一种快速检测稻谷中两种稻曲毒素的方法技术

本发明专利技术公开了一种快速检测稻谷中两种稻曲毒素的方法，包括如下步骤：选取粉碎稻谷样品，并将粉碎稻谷样品置于离心管中，加酸性水溶液高速匀浆提取后，高速离心处理，取上清液，残渣再加酸性水溶液高速匀浆均质提取，再次高速离心，合并上清液于浓缩瓶中，浓缩后，待净化，将处理后的上清液置于C18固相萃取柱内，依次用甲醇、超纯水活化，上清液用甲醇以及水混合溶液洗脱，浓缩近干，然后再次利用甲醇与甲酸水混合溶液定容，过滤膜，将净化后的稻谷样品进行超高效液相色谱串联质谱分析本发明专利技术的目的是提供一种简单、快速、经济、灵敏、安全。

【技术实现步骤摘要】
一种快速检测稻谷中两种稻曲毒素的方法
本专利技术涉及检测
，尤其涉及一种快速检测稻谷中两种稻曲毒素的方法。
技术介绍
水稻原产我国，已有七千年多年的种植历史，我国是世界上最大的水稻生产国和消费国，水稻是国民重要主粮之一。我国稻区辽阔，除青海省外，其余各省均有种植水稻。稻曲病是由绿核菌侵染水稻穗部而引起的一种真菌性病害，侵染后除危害自身谷粒外，还致使病穗空秕率增多，千粒重降低，导致减产欠收，直接影响水稻产量和质量，产生的稻曲毒素对人畜均有毒害作用，其中稻曲毒素A的含量最高且活性最大，其次是稻曲毒素B。目前的检测方法主要为有机试剂提取后，通过液相色谱法、液相色谱质联用法、液相色谱高分辨质谱法等，对稻曲毒素进行检测分析，目前的方法存在前处理时间长、试剂消耗大、重复性差、部分设备昂贵不利于实施的缺点。为此，我们提出了一种快速检测稻谷中两种稻曲毒素的方法。
技术实现思路
本专利技术提出了一种快速检测稻谷中两种稻曲毒素的方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。本专利技术提出了一种快速检测稻谷中两种稻曲毒素的方法，包括如下步骤：S1：标准样品溶液制备：选取稻曲毒素A以及稻曲毒素B，分别用超纯水将稻曲毒素A以及稻曲毒素B稀释为质量浓度为0.005mg/L、0.01mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L的标准溶液；S2：样品的提取：选取粉碎稻谷样品，并将粉碎稻谷样品置于离心管中，加酸性水溶液高速匀浆提取后，高速离心处理，取上清液，残渣再加酸性水溶液高速匀浆均质提取，再次高速离心，合并上清液于浓缩瓶中，浓缩后，待净化；S3：样品的净化：将S2中处理后的上清液置于C18固相萃取柱内，依次用甲醇、超纯水活化，上清液用甲醇以及水混合溶液洗脱，浓缩近干，然后再次利用甲醇与甲酸水混合溶液定容，过滤膜，完成后待测；S4：将S3中净化后的稻谷样品进行超高效液相色谱串联质谱分析，具体步骤如下；(1)、选取一支色谱柱，并向其中注入A、B混合流动相，且A相具体为水，所述水内含有甲酸，B相具体为色谱级甲醇，A、B混合流动相以梯度洗脱方式，按0.1-0.4ml/min的流速进入色谱柱内，分析时间5分钟，能够保证目标物和杂质充分分离；(2)、上述完成后，再次对其置于三重四级杆式质谱仪内，以高能电子流轰击样本，使该样本失去电子变为带正电荷的分子离子和碎片离子，通过雾化器、干燥气以及碰撞气对分子离子进行质谱优化处理，且雾化器气流为1.5-3L/min，干燥气气流为15-20L/min，碰撞气为200-230Kpa；S5：添加一定浓度标准溶液至粉碎的空白稻谷样品内，得到添加回收样品，将添加回收样品、待测样品均按照S2、S3以及S4对样本进行处理，以S1中配制的0.005mg/L、0.01mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L六个浓度为标准工作曲线，然后进行LC-MSMS分析分别得到相应峰面积，将添加回收样品和待测样品峰面积带入标准工作曲线方程，计算稻曲毒素A以及稻曲毒素B的添加回收率和变异系数，并得到待测样品中的毒素含量，即完成稻谷中稻曲毒素的检测。优选的，在S2中称取稻谷样品量为10-20g，两次分别加入20-30ml酸性水溶液。优选的，样品提取的酸性水溶液pH＝3-5，若是不处在该区域，则使用甲酸进行调节。优选的，在S2中离心处理中，高速匀浆转速为10000-12000rpm，且时间为2min。优选的，在S3中的甲醇以及水的体积比为5：5-8：2。优选的，在进行超高效液相色谱串联质谱分析中，A相的水中甲酸的含量为0.1-0.2％。优选的，所述色谱柱的柱温均为30-40摄氏度。优选的，所述色谱柱具体为岛津Shim-packXR-C8，规格2.0×100mm，粒径1.6μm，进样量10μl。本专利技术提出的一种快速检测稻谷中两种稻曲毒素的方法，有益效果在于：该稻谷中稻曲毒素的检测方法通过样品加酸化水后，采用高速均质提取，可同时分析稻曲毒素A与稻曲毒素B，方法耗时短，提取不消耗有机试剂，减少了环境污染，净化选择相对成本低廉的C18固相萃取小柱，节约检测成本，重现性好，提高了工作效率。本专利技术的目的是提供一种简单、快速、经济、灵敏、安全，可用于分析和监测水稻中的稻曲毒素A与稻曲毒素B的检测方法。具体实施方式下面结合具体实施例来对本专利技术做进一步说明。实施例1本专利技术提出了一种快速检测稻谷中两种稻曲毒素的方法，包括如下步骤：S1：标准样品溶液制备：选取稻曲毒素A以及稻曲毒素B，分别用超纯水将稻曲毒素A以及稻曲毒素B稀释为质量浓度为0.005mg/L、0.01mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L的标准溶液；S2：样品的提取：选取粉碎稻谷样品，并将粉碎稻谷样品置于离心管中，加酸性水溶液高速匀浆提取后，高速离心处理，取上清液，残渣再加酸性水溶液高速匀浆均质提取，再次高速离心，合并上清液于浓缩瓶中，浓缩后，待净化；S3：样品的净化：将S2中处理后的上清液置于C18固相萃取柱内，依次用甲醇、超纯水活化，上清液用甲醇以及水混合溶液洗脱，浓缩近干，然后再次利用甲醇与甲酸水混合溶液定容，过滤膜，完成后待测；S4：将S3中净化后的稻谷样品进行超高效液相色谱串联质谱分析，具体步骤如下；(1)、选取一支色谱柱，并向其中注入A、B混合流动相，且A相具体为水，所述水内含有甲酸，B相具体为色谱级甲醇，A、B混合流动相以梯度洗脱方式，按0.1-0.4ml/min的流速进入色谱柱内，分析时间5分钟，能够保证目标物和杂质充分分离；梯度洗脱(2)、上述完成后，再次对其置于三重四级杆式质谱仪内，以高能电子流轰击样本，使该样本失去电子变为带正电荷的分子离子和碎片离子，通过雾化器、干燥气以及碰撞气对分子离子进行质谱优化处理，且雾化器气流为1.5L/min，干燥气气流为15L/min，碰撞气为200Kpa；具体见下表：质谱优化条件表a：定量离子；b：定性离子S5：添加一定浓度标准溶液至粉碎的空白稻谷样品内，得到添加回收样品，将添加回收样品、待测样品均按照S2、S3以及S4对样本进行处理，以S1中配制的0.005mg/L、0.01mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L六个浓度为标准工作曲线，然后进行LC-MSMS分析分别得到相应峰面积，将添加回收样品和待测样品峰面积带入标准工作曲线方程，计算稻曲毒素A以及稻曲毒素B的添加回收率和变异系数，并得到待测样品中的毒素含量，即完成稻谷中稻曲毒素的检测。在S2中称取稻谷样品量为10-20g，两次分别加入20-30ml酸性水溶液。样品提取的酸性水溶液pH＝3-5，若是不处在该区域，则使用甲酸进行调节。在S2中离心处理中，高速匀浆转速为10000rpm，且时间为2min。在S3中的甲醇以及水的体积比为5：5-8：2。在进行超高效液相色谱串联质谱分析中，A相的水中甲酸的含量为0.1-0.2％。所述色谱柱的柱温均为30摄氏度。所述色谱柱具体为岛津Shim-packXR-C8，规格2.0×100mm，粒径1.6μm，进样量10μl。实施例2本专利技术提出了一种快速检测稻谷中两种稻曲毒素的方法，包括如下步骤：S1：标准样品溶液制备：选取稻曲毒素本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种快速检测稻谷中两种稻曲毒素的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：标准样品溶液制备：选取稻曲毒素A以及稻曲毒素B，分别用超纯水将稻曲毒素A以及稻曲毒素B稀释为质量浓度为0.005mg/L、0.01mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L的标准溶液；S2：样品的提取：选取粉碎稻谷样品，并将粉碎稻谷样品置于离心管中，加酸性水溶液高速匀浆提取后，高速离心处理，取上清液，残渣再加酸性水溶液高速匀浆均质提取，再次高速离心，合并上清液于浓缩瓶中，浓缩后，待净化；S3：样品的净化：将S2中处理后的上清液置于C18固相萃取柱内，依次用甲醇、超纯水活化，上清液用甲醇以及水混合溶液洗脱，浓缩近干，然后再次利用甲醇与甲酸水混合溶液定容，过滤膜，完成后待测；S4：将S3中净化后的稻谷样品进行超高效液相色谱串联质谱分析，具体步骤如下；(1)、选取一支色谱柱，并向其中注入A、B混合流动相，且A相具体为水，所述水内含有甲酸，B相具体为色谱级甲醇，A、B混合流动相以梯度洗脱方式，按0.1‑0.4ml/min的流速进入色谱柱内，分析时间5分钟，能够保证目标物和杂质充分分离；(2)、上述完成后，再次对其置于三重四级杆式质谱仪内，以高能电子流轰击样本，使该样本失去电子变为带正电荷的分子离子和碎片离子，通过雾化器、干燥气以及碰撞气对分子离子进行质谱优化处理，且雾化器气流为1.5‑3L/min，干燥气气流为15‑20L/min，碰撞气为200‑230Kpa；S5：添加一定浓度标准溶液至粉碎的空白稻谷样品内，得到添加回收样品，将添加回收样品、待测样品均按照S2、S3以及S4对样本进行处理，以S1中配制的0.005mg/L、0.01mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L六个浓度为标准工作曲线，然后进行LC‑MSMS分析分别得到相应峰面积，将添加回收样品和待测样品峰面积带入标准工作曲线方程，计算稻曲毒素A以及稻曲毒素B的添加回收率和变异系数，并得到待测样品中的毒素含量，即完成稻谷中稻曲毒素的检测。...

【技术特征摘要】
1.一种快速检测稻谷中两种稻曲毒素的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：标准样品溶液制备：选取稻曲毒素A以及稻曲毒素B，分别用超纯水将稻曲毒素A以及稻曲毒素B稀释为质量浓度为0.005mg/L、0.01mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L的标准溶液；S2：样品的提取：选取粉碎稻谷样品，并将粉碎稻谷样品置于离心管中，加酸性水溶液高速匀浆提取后，高速离心处理，取上清液，残渣再加酸性水溶液高速匀浆均质提取，再次高速离心，合并上清液于浓缩瓶中，浓缩后，待净化；S3：样品的净化：将S2中处理后的上清液置于C18固相萃取柱内，依次用甲醇、超纯水活化，上清液用甲醇以及水混合溶液洗脱，浓缩近干，然后再次利用甲醇与甲酸水混合溶液定容，过滤膜，完成后待测；S4：将S3中净化后的稻谷样品进行超高效液相色谱串联质谱分析，具体步骤如下；(1)、选取一支色谱柱，并向其中注入A、B混合流动相，且A相具体为水，所述水内含有甲酸，B相具体为色谱级甲醇，A、B混合流动相以梯度洗脱方式，按0.1-0.4ml/min的流速进入色谱柱内，分析时间5分钟，能够保证目标物和杂质充分分离；(2)、上述完成后，再次对其置于三重四级杆式质谱仪内，以高能电子流轰击样本，使该样本失去电子变为带正电荷的分子离子和碎片离子，通过雾化器、干燥气以及碰撞气对分子离子进行质谱优化处理，且雾化器气流为1.5-3L/min，干燥气气流为15-20L/min，碰撞气为200-230Kpa；S5：添加一定浓度标准溶液至粉碎的空白稻谷样品内，得到添加回收样品，将添加回收样品、待测样品均按照S2、S...

【专利技术属性】
技术研发人员：段劲生，董旭，孙明娜，刘琴芳，褚玥，王梅，高同春，
申请(专利权)人：安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所，安徽省食品药品检验研究院，
类型：发明
国别省市：安徽,34