本发明专利技术涉及一种结构新颖的香豆素衍生物代谢物IMM‑H004‑7‑O‑β‑葡萄糖醛酸(IMM‑H004G)及制备方法以及该类化合物在防治脑缺血及阿尔茨海默病的应用。药代动力学研究发现，IMM‑H004脑内半衰期小于20min，代谢产物IMM‑H004G的半衰期可达24h，脑内暴露量是原型药的2.3倍。利用糖基转移酶对IMM‑H004进行酶法葡萄糖醛酸基化，经分离纯化，得到新化合物IMM‑H004G。药理学试验证明，该化合物能有效抑制氧糖剥夺、Aβ及冈田酸诱导的神经细胞损伤，显著改善大鼠大脑中动脉闭塞再灌注所致行为学障碍，降低脑梗死面积，具有与IMM‑H004类似的抗脑缺血作用。IMM‑H004G可能是IMM‑H004体内抗脑缺血作用的主要有效代谢产物，可用于制备成防治脑缺血、阿尔茨海默病的药物。
【技术实现步骤摘要】
一种香豆素衍生物代谢产物的制备及其在防治脑缺血和阿尔茨海默病中的应用
本专利技术属于医药领域，具体涉及一种香豆素类衍生物IMM-H004的代谢产物——新化合物IMM-H004-7-O-β-葡萄糖醛酸的制备及其在防治脑缺血及阿尔茨海默病中的应用。
技术介绍
脑缺血和阿尔茨海默病是两大重要老年疾病，随着我国老龄化进程的加快，这两种疾病将进一步危害我国老年人生命健康。目前国内外临床上抗脑缺血药物主要包括：(1)改善脑血循环：A、溶栓药，如重组组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)、尿激酶(UK)；B、抗凝药，如肝素、类肝素；C、抗血小板药，如氯吡格雷、阿司匹林；D、降纤药，如降纤酶。(2)神经保护：A、自由基清除剂，如依达拉奉；B、神经营养剂，如脑复康、神经节苷脂。(3)其他，如丁基苯酞，人尿激酶原酞。但是，以rt-PA为代表的改善脑血循环药具有治疗时间窗窄、易致颅内出血、不宜长期使用的缺点，以依达拉奉为代表的神经保护剂的疗效和安全性仍需进一步研究确定。因此，对于缺血性脑卒中尚无十分有效治疗药物。目前国内外临床上抗阿尔茨海默病药物主要包括：(1)胆碱酯酶抑制剂：如多奈哌齐、加兰他敏、石杉碱甲。(2)NMDA受体拮抗剂：如美金刚。(3)其它，如Aβ抗体等。但是，它们仅能改善阿尔茨海默病的症状，不能延缓其进程，不能从根本上治疗阿尔茨海默病。因此，寻找新型有效的脑缺血及阿尔茨海默病治疗药物是目前急需解决的热点问题。香豆素类衍生物IMM-H004是我所自主研究开发的新型拮抗脑部重大疾病的化合物，关于IMM-H004的合成及抗脑缺血、抗阿尔茨海默病药理作用已于2012年申请国家专利技术专利，申请号为201210176782.5。IMM-H004具有合成工艺稳定、生物利用度高、毒性小、疗效好的特点，作为抗脑缺血、抗阿尔茨海默病候选药物的研究具有实际开发意义。药代动力学研究发现，IMM-H004在大鼠体内外及人肝微粒体中主要生成葡萄糖醛酸结合产物IMM-H004-7-O-β-葡萄糖醛酸(IMM-H004G)，IMM-H004G在血浆和脑内暴露量(AUC)明显高于原型药(分别是原药的7.7倍和2.3倍)，IMM-H004在脑组织中的消除半衰期(t1/2)较短，仅为0.2h，而IMM-H004G的t1/2长达24h。申请者研究发现，从IMM-H004的代谢产物中分离得到的一种结构新颖的化合物——IMM-H004-7-O-β-葡萄糖醛酸，化学结构如式I所示。该化合物体外能够有效抑制氧糖剥夺(OGD)、Aβ及冈田酸(OKA)诱导的神经细胞损伤，体内能显著改善大鼠大脑中动脉闭塞再灌注所致动物行为学障碍，降低脑梗死面积，具有与IMM-H004类似的抗脑缺血作用。目前，尚未见有IMM-H004代谢产物的研究报道，未见有IMM-H004-7-O-β-葡萄糖醛酸用于治疗脑缺血、阿尔茨海默病的研究报道，也未见具有IMM-H004-7-O-β-葡萄糖醛酸的制备方法专利文献。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种IMM-H004葡萄糖醛酸结合物新化合物，其结构新颖；本专利技术的又一个目的是提供其制备方法；本专利技术的第三个目的是其在防治脑缺血及阿尔茨海默病中的应用。为实现本专利技术的目的，采用如下技术方案：一种IMM-H004代谢产物——IMM-H004-7-O-β-葡萄糖醛酸，，其结构新颖，未有文献和专利报道该类型化合物，其结构如式I所示：上述中一种IMM-H004葡萄糖醛酸结合物IMM-H004-7-O-β-葡萄糖醛酸的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1.以尿苷二磷酸葡萄糖醛酸为糖基供体，利用糖基转移酶UGT88D4(GenBank:BAG31945.1)对化合物IMM-H004进行酶法葡萄糖醛酸基化。2.利用乙酸乙酯萃取结合反向半制备HPLC分离纯化IMM-H004的葡萄糖醛酸化产物。产物经UV、MS、1HNMR、13CNMR、HSQC及HMBC等谱学手段分析鉴定其结构，为IMM-H004-7-O-β-葡萄糖醛酸，目前未有该化合物及其制备方法的报道。本专利技术涉及由上述方法得到的新化合物IMM-H004-7-O-β-葡萄糖醛酸，药代动力学研究发现，IMM-H004在大鼠体内外及人肝微粒体中主要生成葡萄糖醛酸结合产物IMM-H004-7-O-β-葡萄糖醛酸(IMM-H004G)，IMM-H004G在血浆和脑内暴露量(AUC)明显高于原型药(分别是原药的7.7倍和2.3倍)，IMM-H004在脑组织中的消除半衰期(t1/2)较短，仅为0.2h，而IMM-H004G的t1/2长达24h。此外，IMM-H004G的血浆蛋白结合率比原药低17％-30％，脑组织蛋白结合率比原药低50％。并且，体外药理活性实验表明，IMM-H004G体外具有显著改善氧糖剥夺(OGD)、Aβ及冈田酸(OKA)诱导的神经细胞损伤的作用，体内能显著改善大鼠大脑中动脉闭塞再灌注所致动物行为学障碍，降低脑梗死面积，具有与IMM-H004类似的抗脑缺血作用，具有防治脑缺血和阿尔茨海默病的潜质。本专利技术具有如下技术优势：1、本专利技术的一种新化合物IMM-H004-7-O-β-葡萄糖醛酸的制备方法新颖，未见文献报道，具有反应步骤少、转化率高的优势。2、本专利技术的一种新化合物IMM-H004-7-O-β-葡萄糖醛酸具有明显的防治脑缺血作用，能够显著抑制氧糖剥夺诱导的神经毒性作用，改善模型大鼠脑梗死面积和行为学损伤。3、本专利技术的一种新化合物IMM-H004-7-O-β-葡萄糖醛酸具有明显的防治阿尔茨海默病作用，具有显著抑制Aβ以及冈田酸诱导的神经毒性作用。4、本专利技术的一种新化合物IMM-H004-7-O-β-葡萄糖醛酸与其原型药IMM-H004比较具有更好的药代动力学优势。5、本专利技术的一种新化合物IMM-H004-7-O-β-葡萄糖醛酸结构新颖，未有文献报道，具有进一步开发成防治脑缺血及阿尔茨海默病药物的潜力。附图说明图1IMM-H004-7-O-β-葡萄糖醛酸；图2正离子模式下IMM-H004-7-O-β-葡萄糖醛酸的高分辨质谱；图3IMM-H004-7-O-β-葡萄糖醛酸的1HNMR谱图(DMSO-d6,500MHz)；图4IMM-H004-7-O-β-葡萄糖醛酸的13CNMR谱图(DMSO-d6,125MHz)；图5IMM-H004-7-O-β-葡萄糖醛酸的HSQC谱图(DMSO-d6,500MHz)；图6IMM-H004-7-O-β-葡萄糖醛酸的HMBC谱图(DMSO-d6,500MHz)；图7参与IMM-H004G生成的人源重组UGT同工酶亚型；图8-1IMM-H004在人脑微血管内皮细胞中的代谢；图8-2IMM-H004在人神经母细胞瘤细胞中的代谢；图9小鼠口服IMM-H004柠檬酸盐(16mg/kg)后血浆中IMM-H004与其代谢产物IMM-H004G含量随时间变化曲线(n＝5)；图10小鼠静脉注射IMM-H004柠檬酸盐(5mg/kg)后血浆中IMM-H004与其代谢产物IMM-H004G含量随时间变化曲线(n＝3)；图11大鼠静脉注射IMM-H004柠檬酸盐(6mg/kg)后原型药与IMM-H004G的血浆药时曲线(n＝3)；图12大鼠静脉注射IMM-H004柠檬酸盐(6mg/kg)后原型本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种如式I所示的香豆素衍生物代谢产物及其药学上可接受的盐；
【技术特征摘要】
2017.04.21 CN 20171026181591.一种如式I所示的香豆素衍生物代谢产物及其药学上可接受的盐；2.根据权利要求1所述的香豆素衍生物代谢产物及其药学上可接受的盐，其特征在于，所述的盐选自香豆素衍生物代谢产物和无机酸、有机酸成的盐。3.制备权利要求1～2任一项的香豆素衍生物代谢产物，其包括以下步骤：利用糖基转移酶在IMM-H004的7...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈乃宏，李燕，戴均贵，宋修云，盛莉，乐田，楚世峰，张梓倩，解可波，谭圳，
申请(专利权)人：中国医学科学院药物研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11
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