TGFβ2抗体制造技术

本发明专利技术是抗转化生长因子β2(TGF‑β2)抗体的领域。具体地，本发明专利技术提供相对于人TGF‑β1或TGF‑β3同种型优先地结合人TGF‑β2同种型的人单克隆抗体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】TGFβ2抗体序列表本申请包含已经以ASCII格式电子递交的序列表，特此通过引用完整并入。所述ASCII拷贝于2017年2月13日创建，命名为PAT057206-WO-PCT_SL.TXT，具有162,071比特大小。专利
本专利技术涉及抗转化生长因子β2(TGF-β2)抗体。特别地，本专利技术提供与人TGF-β1或TGF-β3同种型相比，优先结合人TGF-β2同种型的人单克隆抗体。专利技术背景转化生长因子β(TGF-β)超家族的成员是与各种病理状况(如，纤维化、瘢疤形成、癌症)(GrowthFactors.2011年8月；29(4):140-52)、特定病症(如Marfan-相关病症)(US8,597,646)和大疱性表皮松解症相关的细胞因子。US5,571,714公开了抗TGFβ抗体在治疗恶性和转移性癌症中的用途。抗TGFβ抗体已经用于各种疾病的治疗中，如：肺纤维化(S.N.Giri等，Thorax48，959-966，1993)；神经瘢疤形成(A.Logan等，Eur.J.Neurosci.6，355-363，1994)；动脉损伤(Y.G.Wolf，L.M.Rasmussen&E.RuoslahtiJ.Clin.Invest.93，1172-1178，1994)；肾小球性肾炎(W.ABorder等，Nature346，371-374，1990)；类风湿性关节炎(Wahl等，J.Exp.Medicine177，225-230，1993)和真皮瘢疤形成(M.Shah等，Lancet339，213-2141992；M.Shah等，J.CellScience107，1137-1157，1994；M.Shah等，108，985-1002，1995)。因此，靶向TGF-β活性是活跃的研究领域，使用不同的方法，包括反义寡核苷酸(CurrPharmBiotechnol.2011年12月；12(12):2203-13.)、TGF-β受体激酶的小分子抑制剂(例如，靶向I和II型的TGF-β受体的LY2109761(MolCancerTher20087；829))、捕获天然配体的可溶性受体胞外结构域和单克隆抗体(综述于GrowthFactors.2011年8月29(4):140-52；WO9713844)。转化生长因子β2(TGF-β2)是TGF-β蛋白家族的>30个成员中的一个成员。其与TGF-β1/3同种型密切相关。所有TGF-β前体蛋白由N-末端信号肽、大的前肽-区段和C-末端多肽组成。后者二聚化，形成活性的、成熟TGF-β2蛋白，将其称为TGF-β2。成熟TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3之间的同源性是相对高的(71-79％)，而前肽区段是相当不保守的(43-54％同源性)。此外，TGF-β2与其他TGF-β家族蛋白的同源性仅为<33％，而在来自不同物种(包括人、猕猴和小鼠)的TGF-β2之间观察到非常高的同源性(95-100％)。最多描述的TGF-β信号途径是通过TGF-βII型受体、ALK5和Smad2/3的途径，但也已经确立了许多其他途径，包括ALK-和Smad-非依赖性途径。大部分商业上可获得的TGF-β抗体是源自非人物种的多克隆抗体或小鼠单克隆抗体，如TGF-β1特异性MAB240(R&DSystemsTM)，用于Western印迹分析中(JImmunolMethods.1999年5月27日；225(1-2):87-93)。用于人临床研究中的抗体必须满足不同于工具抗体的需求。临床需求是通过使用嵌合的、人源化的或完全人的抗体降低潜在的免疫原性。在临床研发中有一些满足这些需求的TGF-β同种型抗体，包括：1.中和TGF-β同种型1、2和3的完全人单克隆抗体GC1008(Fresolimumab)，2.中和TGF-β1的抗体LY2382770，3.中和TGF-β1的抗体CAT-192(Metelimumab)和4.对TGF-β2具有高亲和性并且具有与TGF-β3的交叉反应性的抗体CAT-152(Lerdelimumab，也称为6B1)(以上全部综述于GrowthFactors.2011年8月；29(4):140-52)。CAT-152：CAT-152是对TGF-β2具有亲和性(0.89nM的系统解离常数)并且与TGF-β3具有9％交叉反应性(10nM的系统解离常数)的完全人IgG4抗体，同时显示出没有可检测的与TGF-β1的结合(JImmunolMethods.1999年7月30日；227(1-2):17-29；DrugsR&D2002；3(2):106-108；WO9713844)。CAT-152是作为青光眼引流术(也称为小梁切除术)辅助治疗研发的(DrugsR&D2002；3(2):106-108)。然而，在III期临床试验中，在第一次小梁切除术后，CAT-152未能防止某些青光眼患者中的纤维化进展(Ophthalmology.2007年10月；114(10):1822-30)。CAT-192：在研究早期弥漫性皮肤系统性硬化症的I/II期试验中，TGF-β1特异性重组人抗体CAR-192未能显示出功效证据(ArthritisRheum.2007年1月；56(1):323-33)。此外，在该试验中，在接受CAT-192的患者中观察到比接受安慰剂的患者中更多的不良事件。这些发现进一步得到了突变小鼠模型中获得的结果的支持，突变小鼠模型中获得的结果显示出降低的活性TGF-β1水平与多器官炎症、表皮中缺少Langerhans细胞和肿瘤的发展相关(ProcNatlAcadSciUSA.2008年12月2日；105(48))三种密切相关的TGF-β1/2/3同种型的存在，导致对允许特异性地检测和中和人体中的这些蛋白的化合物的需求，以避免可能与不良事件或不合需要的事件相关的任何其他途径干扰。更具体地，这导致了对同种型特异性的抗TGF-β2治疗抗体的强烈医学需求，所述抗体有效地中和TGF-β2并且呈现出相对于TGF-β1或TGF-β3优先地结合和中和TGF-β2。理想地，使TGF-β2抗体的特异性与高结合亲和力组合，因为高结合亲和力与提高的效力和较低的剂量需求相关，有助于增强的功效、安全性和较低的成本(MAbs.2012年5月-6月；4(3):341-8)。这形成了对呈现出非常低的皮摩尔解离常数的同种型特异性TGF-β2治疗抗体的强烈医学需求，本专利技术解决了这种需求。专利技术概述以下方面中描述了本公开内容的某些实施方案：1.中和人TGF-β同种型TGF-β2并且不中和人同种型TGF-β3的人单克隆抗TGF-β2抗体或其功能性片段。2.根据方面1的抗体或其功能性片段，其中和人TGF-β同种型TGF-β2并且不中和人同种型TGF-β3和TGF-β1。3.根据方面1或2的人单克隆抗TGF-β2抗体或其功能性片段，其中通过Smad依赖性报告基因试验来测定中和。4.根据之前任一个方面的抗体或其功能性片段，如通过Smad依赖性报告基因试验测定的，其以低于250pM的半最大抑制浓度(IC50)中和人TGF-β2并且以高于100nM的半最大抑制浓度(IC50)中和人TG本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种中和人TGF‑β同种型TGF‑β2但不中和人同种型TGF‑β3的人单克隆抗TGF‑β2抗体或其功能性片段。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.02.17 US 62/296,2821.一种中和人TGF-β同种型TGF-β2但不中和人同种型TGF-β3的人单克隆抗TGF-β2抗体或其功能性片段。2.根据权利要求1的抗体或其功能性片段，其中和人TGF-β同种型TGF-β2但不中和人同种型TGF-β3和TGF-β1。3.根据权利要求1或2的人单克隆抗TGF-β2抗体或其功能性片段，其中通过Smad依赖性报告基因试验来测定中和。4.根据之前任一项权利要求的抗体或其功能性片段，其以低于250pM的半最大抑制浓度(IC50)中和人TGF-β2并且以高于100nM的半最大抑制浓度(IC50)中和人TGF-β1或TGF-β3，如通过Smad依赖性报告基因试验测定的。5.一种以低于TGF-β1或TGF-β3的解离常数至少70倍的解离常数优于人同种型TGF-β1和TGF-β3择优结合人TGF-β同种型TGF-β2的人单克隆抗TGF-β2抗体或其功能性片段，其中所述抗体中和人TGF-β2。6.根据之前任一项权利要求的抗体或其功能性片段，其以1pM或更低的KD结合人TGF-β2。7.根据权利要求1-6任一项的抗体或其功能性片段，其中所述抗体或其功能性片段包括与SEQIDNO:7、27、47、67、87或107中的至少一个具有至少95％序列同一性的VH多肽序列和与SEQIDNO:17、37、57、77、97或117中的至少一个具有至少95％序列同一性的VL多肽序列。8.根据权利要求1-7任一项的抗体或其功能性片段，其中所述抗体或其功能性片段包括包含选自SEQIDNO:1、21、41、61、81、101或4、24、44、64、84、104或124-129的氨基酸序列的重链可变区CDR1；包含选自SEQIDNO:2、22、42、62、82、102或5、25、45、65、85、105的氨基酸序列的重链可变区CDR2；包含选自SEQIDNO:3、23、43、63、83、103或6、26、46、66、86、106的氨基酸序列的重链可变区CDR3；包含选自SEQIDNO:11、31、51、71、91、111或14、34、54、74、94、114的氨基酸序列的轻链可变区CDR1；包含选自SEQIDNO:12、32、52、72、92、112或15、35、55、75、95、115的氨基酸序列的轻链可变区CDR2；和包含选自SEQIDNO:13、33、53、73、93、113或16、36、56、76、96、116的氨基酸序列的轻链可变区CDR3。9.根据权利要求1-8任一项的人单克隆抗TGF-β2抗体或功能性片段，其包括：(a)SEQIDNO:1的重链可变区CDR1；SEQIDNO:2的重链可变区CDR2；SEQIDNO:3的重链可变区CDR3；SEQIDNO:11的轻链可变区CDR1；SEQIDNO:12的轻链可变区CDR2；和SEQIDNO:13的轻链可变区CDR3，(b)SEQIDNO:21的重链可变区CDR1；SEQIDNO:22的重链可变区CDR2；SEQIDNO:23的重链可变区CDR3；SEQIDNO:31的轻链可变区CDR1；SEQIDNO:32的轻链可变区CDR2；和SEQIDNO:33的轻链可变区CDR3，(c)SEQIDNO:41的重链可变区CDR1；SEQIDNO:42的重链可变区CDR2；SEQIDNO:43的重链可变区CDR3；SEQIDNO:51的轻链可变区CDR1；SEQIDNO:52的轻链可变区CDR2；和SEQIDNO:53的轻链可变区CDR3，(d)SEQIDNO:61的重链可变区CDR1；SEQIDNO:62的重链可变区CDR2；SEQIDNO:63的重链可变区CDR3；SEQIDNO:71的轻链可变区CDR1；SEQIDNO:72的轻链可变区CDR2；和SEQIDNO:73的轻链可变区CDR3，(e)SEQIDNO:81的重链可变区CDR1；SEQIDNO:82的重链可变区CDR2；SEQIDNO:83的重链可变区CDR3；SEQIDNO:91的轻链可变区CDR1；SEQIDNO:92的轻链可变区CDR2；和SEQIDNO:93的轻链可变区CDR3，或(f)SEQIDNO:101的重链可变区CDR1；SEQIDNO:102的重链可变区CDR2；SEQIDNO:103的重链可变区CDR3；SEQIDNO:111的轻链可变区CDR1；SEQIDNO:1...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·伊贝邦乔，C·雅各比，A·迈耶，E·沙特，AU·川德伦伯格，O·弗拉基米罗芙娜米提娜，
申请(专利权)人：诺华股份有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士,CH