至洗脱液无色；(D)再以3～5BV/h流速加入质量浓度为70％的乙醇进行洗脱，洗至洗脱液无色，收集全部的乙醇洗脱液；(E)将上述乙醇洗脱液加入到旋转蒸发仪进行浓缩处理，然后经过冷冻干燥得到乌药粗提取物。优选的，所述步骤(3)具体包括如下步骤：A、按照体积比为8:6:2:1分别量取三氟乙酸水溶液、正丁醇、甲基叔丁基醚、和乙腈，备用；将量取的溶剂混合均匀后静置过夜，然后进行两相分离和超声脱气，分别得到上相和下相；所述三氟乙酸水溶液中三氟乙酸的体积百分数为0.2％；B、设置高速逆流色谱的技术参数：主机转速为850～900r/min，柱温为20～25℃，检测波长为280nm；C、将步骤A中得到的上相作为固定相、下相作为流动相，并以1.8～2.0mL/min的流速加入高速逆流色谱仪中；待上下相平衡后，将300mg乌药粗提取物用20ml下相溶解并注入高速逆流色谱仪中，然后采集色谱图，根据色谱图峰形分段收集流出液；D、分别取上述流出液经过浓缩、冷冻干燥即可得到去甲异波尔定。优选的，所述步骤B中设置主机转速为850r/min。优选的，所述步骤C中乌药粗提取物的上样量不大于300mg。优选的，所述步骤C中乌药粗提取物的上样量为300mg，流动相流速为2.0ml/min，收集流出液的时间区间为183～190min和190～250min。优选的，所述步骤D中流出液在55℃条件下旋转蒸发浓缩。经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本专利技术公开提供了一种从乌药中分离去甲异波尔定的方法，本专利技术合理的利用高速逆流色谱技术，可以实现高效率、简便、快捷从乌药中提取得到去甲异波尔定的技术效果；并且提取得到的去甲异波尔定的纯度高；同时本专利技术提供的技术方案提取效率高，提取过程去甲异波尔定的损耗率低，具有优异的发展前景。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。图1为实施例1的高速逆流色谱图；图2为183～190min收集得到的化合物的高效液相色谱图；图3为190-250min收集得到的化合物的高效液相色谱图；图4为体系4的高速逆流色谱图；图5为体系4分离产物的高效液相色谱图。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1一种分离乌药中去甲异波尔定的方法，具体包括如下步骤：(1)制备乌药粗提取液：(a)称取乌药原料，并称取3倍质量的蒸馏水；将称取的乌药加入到蒸馏水中浸泡过夜；(b)然后在100℃水浴条件下浸提30-min，并适时搅拌，接着进行过滤分别得到滤液和滤渣；(c)向上述得到的滤渣中加入3倍质量的蒸馏水，并重复上述步骤(b)；(d)合并步骤(b)和步骤(c)得到的滤液，经过离心分离，得到上清液即为乌药粗提取液；(2)初步纯化：(A)先量取500mLAB-8大孔吸附树脂用95％乙醇浸泡24h，装柱；然后使用蒸馏水对上述大孔吸附树脂柱进行洗涤至流出液无醇味；(B)取上述步骤(1)中得到的乌药粗提取液加入盐酸调节pH值至3，然后以3～5BV/h流速上样，上样完成后静置30min；(C)接着加入蒸馏水进行洗脱，至洗脱液无色；(D)再以3～5BV/h流速加入质量浓度为70％的乙醇进行洗脱，洗至洗脱液无色，收集全部的乙醇洗脱液；(E)将上述乙醇洗脱液加入到旋转蒸发仪进行浓缩处理，然后经过冷冻干燥得到乌药粗提取物；(3)分离纯化乌药粗提取物：A、按照体积比为8:6:2:1分别量取三氟乙酸水溶液、正丁醇、甲基叔丁基醚、和乙腈，备用；将量本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离乌药中去甲异波尔定的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：(1)制备乌药粗提取液：将乌药经过蒸馏水浸泡、浸提、过滤和离心分离过程，得到乌药粗提取液；(2)初步纯化：利用大孔吸附树脂柱，依次使用蒸馏水和质量浓度为70％的乙醇对上述制备得到的乌药粗提取液进行洗脱，得到的乙醇洗脱液经过浓缩、冷冻干燥后得到乌药粗提取物；(3)分离纯化乌药粗提取物：利用高速逆流色谱对上述乌药粗提取物进行分离提纯，得到去甲异波尔定。

【技术特征摘要】
1.一种分离乌药中去甲异波尔定的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：(1)制备乌药粗提取液：将乌药经过蒸馏水浸泡、浸提、过滤和离心分离过程，得到乌药粗提取液；(2)初步纯化：利用大孔吸附树脂柱，依次使用蒸馏水和质量浓度为70％的乙醇对上述制备得到的乌药粗提取液进行洗脱，得到的乙醇洗脱液经过浓缩、冷冻干燥后得到乌药粗提取物；(3)分离纯化乌药粗提取物：利用高速逆流色谱对上述乌药粗提取物进行分离提纯，得到去甲异波尔定。2.根据权利要求1所述的一种分离乌药中去甲异波尔定的方法，其特征在于，所述步骤(1)具体包括如下步骤：(a)称取乌药原料，并称取3～5倍质量的蒸馏水；将乌药加入到蒸馏水中浸泡过夜；(b)然后在70～100℃水浴条件下浸提30～60min，并适时搅拌，接着进行过滤分别得到滤液和滤渣；(c)向上述得到的滤渣中加入3倍质量的蒸馏水，并重复上述步骤(b)；(d)合并步骤(b)和步骤(c)得到的滤液，经过离心分离，得到上清液即为乌药粗提取液。3.根据权利要求1所述的一种分离乌药中去甲异波尔定的方法，其特征在于，所述步骤(2)具体包括如下步骤：(A)先量取500mLAB-8大孔吸附树脂用95％乙醇浸泡12～24h，装柱；然后使用蒸馏水对上述大孔吸附树脂柱进行洗涤至流出液无醇味；(B)取上述步骤(1)中得到的乌药粗提取液加入盐酸调节pH值至2～3，然后以3～5BV/h流速上样，上样完成后静置30～60min；(C)接着加入蒸馏水进行洗脱，至洗脱液无色；(D)再以3～5BV/h流速加入质量浓度为70％的乙醇进行洗脱，洗至洗脱液无色，收集全部的乙醇洗脱液；(E)...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐其，陆英，张湘龙，朱仕豪，
申请(专利权)人：湖南农业大学，
类型：发明
国别省市：湖南,43