一种朱顶红脱毒组织培养和快速繁殖方法技术

本发明专利技术涉及植物诱导再生脱毒生物技术领域，具体而言，涉及一种朱顶红脱毒组织培养和快速繁殖方法。经高温脱毒、消毒后，取鳞茎片后培养至产生原球茎，再经多代培养以连续脱毒；所述高温脱毒的方法包括：先逐渐升温到40±0.5℃下，再长时间保持在38±0.5℃；以从所述原球茎剥离出来的小原球茎作为外植体进行第一代培养，以后的每一代以上一代培养出的小苗或小原球茎为外植体进行培养；所述第一代培养的外植体为3～8mm的小原球茎；所述第二代培养的外植体为1～3mm的小原球茎；其中，所述取鳞茎片后培养和所述多代培养的每一代培养基中均包含5～60mg/L病毒唑。针对朱顶红的脱毒有良好的效果，可有效防治朱顶红花叶病毒。

【技术实现步骤摘要】
一种朱顶红脱毒组织培养和快速繁殖方法
本专利技术涉及植物诱导再生脱毒生物
，具体而言，涉及一种朱顶红脱毒组织培养和快速繁殖方法。
技术介绍
朱顶红(HippeartrmhrbridumHoprt)又名朱顶兰、孤挺花、华胄兰、百子莲，为多年生草本植物，分布在大部分大陆，原产地热带美洲，具有很高的观赏价值和商业价值。朱顶红花叶病毒(HippearrstrummosaicvirusHimv)属马铃薯病毒和属黄瓜病毒黄瓜花叶病(Culubermosaicviruscmv)。朱顶红受朱顶红病毒的入侵导致朱顶红花叶斑、畸形、严重影响品质，目前尚没有确切的药能有效防治。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供一种朱顶红脱毒组织培养方法，所述的培养方法针对朱顶红的脱毒和生长具有良好的效果，可有效防治朱顶红花叶病毒。本专利技术的第二目的在于提供一种朱顶红的快速繁殖方法，该方法具有植株成活率高、操作简单等优点。为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：一种朱顶红脱毒组织培养方法，经高温脱毒、消毒后，取鳞茎片后培养至产生原球茎，再经多代培养以连续脱毒；所述高温脱毒的方法包括：先逐渐升温到40±0.5℃下，再长时间保持在38±0.5℃；以从所述原球茎剥离出来的小原球茎作为外植体进行第一代培养，以后的每一代以上一代培养出的小苗或小原球茎为外植体进行培养；所述第一代培养的外植体为3～8mm的小原球茎；所述第二代培养的外植体为1～3mm的小原球茎；其中，所述取鳞茎片后培养和所述多代培养的每一代培养基中均包含5～60mg/L病毒唑。一种朱顶红的快速繁殖方法，按上述的脱毒组织培养方法得到组培苗，经病毒检测后，将无毒苗进行驯化移栽与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：(1)本专利技术为单独针对朱顶红花叶病毒脱毒而设计的朱顶红脱毒组织培养和快速繁殖方法，结合了多重脱毒原理专利技术；(2)针对朱顶红病毒在连续高温下钝化的原理，给出精准的温度，可以使朱顶红在节点时间进去进入休眠状态，从而使朱顶红叶芽分化更有活力，能激发朱顶红自身的免疫能力起到自然免疫的成效；(3)针对朱顶红病毒不能进入茎尖组织的原理，给出了精准的取材大小，有效提高了朱顶红茎尖的生存，提高了成活率；(4)针对朱顶红病毒繁殖速度低于朱顶红生长速度，给出精准的时间连续取健康球茎脱毒，避免了组织脱分化引起的朱顶红基因变异；(5)针对病毒唑能抑制病毒DNA和RNA聚合酶从而抑制病毒繁殖的原理，给出精准的药量，不对朱顶红生存产生影响，使朱顶红病株在药的治疗下最终摆脱病毒。具体实施方式通过组培脱毒方式可以很好的防治朱顶红花叶病毒。现在已知的方案是通过植物种子组培，植物花药组培，植物茎尖脱毒组培，物理处理植物脱毒组培，药物处理脱毒组培，以上组培方案只是广泛的针对所有植物，对于单独针对朱顶红脱毒组培的方法到目前为止没有任何方案和方法。本专利技术为单独针对朱顶红的组培和快速繁殖方法。一种朱顶红脱毒组织培养方法，经高温脱毒、消毒后，取鳞茎片后培养至产生原球茎，再经多代培养以连续脱毒；所述高温脱毒的方法包括：先逐渐升温到40±0.5℃下，再长时间保持在38±0.5℃；以从所述原球茎剥离出来的小原球茎作为外植体进行第一代培养，以后的每一代以上一代培养出的小苗或小原球茎为外植体进行培养；所述第一代培养的外植体为3～8mm的小原球茎；所述第二代培养的外植体为1～3mm的小原球茎；其中，所述取鳞茎片后培养和所述多代培养的每一代培养基中均包含5～60mg/L病毒唑。在一些实施方式中，所述高温脱毒前，还包括清洗和晾干；所述清洗包括：去除枯萎的鳞球茎并清洗干净鳞球茎，切除叶子须根，清理鳞球茎盘所有的腐烂点。优选地，所述晾干的时间为7天。在一些实施方式中，所述鳞球茎的直径为5～6cm。在一些实施方式中，所述鳞球茎选自无任何病毒现象的健康朱顶红或表现花叶病毒的朱顶红在一些实施方式中，所述高温脱毒的鳞球茎为被消毒过的泥土包裹的鳞球茎。针对朱顶红病毒在连续高温下钝化的原理，给出精准的时间节点，38～40℃是病毒钝化温度，可以使朱顶红在节点时间进去进入休眠状态，从而使朱顶红叶芽分化更有活力，能激发朱顶红自身的免疫能力起到自然免疫的成效。而若维持长时间高温(40℃)，朱顶红没有办法进入休眠期甚至死亡，故选择在升温到约40℃后，然后降到38℃维持较长时间。在一些实施方式中，所述取鳞茎片后培养至产生原球茎中，培养的时间为14～16天；优选地，将此步骤产生的原球茎在解剖镜下剥离为3～8mm的小原球茎，作为外植体进行第一代培养。在一些实施方式中，将第一代培养得到的小苗切割成4～8块，继续接种培养；优选地，将此步骤产生的原球茎在解剖镜下剥离为1～3mm的小原球茎，作为外植体进行第二代培养。所述取鳞茎片后培养和所述多代培养的每一代培养基中均包含5～60mg/L病毒唑。病毒唑又名病毒灵，主要成分是盐酸吗啉胍(MoroxydineHydrochloride)，其化学名为N-(2-胍基-乙亚氨基)-吗啉的盐酸盐。病毒唑能抑制病毒DNA和RNA聚合酶从而抑制病毒繁殖的原理，给出精准的药量，不对朱顶红的生存产生影响，使朱顶红病株在药的治疗下最终摆脱病毒。在培养基中加入病毒唑，可产生更好的脱毒效果。在一些实施方式中，所述逐渐升温的方法包括：第一天的温度为30±0.5℃，以后每天升温2±0.5℃直至40±0.5℃。在一些实施方式中，所述高温脱毒的条件包括：时间为50～52天，空气湿度为75％～80％。在一些实施方式中，所述高温脱毒在消毒过的培养箱中进行。在一些实施例中，所述高温脱毒的条件还包括时间为51天，空气湿度为78％；时间为50天，空气湿度为80％；时间为52天，空气湿度为75％；时间为50天，空气湿度为76％等(此范围内结果基本一致)。在一些实施方式中，所述多代培养为3～5代培养。在一些实施方式中，所述病毒唑在所述每一代培养基中的含量逐渐降低。在一些实施方式中，所述取鳞茎片后培养、所述第一代培养与所述第二代培养所用的培养基中包含10～60mg/L病毒唑。在一些实施例中，所述取鳞茎片后培养、所述第一代培养与所述第二代培养所用的培养基中包含的病毒唑还可以为15、20、30、40、45、50、55mg/L等。在一些实施方式中，所述第三代培养所用的培养基中包含5～10mg/L病毒唑。在一些实施例中，所述第三代培养所用的培养基中包含的病毒唑还可以为6、7、8、9mg/L等。随着代数的增加，朱顶红中的病毒逐渐减少，相应需要的病毒唑也逐渐减少。在一些实施方式中，所述取鳞茎片后培养和所述多代培养的培养基中均分别包括：MS培养基、6-BA、NAA、KT、花宝一号；所述6-BA、NAA、KT、花宝一号的质量分数分别为1.5～2.0mg/L、0.1～0.2mg/L、0.1～0.mg/L、0.8～1g/L。在一些实施例中，所述6-BA的质量分数还可以为：1.6、1.8、1.9mg/L等；所述NAA的质量分数还可以为：0.15mg/L等；所述KT的质量分数还可以为：0.2、0.3、0.4mg/L等。花宝一号为球茎植物的良好肥料，使用花宝一号将MS培养基中的大量元素进行改良，优化了MS培养基对朱顶红生长的不足，更有利于朱顶红的生长；所述花宝一号的质本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种朱顶红脱毒组织培养方法，其特征在于，经高温脱毒、消毒后，取鳞茎片后培养至产生原球茎，再经多代培养以连续脱毒；所述高温脱毒的方法包括：先逐渐升温到40±0.5℃下，再长时间保持在38±0.5℃；以从所述原球茎剥离出来的小原球茎作为外植体进行第一代培养，以后的每一代以上一代培养出的小苗或小原球茎为外植体进行培养；所述第一代培养的外植体为3～8mm的小原球茎；所述第二代培养的外植体为1～3mm的小原球茎；其中，所述取鳞茎片后培养和所述多代培养的每一代培养基中均包含5～60mg/L病毒唑。

【技术特征摘要】
1.一种朱顶红脱毒组织培养方法，其特征在于，经高温脱毒、消毒后，取鳞茎片后培养至产生原球茎，再经多代培养以连续脱毒；所述高温脱毒的方法包括：先逐渐升温到40±0.5℃下，再长时间保持在38±0.5℃；以从所述原球茎剥离出来的小原球茎作为外植体进行第一代培养，以后的每一代以上一代培养出的小苗或小原球茎为外植体进行培养；所述第一代培养的外植体为3～8mm的小原球茎；所述第二代培养的外植体为1～3mm的小原球茎；其中，所述取鳞茎片后培养和所述多代培养的每一代培养基中均包含5～60mg/L病毒唑。2.根据权利要求1所述的脱毒组织培养方法，其特征在于，所述逐渐升温的方法包括：第一天的温度为30±0.5℃，以后每天升温2±0.5℃直至40±0.5℃；优选地，所述高温脱毒的条件包括：时间为50～52天，空气湿度为75％～80％。3.根据权利要求1所述的脱毒组织培养方法，其特征在于，所述多代培养为3～5代培养；优选地，所述病毒唑在所述每一代培养基中的含量逐渐降低；优选地，所述取鳞茎片后培养、所述第一代培养与所述第二代培养所用的培养基中包含10～60mg/L病毒唑；优选地，所述第三代培养所用的培养基中包含5～10mg/L病毒唑。4.根据权利要求1所述的脱毒组织培养方法，其特征在于，所述取鳞茎片后培养和所述多代培养的培养基中均分别包括：MS培养基、6-BA、NAA、KT、花宝一号；所述6-BA、NAA、KT、花宝一号的质量分数分别为1.5～2.0mg/L、0.1～0.5mg/L、0.1～0.2mg/L、0.8～1g/L；优选地，所述取鳞茎片后培养和所述多代培养的培养基中还分别包括25～35g/L蔗糖；优选地，所述取鳞茎片后培养和多代培养的培养基pH均为5.3～6.0。5.根据权利要求1所述的脱毒组织培养方法，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨晓峰，刘丽侠，杨晴晴，
申请(专利权)人：杨晓峰，
类型：发明
国别省市：广东,44