一种药用植物蜘蛛香组培繁育方法技术

本发明专利技术公开了一种药用植物蜘蛛香组培繁育方法，包括如下步骤：S1、选材：选取生长优良且健壮的野生蜘蛛香，放置于自来水下冲洗1小时以上，然后于无菌室超净工作台上用75%的酒精充分浸没外植体处理30s，然后用无菌水冲洗4～5次，再用0.1%的氯化汞溶液充分浸泡10～15min，最后用无菌水反复冲洗5～6次，然后反复震荡以彻底将氯化汞清除掉，再用无菌滤纸吸干多余的水分后，备用；该药用植物蜘蛛香组培繁育方法，培养步骤简单，易操作，便于工作人员对植物蜘蛛香组培的繁育，采用愈伤组织诱导培养，并通过多组实验进行对比，便于用户筛选出最优质的培育条件，满足了药用植物蜘蛛香工厂化组培繁育的需求。

Tissue culture and propagation of medicinal plant spider incense

The invention discloses a method for tissue culture and propagation of medicinal plant spider fragrance, which comprises the following steps: S1, material selection: selecting well-growing and robust wild spider fragrance, placing it in tap water for washing for more than one hour, then immersing explants fully in 75% alcohol on the sterile room super-clean worktable for 30 seconds, and then flushing it with sterile water. Wash 4-5 times, soak in 0.1% mercuric chloride solution for 10-15 minutes, rinse 5-6 times with aseptic water, then shake again and again to remove mercuric chloride thoroughly, and then use aseptic filter paper to absorb excess water for reserve. The method of tissue culture and breeding of medicinal plant spider fragrance is simple, easy to operate and convenient. The staff used callus induction culture to breed the plant spider fragrance, and compared it with many groups of experiments. It was convenient for the users to select the best cultivation conditions and met the needs of industrialized tissue culture and breeding of the medicinal plant spider fragrance.

【技术实现步骤摘要】
一种药用植物蜘蛛香组培繁育方法
本专利技术涉及药用植物蜘蛛香培育
，具体为一种药用植物蜘蛛香组培繁育方法。
技术介绍
蜘蛛香（ValerianajatamansiJones.），为败酱科缬草属植物，蜘蛛草的干燥根茎和根，别名马蹄香、心叶缬草、老虎七等多年生草本植物，高30～70cm。茎通常数枝丛生，密被短柔毛。根状茎横走，肥厚，块状，粗大，节间紧密，有叶柄残基，黄褐色，有特异香气。通常生长在河谷阴湿林下，林缘开阔地，河滩，林中，路边草丛里，山顶草甸，山坡潮湿地。分布的主要地区在陕西省，湖北省，湖南省，重庆市，四川省，广西自治区，西藏自治区。李时珍在《本草纲目》中评价蜘蛛香“《时珍》曰∶蜘蛛香出蜀西茂州松潘山中，草根也。黑色有粗须，状如蜘蛛及本藁、芎穷，气味芳香，彼人亦重之。或云猫喜食之”。蜘蛛香勘称“苗药经典”。其中主要含有挥发油、环烯醚萜类、黄酮类、生物碱、氨基酸和木脂素及其他一些化学成分，药理活性包括镇静、催眠、抗病毒、抗菌、抗肿瘤、抗肿瘤细胞毒和对循环系统的作用。在《本草纲目》中清晰的记载了蜘蛛香能够辟瘟疫、镇静，治气服、除湿散寒、脾胃食滞、外敷疮疖，流感、疳积、疟疾等常见疾病都有很好的治疗效果。如今，蜘蛛香的研究已引起相关行业重视，主要集中在蜘蛛香药用化学、药理作用、挥发成分、药材质量标准和药材质量分析等方面，但是对蜘蛛香的植物组织培养方面暂时鲜有人做过相关的研究，蜘蛛香因用处较广，使用量较大，而野生资源越来越贫乏，供需矛盾日益凸显。现有的药用植物蜘蛛香组培繁育，一般步骤非常复杂，而且在培养过程中对植物体以及培养条件要求比较高，从而使得蜘蛛香移栽的成活率非常低，使用具有局限性，无法满足工厂化需求。
技术实现思路
（一）解决的技术问题针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种药用植物蜘蛛香组培繁育方法，解决了
技术介绍
中所提到的问题。（二）技术方案为实现以上目的，本专利技术通过以下技术方案予以实现：一种药用植物蜘蛛香组培繁育方法，包括如下步骤：S1、选材：选取生长优良且健壮的野生蜘蛛香，放置于自来水下冲洗1小时以上，然后于无菌室超净工作台上用75%的酒精充分浸没外植体处理30s，然后用无菌水冲洗4～5次，再用0.1%的氯化汞溶液充分浸泡10～15min，最后用无菌水反复冲洗5～6次，然后反复震荡以彻底将氯化汞清除掉，再用无菌滤纸吸干多余的水分后，备用；S2、培养基制备：选取MS基本培养基、蔗糖和琼脂，分别加入培养器皿中均匀混合，pH值为5.6，再向培养器皿中添加不同浓度与种类的植物生长调节剂，灭菌时间为30min；S3、愈伤组织诱导培养：将选取洗净的备用材料放在超净工作台上，进行无菌清洗；然后选取清洗后备用材料的地下茎侧芽(长度为0.5cm)、叶柄(长度为1.0cm)及叶片(面积为2.0cm2)接种至诱导培养基上，每瓶接种5个试材，每个处理接种30瓶，3个重复，7d后开始观察，30d后统计愈伤组织诱导情况；S4、愈伤组织增殖培养：将已成功诱导出的愈伤组织接种在试验培养基上，每瓶接种5个试材，每个处理接种30瓶，称取每瓶愈伤鲜重，培养45d后重新称重，3个重复，统计愈伤增殖情况，筛选出蜘蛛香愈伤组织增殖最适培养基；S5、生根培养：将生长良好的蜘蛛香组培苗接入1/2MS基本培养基+0.5～2.0mg·L-1IAA进行培养，每个处理接种20瓶，3个重复，60d为1个周期，观察并统计蜘蛛香幼苗壮苗的生根情况，筛选出适合蜘蛛香幼苗壮苗生根培养的培养基。S6、炼苗移栽：待蜘蛛香组培苗长到4～5cm，根长3～4cm时，常温下炼苗3～5d后移栽至日光温室中；培养温度为25±2℃，湿度70%～80%。栽培基质为草炭：珍珠岩（1：1），观察生长情况，统计移栽存活率。优选的，所述S3中的无菌清洗是采用75%的酒精对备用材料处理30s，无菌水冲洗3～5次，再用0.1%的HgCl2充分浸泡10～15min，无菌水反复冲洗4～6次，充分震荡将HgCl2清除，用无菌滤纸吸干外植体表面水分，并展开放置。本专利技术提供了一种药用植物蜘蛛香组培繁育方法。具备以下有益效果：该药用植物蜘蛛香组培繁育方法，培养步骤简单，易操作，便于工作人员对植物蜘蛛香组培的繁育，采用愈伤组织诱导培养，并通过多组实验进行对比，便于用户筛选出最优质的培育条件，满足了药用植物蜘蛛香组培繁育的需求。具体实施方式本专利技术提供一种技术方案：一种药用植物蜘蛛香组培繁育方法，包括如下步骤：S1、选材：选取生长优良且健壮的野生蜘蛛香，放置于自来水下冲洗1小时以上，然后于无菌室超净工作台上用75%的酒精充分浸没外植体处理30s，然后用无菌水冲洗4～5次，再用0.1%的氯化汞溶液充分浸泡10～15min，最后用无菌水反复冲洗5～6次，然后反复震荡以彻底将氯化汞清除掉，再用无菌滤纸吸干多余的水分后，备用；S2、培养基制备：选取MS基本培养基、蔗糖和琼脂，分别加入培养器皿中均匀混合，pH值为5.6，再向培养器皿中添加不同浓度与种类的植物生长调节剂，灭菌时间为30min；S3、愈伤组织诱导培养：将选取洗净的备用材料放在超净工作台上，进行无菌清洗；然后选取清洗后备用材料的地下茎侧芽(长度为0.5cm)、叶柄(长度为1.0cm)及叶片(面积为2.0cm2)接种至诱导培养基上，每瓶接种5个试材，每个处理接种30瓶，3个重复，7d后开始观察，30d后统计愈伤组织诱导情况；无菌清洗是采用75%的酒精对备用材料处理30s，无菌水冲洗4～5次，再用0.1%的HgCl2充分浸泡10～15min，无菌水反复冲洗4～6次，充分震荡将HgCl2清除，用无菌滤纸吸干外植体表面水分，并展开放置备用。表1愈伤组织诱导试验设计S4、愈伤组织增殖培养：将已成功诱导出的愈伤组织接种在试验培养基上，如表2所示，每瓶接种5个试材，每个处理接种30瓶，称取每瓶愈伤鲜重，培养45d后重新称重，3个重复，统计愈伤增殖情况，筛选出蜘蛛香愈伤组织增殖最适培养基；表2愈伤组织增殖试验设计S5、生根培养：将生长良好的蜘蛛香组培苗接入1/2MS基本培养基+0.5～2.0mg·L-1IAA进行培养，每个处理接种20瓶，3个重复，60d为1个周期，观察并统计蜘蛛香幼苗壮苗的生根情况，筛选出适合蜘蛛香幼苗壮苗生根培养的培养基。S6、炼苗移栽：待蜘蛛香组培苗长到4～5cm，根长3～4cm时，常温下炼苗3～5d后移栽至日光温室中；培养温度为25±2℃，湿度70%～80%。栽培基质为草炭：珍珠岩（1：1），观察生长情况，统计移栽存活率。不同部位外植体诱导愈伤组织分析：蜘蛛香地下茎侧芽培养于6～8d后开始膨大，30d后形成较多愈伤，短时间内在A6培养基中可诱导出不定芽且芽数较多，长势好；以叶柄为外植体培养，5d左右基部先膨大，随后顶端膨大，叶柄颜色由绿变浅，30d后形成较多愈伤，但易褐化；叶片培养于7d起在叶缘处先产生晶状体，23d左右形成大量愈伤，出现不同程度的褐化。如表3所示，叶柄诱导愈伤最佳培养基为A5，诱导率为72.7%；叶片诱导愈伤最佳培养基为A7，诱导率为91.3%；地下茎侧芽诱导愈伤最佳培养基为A5，诱导率为88.7%，愈伤组织生长势最好，如表3所示。表3不同培养基对外植体诱愈伤组织诱导的影响注：“＋”表明长势一般，“－”表明基本无愈伤或本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种药用植物蜘蛛香组培繁育方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、选材：选取生长优良且健壮的野生蜘蛛香，放置于自来水下冲洗1小时以上，然后于无菌室超净工作台上用75%的酒精充分浸没外植体处理30s，然后用无菌水冲洗4～5次，再用0.1%的氯化汞溶液充分浸泡10～15min，最后用无菌水反复冲洗5～6次，然后反复震荡以彻底将氯化汞清除掉，再用无菌滤纸吸干多余的水分后，备用；S2、培养基制备：选取MS基本培养基、蔗糖和琼脂，分别加入培养器皿中均匀混合，pH值为5.6，再向培养器皿中添加不同浓度与种类的植物生长调节剂，灭菌时间为30min；S3、愈伤组织诱导培养：将选取洗净的备用材料放在超净工作台上，进行无菌清洗；然后选取清洗后备用材料的地下茎侧芽(长度为0.5cm)、叶柄(长度为1. 0cm)及叶片(面积为2.0cm2)接种至诱导培养基上，每瓶接种5个试材，每个处理接种30瓶，3个重复，7d后开始观察，30d后统计愈伤组织诱导情况；S4、愈伤组织增殖培养：将已成功诱导出的愈伤组织接种在试验培养基上，每瓶接种5个试材，每个处理接种30瓶，称取每瓶愈伤鲜重，培养45d后重新称重，3个重复，统计愈伤增殖情况，筛选出蜘蛛香愈伤组织增殖最适培养基；S5、生根培养：将生长良好的蜘蛛香组培苗接入1/2MS基本培养基+ 0.5～2.0 mg·L‑1 IAA进行培养，每个处理接种20瓶，3 个重复，60 d为 1 个周期，观察并统计蜘蛛香幼苗壮苗的生根情况，筛选出适合蜘蛛香幼苗壮苗生根培养的培养基；S6、炼苗移栽：待蜘蛛香组培苗长到4～5cm，根长3～4cm时，常温下炼苗 3～5 d 后移栽至日光温室中；培养温度为 25±2℃，湿度 70%～80%；栽培基质为草炭：珍珠岩（1：1），观察生长情况，统计移栽存活率。...

【技术特征摘要】
1.一种药用植物蜘蛛香组培繁育方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、选材：选取生长优良且健壮的野生蜘蛛香，放置于自来水下冲洗1小时以上，然后于无菌室超净工作台上用75%的酒精充分浸没外植体处理30s，然后用无菌水冲洗4～5次，再用0.1%的氯化汞溶液充分浸泡10～15min，最后用无菌水反复冲洗5～6次，然后反复震荡以彻底将氯化汞清除掉，再用无菌滤纸吸干多余的水分后，备用；S2、培养基制备：选取MS基本培养基、蔗糖和琼脂，分别加入培养器皿中均匀混合，pH值为5.6，再向培养器皿中添加不同浓度与种类的植物生长调节剂，灭菌时间为30min；S3、愈伤组织诱导培养：将选取洗净的备用材料放在超净工作台上，进行无菌清洗；然后选取清洗后备用材料的地下茎侧芽(长度为0.5cm)、叶柄(长度为1.0cm)及叶片(面积为2.0cm2)接种至诱导培养基上，每瓶接种5个试材，每个处理接种30瓶，3个重复，7d后开始观察，30d后统计愈伤组织诱导情况；S4、愈伤组织增殖培养：将已成功诱导出的愈伤组织接种...

【专利技术属性】
技术研发人员：余乐，李成忠，陆辉，姜宗庆，糜莉，鄂文雯，陈欣然，陈志琴，徐璐，王新昊，
申请(专利权)人：江苏农牧科技职业学院，
类型：发明
国别省市：江苏,32