一种龙氏报春苣苔的瓶外生根方法技术

本发明专利技术涉及植物组织培养技术领域，具体的是一种龙氏报春苣苔的瓶外生根方法。一种龙氏报春苣苔的瓶外生根方法，包括以下步骤：(1)外植体的消毒灭菌、(2)不定芽的诱导、(3)增殖培养、(4)幼株的选取以及预处理、(5)基质配制、(6)种植和(7)移栽后管理。本发明专利技术的方法缩短了龙氏报春苣苔育苗周期，节约成本、节约室内培养空间，具有组培苗生根率高，成活率高的优点。

【技术实现步骤摘要】
一种龙氏报春苣苔的瓶外生根方法
本专利技术涉及植物组织培养
，具体的是一种龙氏报春苣苔的瓶外生根方法。
技术介绍
龙氏报春苣苔(Primulinalongii)为苦苣苔科报春苣苔属的多年生草本植物。主要分布在广西的融安、永福，常见于石灰岩石山岩壁或山洞，海拔约350m。花期为3-4月。龙氏报春苣苔株型优美，花朵硕大，花朵数量多，具有很高的观赏价值。由于人为对原生境的破坏，该种的部分居群已基本消亡，虽然现存的居群更新良好，但根据国际自然保护联盟红色名录标准，该种的保护现状仍被认为濒危。组织培养是物种种质资源保存的关键技术，也是种苗规模化生产的有效途径，对保护和开发利用龙氏报春苣苔的意义十分重大。目前有关龙氏报春苣苔的组织培养研究尚未有相关报道。组织培养的关键技术主要包括外植体的获得、不定芽的诱导、不定芽的增殖培养、不定芽的生根培养、炼苗移栽，通过5个步骤方可获得完整的植株。瓶外生根把生根过程与炼苗移栽过程相结合，将增殖获得的组培芽直接在瓶外栽种直至生根的过程。相对于瓶内生根的生产成本高、育苗周期长、占用室内空间大的缺点，瓶外生根则具有节约成本、缩短育苗周期，节约室内培养空间的优点。瓶外生根技术虽然常应用在难以生根的植物种类中，但由于组培程序的简化，减少了培养基的配制和组培苗放的转瓶，节约了人力物力的同时也有效控制了生产成本，对于易生根的植物的种苗规模化生产极具意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种龙氏报春苣苔的瓶外生根方法，解决了常规龙氏报春苣苔组培苗以试管内生根为主，但生产成本高、育苗周期长、占用室内空间大的问题。本专利技术所提供的技术方案是：一种龙氏报春苣苔的瓶外生根方法，包括以下步骤：(1)外植体的消毒灭菌：取经过驯化栽培的龙氏报春苣苔的成熟叶片，用自来水冲洗25-30min，在超净工作台上，在0.01-0.05％高锰酸钾溶液中浸泡15-20min，无菌水冲洗3-5次，然后将其叶柄切成1-2cm长，用75％酒精中浸泡5-15s，无菌水冲洗3-5次，再用0.1％升汞浸泡8-12min，无菌水冲洗3-5次，叶柄灭菌后备用；(2)不定芽的诱导：将经过灭菌的叶柄下部斜插入诱导培养基中培养50-60d培养温度22-24℃，光照：10-12h/d，光照强度1000-1500lx；(3)增殖培养：将从叶柄上诱导得到的不定芽切取下来，接入增殖培养基中培养50-60d，培养温度22-24℃，光照：10-12h/d，光照强度1000-1500lx；(4)幼株的选取以及预处理：将经过增殖培养的瓶苗在室温下封盖炼苗3-5d，光照为10-12h/d，光照强度2000-2500lx；在超净工作台上切取具有2对以上叶片的组培苗用于瓶外生根，而未达到瓶外生根要求的小苗则继续进行增殖培养；将切取下来的组培苗基部放在生根液中速蘸2-3s，生根液为0.3-0.5％等量IBA和NAA混合溶液；(5)基质配制：以泥炭、生产食用菌的下脚料、珍珠岩、细河沙、蛭石和稻壳炭为成分配制基质，将基质的pH值调节为7.5-8.5；基质混合均匀后采用0.01-0.05％的高锰酸钾溶液浇灌淋透，分装入50孔或者72孔的穴盘中；(6)种植：事先在已经浇好水的移栽基质上用镊子戳成一个0.5-1.0cm深的小孔，然后用镊子夹住把小苗插入孔中，左手扶苗，右手把小苗基部的基质压实，浇透定根水，并根据基质的流失情况适当添加相应的基质；(7)移栽后管理：将种植好的穴盘苗放在有遮阳网的荫棚下，遮光率在60-70％，保持良好的通风；采用间歇性喷雾系统控制空气湿度，每天从上午9时开始至下午17时，每隔2小时喷雾10-15s，保持空气湿度在75-85％；小苗的浇水根据基质的干湿程度进行，当基质面发白时，表明需要补水，每次补水都要求浇透基质；移栽后在第7、14、21d进行一次叶面肥的喷施，叶面肥5000-6000倍液；移植后管理期间，温度为20-30℃，光照强度2000-2500lx；移栽35-40d即可生根；待植株叶面铺满一个穴盘孔时，即可进行上盆移栽。作为优选，步骤(1)中0.1％升汞中加入2-3滴吐温20。作为优选，步骤(2)中所述的诱导培养基为B5+TDZ1.0-3.0mg/L+NAA0.1-1.0mg/L，pH7.0-7.5。作为优选，步骤(3)中所述的增殖培养基为B5+6-BA3.0-5.0mg/L+ZT1.0-3.0mg/L+IBA0.5-1.5mg/L，pH7.0-7.5。作为优选，步骤(4)中0.3-0.5％等量IBA和NAA混合溶液：由相等质量的IBA和NAA混合配制而成。作为优选，步骤(5)中的基质是以泥炭、生产食用菌的下脚料、珍珠岩、细河沙、蛭石、稻壳炭构成，采用泥炭、珍珠岩、蛭石、稻壳炭，体积比为2:1:1:1，或生产食用菌的下脚料、细河沙、蛭石、稻壳炭，体积比为1:1:2:1，或者生产食用菌的下脚料、珍珠岩、蛭石、稻壳炭，体积比为1:2:2:1。作为优选，步骤(7)中的叶面肥中N:P2O5:K2O＝10:30:20。与现有技术相比，本专利技术具有的有益效果如下：本专利技术的方法缩短了龙氏报春苣苔的育苗周期，既节约成本又节约室内培养空间，经该方法得到的组培苗生根率高，成活率高。具体实施方式下面结合具体例对本专利技术作进一步详细的说明。实施例1：一种龙氏报春苣苔的瓶外生根方法，包括以下步骤：(1)外植体的消毒灭菌：取经过驯化栽培的龙氏报春苣苔的成熟叶片，用自来水冲洗25min，在超净工作台上，在0.01％高锰酸钾溶液中浸泡15min，无菌水冲洗3次，然后将其叶柄切成1cm长，用75％酒精中浸泡5s，无菌水冲洗3次，再用0.1％升汞浸泡8min，无菌水冲洗3次，叶柄灭菌后备用；所述的0.1％升汞中加入2滴吐温20；(2)不定芽的诱导：将经过灭菌的叶柄下部斜插入诱导培养基中培养50d培养温度22℃，光照：10h/d，光照强度1000lx；所述的诱导培养基为B5+TDZ1.0mg/L+NAA0.1mg/L，pH7.0；(3)增殖培养：将从叶柄上诱导得到的不定芽切取下来，接入增殖培养基中培养50d，培养温度22℃，光照：10h/d，光照强度1000lx；所述的增殖培养基为B5+6-BA3.0mg/L+ZT1.0mg/L+IBA0.5mg/L，pH7.0；(4)幼株的选取以及预处理：将经过增殖培养的瓶苗在室温下封盖炼苗3d，光照为10h/d，光照强度2000lx；在超净工作台上切取具有3-5对叶片的组培苗用于瓶外生根，而未达到瓶外生根要求的小苗则继续进行增殖培养；将切取下来的组培苗基部放在生根液中速蘸2-3s，生根液为0.3％等量IBA和NAA混合溶液；所述的0.3％等量IBA和NAA混合溶液：由相等质量的IBA和NAA混合配制而成；(5)基质配制：以泥炭、生产食用菌的下脚料、珍珠岩、细河沙、蛭石和稻壳炭为成分配制基质，将基质的pH值调节为7.5；基质混合均匀后采用0.01％的高锰酸钾溶液浇灌淋透，分装入50孔或者72孔的穴盘中；所述的基质是以泥炭、生产食用菌的下脚料、珍珠岩、细河沙、蛭石、稻壳炭构成，采用泥炭、珍珠岩、蛭石、稻壳炭，体积比为2:1:1:1；(6)种植：事先在已经浇好水的移栽基质上用镊子戳成一个0.5cm深的小孔，然后用镊子夹住把小苗插入孔中，左手本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种龙氏报春苣苔的瓶外生根方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)外植体的消毒灭菌：取经过驯化栽培的龙氏报春苣苔的成熟叶片，用自来水冲洗25‑30min，在超净工作台上，在0.01‑0.05％高锰酸钾溶液中浸泡15‑20min，无菌水冲洗3‑5次，然后将其叶柄切成1‑2cm长，用75％酒精中浸泡5‑15s，无菌水冲洗3‑5次，再用0.1％升汞浸泡8‑12min，无菌水冲洗3‑5次，叶柄灭菌后备用；(2)不定芽的诱导：将经过灭菌的叶柄下部斜插入诱导培养基中培养50‑60d培养温度22‑24℃，光照：10‑12h/d，光照强度1000‑1500lx；(3)增殖培养：将从叶柄上诱导得到的不定芽切取下来，接入增殖培养基中培养50‑60d，培养温度22‑24℃，光照：10‑12h/d，光照强度1000‑1500lx；(4)幼株的选取以及预处理：将经过增殖培养的瓶苗在室温下封盖炼苗3‑5d，光照为10‑12h/d，光照强度2000‑2500lx；在超净工作台上切取具有2对以上叶片的组培苗用于瓶外生根，而未达到瓶外生根要求的小苗则继续进行增殖培养；将切取下来的组培苗基部放在生根液中速蘸2‑3s，生根液为0.3‑0.5％等量IBA和NAA混合溶液；(5)基质配制：以泥炭、生产食用菌的下脚料、珍珠岩、细河沙、蛭石和稻壳炭为成分配制基质，将基质的pH值调节为7.5‑8.5；基质混合均匀后采用0.01‑0.05％的高锰酸钾溶液浇灌淋透，分装入50孔或者72孔的穴盘中；(6)种植：事先在已经浇好水的移栽基质上用镊子戳成一个0.5‑1.0cm深的小孔，然后用镊子夹住把小苗插入孔中，左手扶苗，右手把小苗基部的基质压实，浇透定根水，并根据基质的流失情况适当添加相应的基质；(7)移栽后管理：将种植好的穴盘苗放在有遮阳网的荫棚下，遮光率在60‑70％，保持良好的通风；采用间歇性喷雾系统控制空气湿度，每天从上午9时开始至下午17时，每隔2小时喷雾10‑15s，保持空气湿度在75‑85％；小苗的浇水根据基质的干湿程度进行，当基质面发白时，表明需要补水，每次补水都要求浇透基质；移栽后在第7、14、21d进行一次叶面肥的喷施，叶面肥5000‑6000倍液；移植后管理期间，温度为20‑30℃，光照强度2000‑2500lx；移栽35‑40d即可生根；待植株叶面铺满一个穴盘孔时，即可进行上盆移栽。...

【技术特征摘要】
1.一种龙氏报春苣苔的瓶外生根方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)外植体的消毒灭菌：取经过驯化栽培的龙氏报春苣苔的成熟叶片，用自来水冲洗25-30min，在超净工作台上，在0.01-0.05％高锰酸钾溶液中浸泡15-20min，无菌水冲洗3-5次，然后将其叶柄切成1-2cm长，用75％酒精中浸泡5-15s，无菌水冲洗3-5次，再用0.1％升汞浸泡8-12min，无菌水冲洗3-5次，叶柄灭菌后备用；(2)不定芽的诱导：将经过灭菌的叶柄下部斜插入诱导培养基中培养50-60d培养温度22-24℃，光照：10-12h/d，光照强度1000-1500lx；(3)增殖培养：将从叶柄上诱导得到的不定芽切取下来，接入增殖培养基中培养50-60d，培养温度22-24℃，光照：10-12h/d，光照强度1000-1500lx；(4)幼株的选取以及预处理：将经过增殖培养的瓶苗在室温下封盖炼苗3-5d，光照为10-12h/d，光照强度2000-2500lx；在超净工作台上切取具有2对以上叶片的组培苗用于瓶外生根，而未达到瓶外生根要求的小苗则继续进行增殖培养；将切取下来的组培苗基部放在生根液中速蘸2-3s，生根液为0.3-0.5％等量IBA和NAA混合溶液；(5)基质配制：以泥炭、生产食用菌的下脚料、珍珠岩、细河沙、蛭石和稻壳炭为成分配制基质，将基质的pH值调节为7.5-8.5；基质混合均匀后采用0.01-0.05％的高锰酸钾溶液浇灌淋透，分装入50孔或者72孔的穴盘中；(6)种植：事先在已经浇好水的移栽基质上用镊子戳成一个0.5-1.0cm深的小孔，然后用镊子夹住把小苗插入孔中，左手扶苗，右手把小苗基部的基质压实，浇透定根水，并根据基质的流失情况适当添加相应的基质；(7)移栽后管理：将种植好的穴盘苗放在有遮阳网的荫棚下，遮光率在60-70％，保持良好的通...

【专利技术属性】
技术研发人员：闫海霞，陶大燕，关世凯，张自斌，崔学强，黄昌艳，何荆洲，卜朝阳，孙明艳，
申请(专利权)人：广西壮族自治区农业科学院花卉研究所，
类型：发明
国别省市：广西,45