circ-0000423在制备或筛选结肠癌的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了circ‑0000423在制备或筛选结肠癌的药物中的应用。circ‑0000423高表达与肠癌分期、分化程度以及预后密切相关，发现表达程度越高，病期越晚、分化及预后越差，提示circ‑0000423与结直肠癌的恶性行为密切相关。circ‑0000423可吸附抑癌基因miR‑519以ceRNA机制促进结直肠癌的侵袭转移。circ‑0000423可作为治疗靶点在制备或筛选治疗结肠癌或抑制结肠癌侵袭迁移的药物中应用。circ‑0000423可作为检测靶点在制备结直肠癌诊断试剂中应用。circ‑0000423可作为检测靶点在制备预测结直肠癌分期、分化程度或预后的试剂中应用。

Application of circ-0000423 in preparing or screening colon cancer drugs

The invention discloses the application of CIRC 0000423 in preparing or screening colon cancer drugs. The high expression of circ_0000423 is closely related to the stage, differentiation and prognosis of colorectal cancer. The higher expression of circ_0000423, the later the stage, the poorer differentiation and the poorer prognosis of colorectal cancer suggest that circ_0000423 is closely related to the malignant behavior of colorectal cancer. CIRC miR 0000423 can adsorb tumor suppressor gene ceRNA 519 to promote the invasion and metastasis of colorectal cancer. Circ_0000423 can be used as a therapeutic target in the preparation or screening of drugs to treat colon cancer or inhibit the invasion and migration of colon cancer. CIRC 0000423 can be used as a diagnostic target in the preparation of colorectal cancer diagnostic reagents. Circ_0000423 can be used as a detection target in the preparation of reagents for predicting colorectal cancer stage, differentiation degree or prognosis.

【技术实现步骤摘要】
circ-0000423在制备或筛选结肠癌的药物中的应用
本专利技术属于生物医学领域，涉及circ-0000423在制备或筛选结肠癌的药物中的应用。
技术介绍
结直肠癌是全球男性的第三大好发肿瘤，在女性中位列第二，也是第四大致死性肿瘤；在2012年新增肠癌病例140万，死亡病例69.4万；原先发病率较低的东亚地区发病率正迅速上升[1-3]。目前，结直肠癌的治疗仍以手术、放化疗及靶向药物为主，但5年生存率并没有得到显著改善；导致治疗失败的主要原因就是癌侵袭转移[4,5]。积极探索结直肠癌侵袭转移的分子机制、寻找诊疗新靶标，对于提高疗效、改善预后极为迫切。随着高通量测序等技术的发展，大量的基因组平台数据表明人类基因组中占至少98％的转录序列是无蛋白质编码功能的RNA分子，即非编码RNA(ncRNA)，但它们却是转录和表达过程中的关键性调控者[6,7]。而环状RNA(circRNA)，是近年确认的一类特殊的ncRNA分子，一般通过外显子的套索驱动环化(lariat-drivencircularization)和内含子配对驱动环化(intron-pairing-drivencircularization)两种方式形成无5’、3’端的封闭结构，且不受核酸酶影响，比线性RNA具有更好的组织特异性和稳定性[8-11]，因此具备理想肿瘤标志物潜能[12,13]。据报道，circRNA可充当“海绵”吸附microRNA，即作为竞争性内源RNA(ceRNA)：例如CDR1as作为miR-7的吸附“海绵”，改变miR-7靶基因的水平；从而影响miR-7的致癌或抑癌能力[14,15]。在消化道肿瘤方面Li等[16]发现circ-002059在胃癌组织中表达水平下调，且手术前后血浆中circ-002059水平也有显著变化；还证实了circRNA表达水平与患者的胃癌分期和侵袭转移等恶性进展有关。而结直肠癌相关circRNA的探索刚刚处于起步阶段，尚无机制方面的涉及；因此，从circRNA角度探索调控肠癌侵袭转移的分子机制十分必要。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术的上述不足，提供circ-0000423作为治疗靶点在制备或筛选治疗结肠癌或抑制结肠癌侵袭迁移的药物中的应用。本专利技术的另一目的是提供circ-0000423作为检测靶点在制备结直肠癌诊断试剂中的应用。本专利技术的目的可通过以下技术方案实现：circ-0000423作为治疗靶点在制备或筛选治疗结肠癌或抑制结肠癌侵袭迁移的药物中的应用；所述的circ-0000423基因序列如SEQIDNO.1所示,所述的circ-0000423基因转录本序列如SEQIDNO.2所示。人circ-0000423用于制备或筛选治疗结肠癌或抑制结肠癌侵袭迁移的药物包括两方面的内容：其一，将人circ-0000423作为药物或制剂针对结直肠癌细胞的作用靶标应用于制备结直肠癌治疗药物；其二，将人circ-0000423作为药物或制剂针对肿瘤细胞的作用靶标应用于筛选结直肠癌治疗药物。circ-0000423作为检测靶点在制备结直肠癌诊断试剂中的应用。circ-0000423作为检测靶点在制备预测结直肠癌分期、分化程度或预后的试剂中的应用。检测人circ-0000423表达量的引物、探针或基因芯片在制备结直肠癌诊断试剂中的应用。检测人circ-0000423表达量的引物、探针或基因芯片在制备预测结直肠癌分期、分化程度或预后的试剂中的应用。一种治疗结直肠癌的药物组合物，包括抑制或沉默人circ-0000423表达的核酸分子。一种结直肠癌诊断试剂，其特征在于包含检测人circ-0000423表达量的引物、探针或基因芯片。有益效果：专利技术人前期应用circRNA表达谱芯片技术，从5对结直肠癌新鲜组织中筛选到41条差异表达的circRNA(设肿瘤组与正常组对照)。在41条circRNA中进一步筛选出4条表达差异5倍以上，表达丰度高，均一性好的转录本，其中3条上调，1条下调(表1)(图3A-D)。随后，我们在200例结直肠癌中对上述4条差异表达circRNA进行组织验证，其中circ-0000423在结直肠癌组织中均一性最好，表达丰度最高。结合临床病理特征分析发现circ-0000423高表达与肠癌分期、分化程度以及预后密切相关，发现表达程度越高，病期越晚、分化及预后越差。提示circ-0000423与结直肠癌的恶性行为密切相关(图3E-G)。为明确circ-0000423在结直肠癌中的作用：①首先我们发现在细胞系中，circ-0000423在各种结直肠癌细胞株中表达上调，而在人正常肠上皮细胞株FHC中表达丰度相对较低(图3H)；②结果还显示circ-0000423能促进HT29细胞的侵袭迁移。沉默circ-0000423后，HT29的侵袭迁移能力显著降低(图6A、B)；③此外circ-0000423还影响细胞周期进程(图6C)，沉默circ-0000423后，细胞周期被阻止在G0/G1及S期。circ-0000423可吸附抑癌基因miR-519以ceRNA机制促进结直肠癌的侵袭转移。上述结果提示circ-0000423是一个在肠癌中普遍高表达，且其能促进肠癌侵袭迁移、调控细胞周期，是与预后相关的潜在“促癌基因”。因此，基于上述研究工作，本专利技术提出了circ-0000423可作为治疗靶点在制备或筛选治疗结肠癌或抑制结肠癌侵袭迁移的药物中应用。circ-0000423可作为检测靶点在制备结直肠癌诊断试剂中应用。circ-0000423可作为检测靶点在制备预测结直肠癌分期、分化程度或预后的试剂中应用。附图说明图1.差异表达的功能circRNA筛选分析：(A)circRNA组织芯片结果的聚类分析；(B)circRNA组织芯片结果提示肿瘤组织对比正常组织表达水平的火山图(C)circRNA组织芯片的GO分析结果；(D)circRNA组织芯片的KEGGpathway分析结果。图2.组织芯片对信号转导通路的分析：(A)参与细胞周期进程的信号通路；(B)参与P53信号通路。图3.目标circ-0000423的选择与检测：(A-D)circ-0000423、circ-0007503、circ-0007364及circ-0050486在20对结直肠癌组织中表达特征；(E)circ-0000423表达水平与分化程度的关系；(F)circ-0000423表达水平与TNM分期的关系；(G)circ-0000423表达水平与结直肠癌预后的关系。(H)各细胞系中circ-0000423的表达丰度。图4.circ-0000423在结直肠癌细胞株HT29及HCT116中表达：经RNaseR处理后，线性的PPP1R12A以及circ-0000423表达水平变化情况(*：p<0.05，**：p<0.01)图5.circ-0000423的基本信息。图6.circ-0000423的生物学功能(在HT29细胞株中)：(A)Transwell细胞迁移实验；(B)Matrigel细胞侵袭实验。(C)细胞周期流式检测；(D)凋亡流式检测。(*：p<0.05，**：p<0.01)图7.circ-00本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.circ‑0000423作为治疗靶点在制备或筛选治疗结肠癌或抑制结肠癌侵袭迁移的药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.circ-0000423作为治疗靶点在制备或筛选治疗结肠癌或抑制结肠癌侵袭迁移的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于人circ-0000423用于制备或筛选治疗结肠癌或抑制结肠癌侵袭迁移的药物包括两方面的内容：其一，将人circ-0000423作为药物或制剂针对结直肠癌细胞的作用靶标应用于制备结直肠癌治疗药物；其二，将人circ-0000423作为药物或制剂针对肿瘤细胞的作用靶标应用于筛选结直肠癌治疗药物。3.circ-0000423作为检测靶点在制备结直肠癌诊断试剂中的应用。...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨柳，马大伟，
申请(专利权)人：江苏省肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：江苏,32