食品级脲酶、制备方法及其在黄酒中的应用技术

本发明专利技术公开了食品级脲酶、制备方法及其在黄酒中的应用。所述食品级脲酶的制备方法，包括下述步骤：(1)配置载体质量分数2～5％的载体乙酸溶液；(2)将载体乙酸溶液加入1～10mol/L氢氧化钠水溶液，混匀后静置，过滤，收集滤饼；(3)将滤饼洗涤至洗液呈中性；取洗涤后的滤饼2～4g，加入质量分数2～5％的戊二醛水溶液20～50mL，交联反应30～40分钟，得到交联反应液；(4)向交联反应液中加入0.1～0.3mg/mL脲酶水溶液10～12mL，反应8～10小时，过滤，收集滤饼，冲洗，干燥。本发明专利技术制备的食品级脲酶，能够高效的降解黄酒中的尿素和氨基甲酸乙酯，使得黄酒更加健康，并具有良好的保健功效。

【技术实现步骤摘要】
食品级脲酶、制备方法及其在黄酒中的应用
本专利技术属于黄酒
，具体涉及一种食品级脲酶、制备方法及其在黄酒中的应用。
技术介绍
随着现代人生活水平的提高，健康饮酒意识逐渐增强，酒类市场的消费需求正从高度酒向低度酒、勾兑酒向发酵酒转变。黄酒是低耗粮、低酒度、高营养的酿造酒。作为中国的一种传统酒，黄酒历来就有“液体蛋糕”之美誉。如将黄酒的口感和营养价值进一步增强，必能迎合广大消费者的青睐。《本草纲目》记载，黄酒行药势，通血脉，润皮肤，散湿气。脲酶(Urease,EC3.5.1.5)，广泛存在于动物、植物、细菌、真菌等中,其能专一性的催化尿素水解产生两分子氨和一分子碳酸。脲酶是世界上首次成功获得的结晶态的酶，它于1926年由Summer首次从刀豆中提取出。根据脲酶作用的最适pH值,可将脲酶分为酸性脲酶、中性脲酶和碱性脲酶。氨基甲酸乙酯(EthylCarbamate或Urethane，简称EC)，具有遗传毒性及致癌性，广泛存在于多种发酵食品(如酱油、食醋、泡菜)和酒精饮料(如黄酒、白酒、葡萄酒等)中。研究证实发酵食品(如黄酒、酱油等)中尿素是EC形成的主要前体物质，它和乙醇自发的反应生成EC，从而严重影响人类的健康。酸性脲酶可以高效消除发酵食品(如酒精类饮料)中的尿素，从而可以有效的减少了EC的形成。
技术实现思路
针对现有技术存在的不足，本专利技术目的是通过如下技术方案实现的：本专利技术公开了一种食品级脲酶、制备方法及其在黄酒中的应用。本专利技术提供了一种食品级脲酶的制备方法，包括下述步骤：(1)采用质量分数1～2％的乙酸溶液配置载体质量分数2～5％的载体溶液；(2)将载体溶液加入1～10mol/L的氢氧化钠水溶液中，载体溶液和氢氧化钠水溶液的体积比为(0.1～0.3)：1，混匀后静置，过滤，收集滤饼；(3)将滤饼洗涤至洗液呈中性；取洗涤后的滤饼2～4g，加入质量分数2～5％的戊二醛水溶液20～50mL，交联反应30～40分钟，得到交联反应液；(4)向交联反应液中加入0.1～.0.3mg/mL的脲酶水溶液10～12mL，反应8～10小时，过滤，收集滤饼；将滤饼用磷酸盐缓冲液冲洗后，干燥，得到所述食品级脲酶。优选的，一种食品级脲酶的制备方法，包括下述步骤：(1)采用质量分数1～2％的乙酸溶液配置载体质量分数2～5％的载体溶液；(2)将载体溶液加入1～10mol/L的氢氧化钠水溶液中，载体溶液和氢氧化钠水溶液的体积比为(0.1～0.3)：1，混匀后放置20～30分钟，过滤，收集滤饼；(3)将滤饼用蒸馏水洗涤至洗液呈中性；取洗涤后的滤饼2～4g，加入质量分数2～5％的戊二醛水溶液20～50mL，于20～30℃交联反应30～40分钟，得到交联反应液；(4)向交联反应液中加入0.1～.0.3mg/mL的脲酶水溶液10～12mL，于2～4℃反应8～10小时，过滤，收集滤饼；将滤饼用0.2mol/L、pH7.6的磷酸盐缓冲液冲洗后，于40～45℃干燥6～12小时，得到所述食品级脲酶。所述载体为壳聚糖和/或二乙氨基乙基纤维素。作为更优的技术方案，所述载体为由二乙氨基乙基纤维素和壳聚糖以质量比(1-3)：1组成的混合物。作为最优的技术方案，所述载体为由二乙氨基乙基纤维素和壳聚糖以质量比1.5：1组成的混合物。本专利技术还提供了一种食品级脲酶，采用上述方法制备而成。本专利技术提供了一种食品级脲酶在制备黄酒的应用。本专利技术提供了一种食品级脲酶在制备黄酒的应用，所述应用，是用于降低或消除黄酒中的尿素和/或氨基甲酸乙酯。本专利技术制备的食品级脲酶，能够高效的降解黄酒中的尿素和氨基甲酸乙酯，使得黄酒更加健康，并具有良好的保健功效。具体实施方式玛咖黄酒中生物胺含量的检测：取1mL玛咖黄酒与1mL饱和碳酸氢钠溶液混合，加入2mL丹磺酰氯衍生试剂，混匀1分钟，置于黑暗60℃恒温水浴锅中衍生30分钟，25℃静置10分钟后加入0.5mL饱和氯化钠溶液，混匀后用乙醚作萃取剂，充分涡旋后静置分层，取上层有机相。再萃取两次，合并上层有机相用氮吹仪吹干后用1mL乙腈溶解，过0.22μm滤膜后可直接进HPLC测定。色谱柱：XBridgeC18(250mm×4.6mm，5μm)；检测波长：紫外检测器，λ＝254nm；柱温：30℃；流速：0.8mL/min；进样量：10μL；流动相：A：超纯水，B：乙腈；洗脱：梯度洗脱。玛咖黄酒中氨基甲酸乙酯含量的测定：准确称取3.6mg氨基甲酸乙酯标准品，用30％甲醇定容至200mL，配制成18μg/mL标准溶液，依次用30％甲醇稀释至4.5μg/mL、1.8μg/mL、0.9μg/mL、0.18μg/mL的氨基甲酸乙酯标准溶液；样品的制备：取50mL玛咖黄酒与50mL乙酸乙酯混匀，萃取后的液体在55℃下真空旋转蒸发，对样品进行浓缩，蒸干后加5mL的30％甲醇，样品体积浓缩至原体积的1/10；样品的衍生化：取试验前配置好的0.1mL、1.5mol/L盐酸和0.2mL、0.01mol/L占吨醇正丙醇溶液于离心管中，再加入1mL样品，混合均匀，25℃放置30分钟，使其充分反应后进样测定。色谱条件：色谱柱：C18反相柱(250x4.6mm，4μm)，流动相：甲醇和水，柱温：35℃，进样量：20μL，激发波长233nm，发射波长600nm。实施例中各原料介绍：实施例中糯米，品种为怀远糯米，产自安徽省蚌埠市。实施例中玛咖粉，由黑玛咖(购自云南村野之夫商贸有限公司)清除表面杂质后，粉碎至300目得到。实施例中麦曲，购自永州雅大科技实业有限公司，型号为YDQ-hj。实施例中酒药，由南通市港闸区华良酒药厂提供，型号为01，酶活力保存率80％。实施例中乳酸菌，购自青岛天方生物技术有限公司，型号00，有效含量100亿/mL。实施例中液体MRS培养基的配置：蛋白胨10克，牛肉膏10克，酵母膏5克，磷酸氢二钾2克，柠檬酸二铵2克，乙酸钠5克，葡萄糖20克，吐温801毫升，硫酸镁0.5克，硫酸锰0.25克，琼脂15克，用蒸馏水定容至1升；调节pH至6.2，在101Kpa、121℃的条件下高压灭菌15分钟。实施例中脱脂乳粉，购自郑州市伟丰生物科技有限公司，型号26999，有效物质含量54.5％。实施例中海藻糖，食品级，购自西安浩天生物工程有限公司。实施例中麦芽，购自亳州市常富药业销售有限公司，产地安徽。实施例中L-鸟氨酸盐酸盐，CAS号：3184-13-2，购自无锡景耀生物科技有限公司。实施例中乙酸，CAS号：72196-32-8，购自南京康满林化工实业有限公司。实施例中戊二醛，CAS号：111-30-8，购自阿法埃莎(中国)化学有限公司。实施例中脲酶，食品级，购自武汉佰兴生物科技有限公司，酶活力10万U/g。实施例中0.2mol/L、pH7.6的磷酸盐缓冲液，由0.2mol/L、87mL磷酸氢二钠水溶液和0.2mol/L、13mL磷酸二氢钠水溶液混合均匀得到。实施例中二乙氨基乙基纤维素，CAS号：9013-34-7，购自上海迈瑞尔化学技术有限公司，产品编号B70058。实施例中壳聚糖，CAS号：9012-76-4，购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司，脱乙酰度95％。实施例1所述玛咖黄酒，采用以下步骤制备而成：S1浸米：将糯米生米125公斤放入干净的陶缸中，摊平，加本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种食品级脲酶的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：(1)采用质量分数1～2％的乙酸溶液配置载体质量分数2～5％的载体乙酸溶液；(2)将载体溶液加入1～10mol/L的氢氧化钠水溶液中，载体溶液和氢氧化钠水溶液的体积比为(0.1～0.3)：1，混匀后静置，过滤，收集滤饼；(3)将滤饼洗涤至洗液呈中性；取洗涤后的滤饼2～4g，加入质量分数2～5％的戊二醛水溶液20～50mL，交联反应30～40分钟，得到交联反应液；(4)向交联反应液中加入0.1～.0.3mg/mL的脲酶水溶液10～12mL，反应8～10小时，过滤，收集滤饼；将滤饼用磷酸盐缓冲液冲洗后，干燥，得到所述食品级脲酶。

【技术特征摘要】
1.一种食品级脲酶的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：(1)采用质量分数1～2％的乙酸溶液配置载体质量分数2～5％的载体乙酸溶液；(2)将载体溶液加入1～10mol/L的氢氧化钠水溶液中，载体溶液和氢氧化钠水溶液的体积比为(0.1～0.3)：1，混匀后静置，过滤，收集滤饼；(3)将滤饼洗涤至洗液呈中性；取洗涤后的滤饼2～4g，加入质量分数2～5％的戊二醛水溶液20～50mL，交联反应30～40分钟，得到交联反应液；(4)向交联反应液中加入0.1～.0.3mg/mL的脲酶水溶液10～12mL，反应8～10小时，过滤，收集滤饼；将滤饼用磷酸盐缓冲液冲洗后，干燥，得到所述食品级脲酶。2.如权利要求1所述的食品级脲酶的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：(1)采用质量分数1～2％的乙酸溶液配置载体质量分数2～5％的载体溶液；(2)将载体溶液加入1～10mol/L的氢氧化钠水溶液中，载体溶液和氢氧化钠水溶液的...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄月兔，
申请(专利权)人：黄月兔，
类型：发明
国别省市：浙江,33