一种春兰的组织培养方法技术

本发明专利技术涉及一种春兰的组织培养方法，包括外植体的消毒和茎尖的剥离、茎尖诱导根状茎、根状茎的增殖、根状茎分化出芽、壮苗培养和苗生根培养等步骤，在茎尖诱导根状茎、根状茎的增殖、根状茎分化出芽、壮苗培养和苗生根培养时采用不同的培养基去进行培养，满足各个时期的营养和激素需求。该发明专利技术，采用无性繁殖的方式，可以较快的得到更多的春兰植株，满足春兰大规模商业的生产需求。

【技术实现步骤摘要】
一种春兰的组织培养方法
本专利技术涉及植物生物领域，通过组织培养的无性繁殖获得植株，特别涉及一种春兰的组织培养方法。
技术介绍
春兰,别名朵朵香、双飞燕、草兰、草素、山花，原产我国，主要分布在浙江、安徽、河南、甘肃、四川、云南等地，是中国兰花大家族中品种最丰富多彩的一种。春兰是我国兰科植物中分布最广、品种最丰富的一类兰花。如今国内已形成一股“国兰热”，推动了兰花产业的迅速发展，也导致了兰花资源的过度开发和严重破坏，致使春兰已成为濒危物种，“天价兰花”不时见诸报端。由于过度的采挖和环境的恶化，春兰资源受到严重的破坏，常规分株繁殖又不利于春兰品种的优种选育和推广，现有的春兰组织培养方法不仅周期长，且根状茎分化芽少，芽长成的大苗生根难，生产成本高、回报率低。针对这些问题，本专利技术提供一种春兰快速繁殖方法。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种春兰的组织培养方法，提高根状茎分化出芽、小苗生根的概率。本专利技术所采用的技术方案为：一种春兰的组织培养方法，包括外植体的消毒和茎尖的剥离、茎尖诱导根状茎、根状茎的增殖、根状茎分化出芽、壮苗培养和苗生根培养等步骤：在外植体的选择消毒和茎尖的剥离时，取春兰叶片未张开的芽为外植体，用流水冲洗春兰的芽，用酒精、漂白水进行消毒处理，多次用无菌水冲洗，采用多次使用不同的消毒剂的方式对外植体进行消毒处理，确保获得的外植体为无菌体；然后将外层叶片切除，再用升汞、无菌水处理，最后用无菌解剖刀，剥出茎尖，保证得到的茎尖的不会被污染，提高后期培养的存活率。将剥取的茎尖进行诱导根状茎培养，将茎尖接种到由美国花宝1号+马铃薯汁500-1500mg/L+香蕉汁500-1500mg/L+蛋白胨500-1500mg/L+活性炭1g/L组成的第一培养基培养，此培养基中的各组分及配比恰好满足春兰茎尖的营养需求，培养数月后可获得根状茎。然后将根状茎接种至由MS+6-苄氨基腺嘌呤1-5mg/L+萘乙酸0.1-5mg/L+活性炭1g/L组成的根状茎的增殖培养基内进行增殖培养，依据实验结果，在这种成分及比例的培养基中培养，一条根状茎可增殖4-5倍，可获得大量的根状茎，方便后期以指数的增长形式获得春兰植株。接下来将根状茎进行分化出芽培养，将根状茎接种至由MS+6-苄氨基腺嘌呤1-5mg/L+萘乙酸0.1-5mg/L+激动素1-10mg/L组成的根状茎分化出芽培养基中进行分化出芽培养，根状茎分化出芽培养基中的组分及含量能够满足根状茎分化出芽所需的营养和激素需求，能更好的促进根状茎的分化，得到小芽；依据实验结果，每条根状茎均可分化出3-5个小芽。根状茎分化出多个小芽后，则进行壮苗培养，将小芽接种至由MS+6-苄氨基腺嘌呤1-5mg/L+萘乙酸0.1-2mg/L+激动素1-10mg/L+香蕉汁500-1500mg/L组成的壮苗培养基中培养，在培养基中添加合适比例的6-苄氨基腺嘌呤、萘乙酸、激动素可以更好的促进细胞分裂，再加入一定量的营养物质，可以更好的促进小芽分化生长，培养一段时间后，可以获得小苗。将获得的小苗进行苗生根培养，将小苗接种至由美国花宝1号+萘乙酸0.1-5mg/L+吲哚丁酸1-5mg/L+香蕉汁500-1500mg/L+马铃薯汁500-1500mg/L+蛋白胨500-1500mg/L+活性炭1g/L组成的苗生根培养基中进行苗生根培养，在培养基中添加萘乙酸和吲哚丁酸可以更好的促进诱导春兰小苗长根，一段时间后可获得生根的春兰苗。作为优选，在外植体的选择消毒时，先用浓度为70％-75％的酒精浸泡30-35秒，用无菌水冲洗时冲洗3-4次，除去残留在外植体上的酒精；然后采用稀释10倍的漂白水消毒10-15分钟，用无菌水冲洗时冲洗3-4次，将外层叶片切除后，再采用浓度为0.1％-0.2％的升汞消毒10-15分钟，用无菌水冲洗时冲洗3-4次，无菌纸吸干水分，剥出未被污染的茎尖。注意茎尖剥的大小，以0.4-0.8cm的高度为宜，太大消毒不彻底，后期培养容易死亡；太小容易在后期培养时，容易逐渐褐变死亡。作为优选，在茎尖诱导根状茎培养，在第一培养基中培养6个月左右的时间，前30天茎尖在完全黑暗的环境中培养，防止开始培养时茎尖在强光作用下褐变死亡，之后在光照强度1000lux条件下，每天光照12小时，温度为25±1℃的环境中培养，依据实验结果，一个茎尖可获得3-5条根状茎。作为优选，将获得的根状茎转接至由美国花宝1号+马铃薯汁500-1500mg/L+香蕉汁500-1500mg/L+活性炭1g/L组成的第二培养基中继续培养，在这个培养基中可以给根状茎提供其所需的更多的营养物质，让根状茎更好的生长发育；依实验结果显示，培养一段时间后，可获得更加粗壮，长势良好的优质的根状茎。作为优选，在根状茎的增殖培养时，将优质的根状茎转接至根状茎的增殖培养基，每天光照12-14小时，光照强度1000lux，温度25±1℃，培养6个月左右的时间，可获得大量的根状茎，依据实验结果，一条根状茎可以增殖4-5倍，采用优质的根状茎进行增殖培养的增殖率大于直接采用茎尖诱导获得的根状茎进行增殖培养的增殖率。作为优选，在根状茎分化出芽培养时，将优质的根状茎接种至根状茎分化出芽培养基后，每天光照12小时，光照强度1000lux，温度25±1℃，培养6个月左右的时间，根状茎分化出小芽，一个根状茎可以分化3-5个小芽。作为优选，壮苗培养时，将小芽接种至壮苗培养基中，每瓶培养基接种15丛，共45个芽，每天光照12小时，光照强度1000lux，温度25±1℃，培养4个月，最后可以获得20多株小苗。作为优选，采用高度为3cm以上的小苗进行苗生根培养，苗会有较高的生根率，依据实验分析，苗的高度会影响苗的生根率，当苗的高度低于3cm时，大部分的苗不生根，生根率低于10％，而苗的高度高于3cm时，生根率大于60％。将生根的春兰苗，进行炼苗处理后，进行移栽培植，种植的存活率可达95％以上。本专利技术的有益效果在于：(1)本专利技术采用无性组织培养的技术极大程度的提高了春兰的增殖系数，改善传统的分株繁殖，一年仅能繁殖3个芽，难以满足规模化生产的需求这一缺陷，而采用本专利技术的方法，繁殖量呈指数倍增加，能满足春兰商业化生产需求。(2)本专利技术在外植体的消毒过程中，采用酒精、漂白水、升汞等多种消毒剂进行消毒，并采用无菌水进行多次冲洗，可以确保剥出的茎尖是未被污染的，使得茎尖具有较高的存活率。(3)本专利技术在茎尖诱导根状茎培养时采用两种培养基去对茎尖进行培养，相对于采用一种培养基去培养，本专利技术获得的根状茎的生长效果更加理想，有更多的新生点；且在第一种培养基培养的初期，在完全黑暗的环境下培养30天，可以很大程度的减少茎尖的褐变死亡，提高茎尖的存活率。(4)本专利技术中装苗和苗生根分别采用不同的培养基，先获得较高的小苗，再进行苗生根培养，提高苗生根率，解决苗朝根状茎返转，而不生根，存活率低等缺陷，且得到的根生苗在后期移栽培养时，其种植的存活率可高达95％，可以满足春兰大规模商业化的需求。具体实施方式为使本专利技术解决的上述的技术问题、技术方案和优点更加清楚，下面将以具体实施例进行详细描述。本专利技术涉及一种春兰的组织培养方法，包括对外植体的消毒和茎尖的剥离、茎尖诱导根状茎、根状茎的增殖、根状茎分化本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种春兰的组织培养方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)外植体的选择消毒和茎尖的剥离：取春兰叶片未张开的芽为外植体，用流水冲洗春兰的芽，用酒精、漂白水进行消毒处理，多次用无菌水冲洗，然后将外层叶片切除，再用升汞、无菌水处理，最后用无菌解剖刀，剥出茎尖；(2)茎尖诱导根状茎培养：将茎尖接种到由美国花宝1号+马铃薯汁500‑1500mg/L+香蕉汁500‑1500mg/L+蛋白胨500‑1500mg/L+活性炭1g/L组成的第一培养基中培养数月，获得根状茎；(3)根状茎的增殖培养：将根状茎接种至由MS+6‑苄氨基腺嘌呤1‑5mg/L+萘乙酸0.1‑5mg/L+活性炭1g/L组成的根状茎的增殖培养基内进行增殖培养，一条根状茎增殖4‑5倍；(4)根状茎分化出芽培养：将根状茎接种至由MS+6‑苄氨基腺嘌呤1‑5mg/L+萘乙酸0.1‑5mg/L+激动素1‑10mg/L组成的根状茎分化出芽培养基中进行分化出芽培养，一条根状茎分化3‑5个芽；(5)壮苗培养培养：将小芽接种至由MS+6‑苄氨基腺嘌呤1‑5mg/L+萘乙酸0.1‑2mg/L+激动素1‑10mg/L+香蕉汁500‑1500mg/L组成的壮苗培养基中培养，获得小苗；(6)苗生根培养：将小苗接种至由美国花宝1号+萘乙酸0.1‑5mg/L+吲哚丁酸1‑5mg/L+香蕉汁500‑1500mg/L+马铃薯汁500‑1500mg/L+蛋白胨500‑1500mg/L+活性炭1g/L组成的苗生根培养基中进行苗生根培养，获得生根的春兰苗。...

【技术特征摘要】
1.一种春兰的组织培养方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)外植体的选择消毒和茎尖的剥离：取春兰叶片未张开的芽为外植体，用流水冲洗春兰的芽，用酒精、漂白水进行消毒处理，多次用无菌水冲洗，然后将外层叶片切除，再用升汞、无菌水处理，最后用无菌解剖刀，剥出茎尖；(2)茎尖诱导根状茎培养：将茎尖接种到由美国花宝1号+马铃薯汁500-1500mg/L+香蕉汁500-1500mg/L+蛋白胨500-1500mg/L+活性炭1g/L组成的第一培养基中培养数月，获得根状茎；(3)根状茎的增殖培养：将根状茎接种至由MS+6-苄氨基腺嘌呤1-5mg/L+萘乙酸0.1-5mg/L+活性炭1g/L组成的根状茎的增殖培养基内进行增殖培养，一条根状茎增殖4-5倍；(4)根状茎分化出芽培养：将根状茎接种至由MS+6-苄氨基腺嘌呤1-5mg/L+萘乙酸0.1-5mg/L+激动素1-10mg/L组成的根状茎分化出芽培养基中进行分化出芽培养，一条根状茎分化3-5个芽；(5)壮苗培养培养：将小芽接种至由MS+6-苄氨基腺嘌呤1-5mg/L+萘乙酸0.1-2mg/L+激动素1-10mg/L+香蕉汁500-1500mg/L组成的壮苗培养基中培养，获得小苗；(6)苗生根培养：将小苗接种至由美国花宝1号+萘乙酸0.1-5mg/L+吲哚丁酸1-5mg/L+香蕉汁500-1500mg/L+马铃薯汁500-1500mg/L+蛋白胨500-1500mg/L+活性炭1g/L组成的苗生根培养基中进行苗生根培养，获得生根的春兰苗。2.根据权利要求1所述的一种春兰的组织培养方法，其特征在于：在外植体的选择消毒时，先用浓度为70％...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜正丽，
申请(专利权)人：翁源县天下泽雨农业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44