沙棘中酚类物质定量检测方法技术

本发明专利技术提供一种沙棘中酚类物质定量检测的方法，包括：制备混标工作液：将多种酚类标定物溶于溶剂中，得到混标工作液；制备内标溶液：将2‑Cl‑苯丙氨酸溶于溶剂中，得到内标溶液；制备标准曲线：取N组不同体积的所述混标工作液和N组相同体积的所述内标溶液混合，对所得混合液进行GC‑MS分析，得到标准曲线；和处理沙棘样品，得到检测样本进行GC‑MS分析，根据所述标准曲线定量检测沙棘中酚类物质。采用本发明专利技术的方法可准确地测定出沙棘中各酚类物质的含量，具有稳定、准确、可靠的优点。

Quantitative detection of phenolic compounds in Seabuckthorn

The invention provides a method for quantitative determination of phenolic substances in seabuckthorn, which includes: preparing mixed standard working fluid: dissolving various phenolic calibration substances in solvents to obtain mixed standard working fluid; preparing internal standard solution: dissolving 2 Cl phenylalanine in solvents to obtain internal standard solution; preparing standard curve: taking different volumes of N group as reference curve; The mixed standard working fluid and the internal standard solution with the same volume of group N were mixed, and the mixed liquid was analyzed by GC MS to obtain the standard curve; and the samples were processed to obtain the detection samples for GC MS analysis, and the phenolic substances in Seabuckthorn were quantitatively detected according to the standard curve. The method of the invention can accurately determine the content of various phenolic substances in seabuckthorn, and has the advantages of stability, accuracy and reliability.

【技术实现步骤摘要】
沙棘中酚类物质定量检测方法
本专利技术大致涉及化学物质定量检测方法类，具体涉及一种沙棘中酚类物质的定量检测方法。
技术介绍
酚类物质中多含有酮基与羟基两种基团，这两种基团使得酚类物质极性较大，挥发性差，热稳定性较差，在进行GC-MS分析时导致无法定量或者定量不准确，为了更好的进行定量，往往会对物质进行衍生化处理，衍生化技术是通过化学反应将样品中难于分析检测的目标化合物定量的转化成另一种易于分析检测的化合物。通过衍生化可以有效地降低待测物的极性提高挥发性，增加热稳定性，从而提高检测灵敏度和改善色谱峰型。
技术介绍
部分的内容仅仅是专利技术人所知晓的技术，并不当然代表本领域的现有技术。
技术实现思路
针对现有技术存在问题中的一个或多个，本专利技术提供一种沙棘中酚类物质的定量检测方法，包括：制备混标工作液：将多种酚类标定物溶于溶剂中，得到混标工作液；制备内标溶液：将2-Cl-苯丙氨酸溶于溶剂中，得到内标溶液；制备标准曲线：取N组不同体积的所述混标工作液和N组相同体积的所述内标溶液混合，对所得混合液进行GC-MS分析，得到标准曲线；和处理沙棘样品，得到检测样本进行GC-MS分析，根据所述标准曲线定量检测沙棘中酚类物质。根据本专利技术的一个方面，所述多种酚类标定物包括芦丁、异鼠李素、山奈酚、杨梅素、柚皮素、槲皮素和维生素E。根据本专利技术的一个方面，所述混标工作液和所述内标溶液的溶剂为甲醇。根据本专利技术的一个方面，所述制备混标工作液步骤中，所述混标工作液中芦丁、异鼠李素、山奈酚、杨梅素、柚皮素、槲皮素和维生素E的浓度分别为：芦丁0.125mg/mL、异鼠李素0.00625mg/mL、山奈酚0.5μg/mL、杨梅素2.5μg/mL、柚皮素2.5μg/mL、槲皮素5μg/mL和维生素E25μg/mL；和/或所述制备内标溶液步骤中，所述内标溶液中2-Cl-苯丙氨酸的浓度为0.03mg/mL。根据本专利技术的一个方面，所述制备标准曲线的步骤中，所述N为大于或等于5的整数，优选地，N为7；和/或所述N组不同体积的所述混标工作液的体积为0-400μL中的任意N组，优选为400μL、200μL、100μL、40μL、20μL、10μL和4μL；和/或所述N组相同体积的所述内标溶液的体积均为40μL。根据本专利技术的一个方面，所述制备混标工作液步骤中，所述混标工作液包括混标工作液A和混标工作液B。根据本专利技术的一个方面，所述混标工作液A的制备方法为：制备标准储备液：将芦丁、异鼠李素溶于溶剂中，分别制备得到0.5mg/mL的芦丁标准储备液和0.025mg/mL的异鼠李素标准储备液；和制备混标工作液A：按照体积比为1:1将所述芦丁标准储备液和异鼠李素标准储备液混合，得到混标工作液A；根据本专利技术的一个方面，所述混标工作液B的制备方法为：制备标准储备液：取山奈酚、杨梅素、柚皮素、槲皮素和维生素E溶于溶剂中，分别制备得到1mg/mL的标准储备液；制备标准品工作液：分别稀释所述山奈酚、杨梅素、柚皮素、槲皮素和维生素E的标准储备液，得到10μg/mL的山奈酚标准品工作液、50μg/mL的杨梅素标准品工作液、50μg/mL的柚皮素标准品工作液、100μg/mL的槲皮素标准品工作液和500μg/mL的维生素E标准品工作液；和制备混标工作液B：取相同体积V的各标准品工作液混合后，用甲醇稀释至体积为10V，得到混标工作液B。根据本专利技术的一个方面，所述N组不同体积的所述混标工作液A的体积为0-200μL中的任意N组，且每组中所述混标工作液A和所述混标工作液B的体积相同，优选为200μL、100μL、50μL、20μL、10μL、5μL和2μL；和/或所述N组相同体积的所述内标溶液的体积为40μL。根据本专利技术的一个方面，所述制备标准曲线步骤中，对所述混合液进行GC-MS分析之前，事先对所述混合液进行衍生化处理。根据本专利技术的一个方面，所述对混合液进行衍生化处理包括：挥干所述混合液，得到挥干后的标准品；优选地，所述挥干采用快速离心干燥仪；向所述挥干后的标准品中加入甲氧胺盐酸吡啶溶液后，进行震荡培养,得到震荡培养物；优选地，所述甲氧胺盐酸吡啶溶液的浓度为15mg/mL，加入的量为80μL；所述震荡培养的温度为37℃，培养时间为90min；进一步优选地，所述震荡培养前先进行涡旋震荡，所述涡旋震荡的时间为1-5min，优选2min；向所述震荡培养物中加入BSTFA衍生试剂进行反应，得到衍生化标准品；优选地，所述BSTFA衍生试剂中含有1％TMCS，加入的量为80μL；所述反应温度为70℃，反应时间为60min；进一步优选地，所述反应之前，事先进行涡旋震荡，所述涡旋震荡的时间为1-5min，优选2min；和室温条件下放置所述衍生化标准品，得到分析标准品，进行GC-MS分析；优选地，所述室温条件下放置的时间为30min。根据本专利技术的一个方面，所述制备标准曲线步骤中，所述混标工作液中各酚类标定物的质谱响应强度＝该酚类标定物特征碎片质谱响应强度/内标特征碎片质谱响应强度，以加入的混标工作液中各酚类标定物的量作为自变量x，以加入的混标工作液中各酚类标定物的质谱响应强度为因变量y，得到所述混标工作液中各酚类标定物的标准曲线。根据本专利技术的一个方面，所述处理沙棘样品包括提取沙棘内含物和衍生化所述沙棘内含物。根据本专利技术的一个方面，所述提取沙棘内含物的方法为：向沙棘样品中加入冷甲醇-水和所述内标溶液，进行匀浆，得到匀浆物；优选地，所述沙棘样品的量为60mg，事先保存在液氮中，所述冷甲醇-水的体积比为3:1,加入的量为960μL，所述内标溶液加入的量为40μL；和提取所述匀浆物并离心，得到沙棘内含物；优选地，所述提取方法为超声提取，超声功率为100-250W，提取时间为20-40min；所述离心转速为14000rpm，离心温度为4℃，离心时间为10min；根据本专利技术的一个方面，所述衍生化所述沙棘内含物的方法为：挥干所述沙棘内含物，得到挥干后的待测品；优选地，所述挥干采用快速离心浓缩仪；向所述挥干后的待测品中加入甲氧胺盐酸吡啶溶液后，进行震荡培养,得到震荡培养待测物；优选地，所述甲氧胺盐酸吡啶溶液的浓度为15mg/mL，加入的量为80μL；所述震荡培养的温度为37℃，培养时间为90min；进一步优选地，所述震荡培养前先进行涡旋震荡，所述涡旋震荡的时间为1-5min，优选2min；向所述震荡培养待测物中加入BSTFA衍生试剂进行反应，得到衍生化待测品；优选地，所述BSTFA衍生试剂中含有1％TMCS，加入的量为80μL；所述反应温度为70℃，反应时间为60min；进一步优选地，所述反应之前，事先进行涡旋震荡，所述涡旋震荡的时间为1-5min，优选2min；和室温条件下放置所述衍生化待测品，得到检测样本，进行GC-MS分析；优选地，所述室温条件下放置的时间为30min。根据本专利技术的一个方面，所述GC-MS分析采用高纯氦气作为载气，优选地，载气流速1.0mL/min；和/或所述GC-MS分析采用的升温程序为：以15℃/min从60℃升温至170℃；以5℃/min从170℃升温至305℃；305℃维持6.7min；和/或所述GC-MS分析的进样口温度为260℃，EI源温度为230℃，电压为70V；和/或所述GC-MS分本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种沙棘中酚类物质定量检测的方法，包括：制备混标工作液：将多种酚类标定物溶于溶剂中，得到混标工作液；制备内标溶液：将2‑Cl‑苯丙氨酸溶于溶剂中，得到内标溶液；制备标准曲线：取N组不同体积的所述混标工作液和N组相同体积的所述内标溶液混合，对所得混合液进行GC‑MS分析，得到标准曲线；和处理沙棘样品，得到检测样本进行GC‑MS分析，根据所述标准曲线定量检测沙棘中酚类物质。

【技术特征摘要】
1.一种沙棘中酚类物质定量检测的方法，包括：制备混标工作液：将多种酚类标定物溶于溶剂中，得到混标工作液；制备内标溶液：将2-Cl-苯丙氨酸溶于溶剂中，得到内标溶液；制备标准曲线：取N组不同体积的所述混标工作液和N组相同体积的所述内标溶液混合，对所得混合液进行GC-MS分析，得到标准曲线；和处理沙棘样品，得到检测样本进行GC-MS分析，根据所述标准曲线定量检测沙棘中酚类物质。2.根据权利要求1所述的沙棘中酚类物质定量检测的方法，所述多种酚类标定物包括芦丁、异鼠李素、山奈酚、杨梅素、柚皮素、槲皮素和维生素E；和/或所述混标工作液和所述内标溶液的溶剂为甲醇。3.根据权利要求2所述的沙棘中酚类物质定量检测的方法，所述制备混标工作液步骤中，所述混标工作液中芦丁、异鼠李素、山奈酚、杨梅素、柚皮素、槲皮素和维生素E的浓度分别为：芦丁0.125mg/mL、异鼠李素0.00625mg/mL、山奈酚0.5μg/mL、杨梅素2.5μg/mL、柚皮素2.5μg/mL、槲皮素5μg/mL和维生素E25μg/mL；和/或所述制备内标溶液步骤中，所述内标溶液中2-Cl-苯丙氨酸的浓度为0.03mg/mL。4.根据权利要求3所述的沙棘中酚类物质定量检测的方法，所述制备标准曲线的步骤中，所述N为大于或等于5的整数，优选地，N为7；和/或所述N组不同体积的所述混标工作液的体积为0-400μL中的任意N组，优选为400μL、200μL、100μL、40μL、20μL、10μL和4μL；和/或所述N组相同体积的所述内标溶液的体积均为40μL。5.根据权利要求2所述的沙棘中酚类物质定量检测的方法，所述制备混标工作液步骤中，所述混标工作液包括混标工作液A和混标工作液B；优选地，所述混标工作液A的制备方法为：制备标准储备液：将芦丁、异鼠李素溶于溶剂中，分别制备得到0.5mg/mL的芦丁标准储备液和0.025mg/mL的异鼠李素标准储备液；和制备混标工作液A：按照体积比为1:1将所述芦丁标准储备液和异鼠李素标准储备液混合，得到混标工作液A；优选地，所述混标工作液B的制备方法为：制备标准储备液：取山奈酚、杨梅素、柚皮素、槲皮素、棕矢车菊素、维生素E和花翠素溶于溶剂中，分别制备得到1mg/mL的标准储备液；制备标准品工作液：分别稀释所述山奈酚、杨梅素、柚皮素、槲皮素和维生素E的标准储备液，得到10μg/mL的山奈酚标准品工作液、50μg/mL的杨梅素标准品工作液、50μg/mL的柚皮素标准品工作液、100μg/mL的槲皮素标准品工作液和500μg/mL的维生素E标准品工作液；和制备混标工作液B：取相同体积V的各标准品工作液混合后，用甲醇稀释至体积为10V，得到混标工作液B。6.根据权利要求5所述的沙棘中酚类物质定量检测的方法，所述N组不同体积的所述混标工作液A的体积为0-200μL中的任意N组，且每组中所述混标工作液A和所述混标工作液B的体积相同，优选为200μL、100μL、50μL、20μL、10μL、5μL和2μL；和/或所述N组相同体积的所述内标溶液的体积为40μL。7.根据权利要求1所述的沙棘中酚类物质定量检测的方法，所述制备标准曲线步骤中，对所述混合液进行GC-MS分析之前，事先对所述混合液进行衍生化处理；优选地，所述对混合液进行衍生化处理包括：挥干所述混合液，得到挥干后的标准品；优选地，所述挥干采用快速离心干燥仪；向所述挥干...

【专利技术属性】
技术研发人员：张建国，何彩云，陈道国，
申请(专利权)人：中国林业科学研究院林业研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11