一种使用DNS法测定土壤中葡萄糖的方法技术

本发明专利技术属于土壤检测领域，具体的说是一种使用DNS法测定土壤中葡萄糖的方法，包括以下步骤：步骤A、浸提土壤中的葡萄糖；步骤B、过滤葡萄糖浸提液；步骤C、DNS试剂制取；步骤D、样品测定：通过测定定容后的溶液在λ＝540nm处的吸光度，从而计算测定培养过程中土壤里葡萄糖的剩余量，在使用葡萄糖的土壤培养实验中，可以不用同位素标记的方法即可测出土壤中存留的葡萄糖余量，而且比较精确，回收率高。

【技术实现步骤摘要】
一种使用DNS法测定土壤中葡萄糖的方法
本专利技术属于土壤检测
，具体的说是一种使用DNS法测定土壤中葡萄糖的方法。
技术介绍
土壤环境监测是指通过对影响土壤环境质量因素的代表值的测定，确定环境质量(或污染程度)及其变化趋势。我们通常所说的土壤监测是指土壤环境监测，其一般包括布点采样、样品制备、分析方法、结果表征、资料统计和质量评价等
技术实现思路
，土壤中的葡萄糖能够对土壤中的细菌提供营养，因此，土壤中葡萄糖含量的测量对于土壤中细菌的生存具有不可代替的作用。目前很多土壤的培养试验中会用到葡萄糖培养，但是在培养过程中微生物对葡萄糖的消耗量往往只能在采用同位素标记的葡萄糖的试验中使用，而在使用普通葡萄糖的培养试验中无法之后进行检测，同位素标记的这种方法虽然比较准确，但是成本高，测试周期长测量精确度低，检测效率低，鉴于此，本专利技术提供一种使用DNS法测定土壤中葡萄糖的方法，其具有以下特点：(1)本专利技术通过DNS法对土壤的培养试验中的葡萄糖的剩余量进行检测，能够精确地检测到土壤中葡萄糖的剩余量，加快检测效率，节约时间。(2)在使用葡萄糖的土壤培养实验中，可以不用同位素标记的方法即可测出土壤中存留的葡萄糖余量，而且比较精确，回收率高。
技术实现思路
为了弥补现有技术的不足，本专利技术提出的一种使用DNS法测定土壤中葡萄糖的方法，本专利技术通过DNS法对土壤的培养试验中的葡萄糖的剩余量进行检测，能够精确地检测到土壤中葡萄糖的剩余量，加快检测效率，节约时间；在使用葡萄糖的土壤培养实验中，可以不用同位素标记的方法即可测出土壤中存留的葡萄糖余量，而且比较精确，回收率高。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：本专利技术所述的一种使用DNS法测定土壤中葡萄糖的方法，包括以下步骤：步骤A、浸提土壤中的葡萄糖：用电子天平称取15g鲜土样品装入30mL的离心管中，再加入15mL蒸馏水，放在25℃的震荡仪中以150r/min震荡30min后，然后放在3000r/min的速度离心机中离心10min；步骤B、过滤葡萄糖浸提液：用15mL的针筒吸取步骤A离心所得的上清液，再用0.22μ的水系的针头过滤器过滤，将滤液收集在灭菌的10mL离心管中待测；步骤C、DNS试剂制取：将5.0g3,5-二硝基水杨酸溶于200mL2mol/LNaOH溶液中，再加入500mL含130g酒石酸钾钠的溶液，缓慢混匀后加入5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解后，定容至1000mL放置在暗处保存备用；步骤D、样品测定：在25ml的比色管里加入步骤B过滤后的葡萄糖浸提液1mL，再加入1mL蒸馏水和步骤C制取的2mLDNS试剂，将试管内液体混匀之后，放在水浴锅中沸水浴5min，待冷却后用蒸馏水定容至25ml，测定定容后的溶液在λ＝540nm处的吸光度，从而计算测定培养过程中土壤里葡萄糖的剩余量。具体的，所述步骤C3,5-二硝基水杨酸溶于200mL2mol/LNaOH溶液中不采用高温促溶方式进行处理。具体的，所述步骤D中计算土壤中葡萄糖含量具体方法包括以下步骤：1)、绘制标准曲线：取6支25mL的比色管，其中1支比色管中装入一定量蒸馏水作为对照，另外5支比色管中装入不同容量的葡萄糖标准溶液，然后再加入蒸馏水定容至一定容量；再加入2mLDNS试剂，将试管内液体混匀之后，放在水浴锅中沸水浴5min，待冷却后用蒸馏水定容至25ml，测定定容后的溶液在λ＝540nm处的吸光度，最后以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线；2)、通过步骤1)绘制的标准曲线计算葡萄糖浸提液中葡萄糖的浓度CGLU；3)、通过以下公式计算单位重量干土中的葡萄糖含量CGLU-soil：CGLU-soil＝(Wwater+15)×CGLU/Wdrysoil其中：Wwater——15g鲜土中水分的重量；Wdrysoil——15g鲜土中干土的重量。具体的，所述步骤1)中的蒸馏水为2ml，蒸馏水定容至2ml，5支比色管中葡萄糖标准溶液分别为0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0mL。具体的，所述葡萄糖标准液制备方法如下：预先将分析纯葡萄糖置于80℃烘箱内11-12h，准确称取500mg葡萄糖于烧杯中，用蒸馏水溶解后，移至500mL容量瓶中，定容，摇匀放在温度为4℃存放备用。具体的，所述的葡萄糖标准液溶液发生混浊和出现絮状物现象需重新配制，防止配置的葡萄糖溶液出现变质，影响实验结果。本专利技术的有益效果如下：(1)本专利技术通过DNS法对土壤的培养试验中的葡萄糖的剩余量进行检测，能够精确地检测到土壤中葡萄糖的剩余量，加快检测效率，节约时间。(2)在使用葡萄糖的土壤培养实验中，可以不用同位素标记的方法即可测出土壤中存留的葡萄糖余量，而且比较精确，回收率高。附图说明下面结合附图对本专利技术作进一步说明。图1是本专利技术的流程图；图2是本专利技术的实施例中连续七天培养过程中土壤葡萄糖浓度变化图。具体实施方式为了使本专利技术实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施方式，进一步阐述本专利技术。如图1至图2所示，本专利技术所述的一种使用DNS法测定土壤中葡萄糖的方法，包括以下步骤：步骤A、浸提土壤中的葡萄糖：用电子天平称取15g鲜土样品装入30mL的离心管中，再加入15mL蒸馏水，放在25℃的震荡仪中以150r/min震荡30min后，然后放在3000r/min的速度离心机中离心10min；步骤B、过滤葡萄糖浸提液：用15mL的针筒吸取步骤A离心所得的上清液，再用0.22μ的水系的针头过滤器过滤，将滤液收集在灭菌的10mL离心管中待测；步骤C、DNS试剂制取：将5.0g3,5-二硝基水杨酸溶于200mL2mol/LNaOH溶液中，再加入500mL含130g酒石酸钾钠的溶液，缓慢混匀后加入5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解后，定容至1000mL放置在暗处保存备用；步骤D、样品测定：在25ml的比色管里加入步骤B过滤后的葡萄糖浸提液1mL，再加入1mL蒸馏水和步骤C制取的2mLDNS试剂，将试管内液体混匀之后，放在水浴锅中沸水浴5min，待冷却后用蒸馏水定容至25ml，测定定容后的溶液在λ＝540nm处的吸光度，从而计算测定培养过程中土壤里葡萄糖的剩余量。具体的，所述步骤C3,5-二硝基水杨酸溶于200mL2mol/LNaOH溶液中不采用高温促溶方式进行处理。具体的，所述步骤D中计算土壤中葡萄糖含量具体方法包括以下步骤：1)、绘制标准曲线：取6支25mL的比色管，其中1支比色管中装入一定量蒸馏水作为对照，另外5支比色管中装入不同容量的葡萄糖标准溶液，然后再加入蒸馏水定容至一定容量；再加入2mLDNS试剂，将试管内液体混匀之后，放在水浴锅中沸水浴5min，待冷却后用蒸馏水定容至25ml，测定定容后的溶液在λ＝540nm处的吸光度，最后以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线；2)、通过步骤1)绘制的标准曲线计算葡萄糖浸提液中葡萄糖的浓度CGLU；3)、通过以下公式计算单位重量干土中的葡萄糖含量CGLU-soil：CGLU-soil＝(Wwater+15)×CGLU/Wdrysoil其中：Wwater——15g鲜土中水分的重量；Wdrysoil——15g鲜土中干土的重量。具体的，所述步骤1)中的蒸馏水为2本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种使用DNS法测定土壤中葡萄糖的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤A、浸提土壤中的葡萄糖：用电子天平称取15g鲜土样品装入30mL的离心管中，再加入15mL蒸馏水，放在25℃的震荡仪中以150r/min震荡30min后，然后放在3000r/min的速度离心机中离心10min；步骤B、过滤葡萄糖浸提液：用15mL的针筒吸取步骤A离心所得的上清液，再用0.22μ的水系的针头过滤器过滤，将滤液收集在灭菌的10mL离心管中待测；步骤C、DNS试剂制取：将5.0g 3,5‑二硝基水杨酸溶于200mL 2mol/L NaOH溶液中，再加入500mL含130g酒石酸钾钠的溶液，缓慢混匀后加入5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解后，定容至1000mL放置在暗处保存备用；步骤D、样品测定：在25ml的比色管里加入步骤B过滤后的葡萄糖浸提液1mL，再加入1mL蒸馏水和步骤C制取的2mL DNS试剂，将试管内液体混匀之后，放在水浴锅中沸水浴5min，待冷却后用蒸馏水定容至25ml，测定定容后的溶液在λ＝540nm处的吸光度，从而计算测定培养过程中土壤里葡萄糖的剩余量。

【技术特征摘要】
1.一种使用DNS法测定土壤中葡萄糖的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤A、浸提土壤中的葡萄糖：用电子天平称取15g鲜土样品装入30mL的离心管中，再加入15mL蒸馏水，放在25℃的震荡仪中以150r/min震荡30min后，然后放在3000r/min的速度离心机中离心10min；步骤B、过滤葡萄糖浸提液：用15mL的针筒吸取步骤A离心所得的上清液，再用0.22μ的水系的针头过滤器过滤，将滤液收集在灭菌的10mL离心管中待测；步骤C、DNS试剂制取：将5.0g3,5-二硝基水杨酸溶于200mL2mol/LNaOH溶液中，再加入500mL含130g酒石酸钾钠的溶液，缓慢混匀后加入5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解后，定容至1000mL放置在暗处保存备用；步骤D、样品测定：在25ml的比色管里加入步骤B过滤后的葡萄糖浸提液1mL，再加入1mL蒸馏水和步骤C制取的2mLDNS试剂，将试管内液体混匀之后，放在水浴锅中沸水浴5min，待冷却后用蒸馏水定容至25ml，测定定容后的溶液在λ＝540nm处的吸光度，从而计算测定培养过程中土壤里葡萄糖的剩余量。2.根据权利要求1所述的一种使用DNS法测定土壤中葡萄糖的方法，其特征在于：所述步骤C3,5-二硝基水杨酸溶于200mL2mol/LNaOH溶液中不采用高温促溶方式进行处理。3.根据权利要求1所述的一种使用DNS法测定土壤中葡萄糖的方法，其特征在于：所述步骤D中计算土壤中葡萄糖含量具体方法包括以下步骤：1)、绘制标...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁辰飞，赵均宁，赵安英，卜爱爱，刘亦荐，陆潇，
申请(专利权)人：浙江农林大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33