一株溶磷菌及其与DEHP降解菌复配菌剂和应用制造技术

本发明专利技术公开一株溶磷菌及其与DEHP降解菌复配菌剂和应用。所述菌株为Pseudomonas sp.YLYP29，于2017年06月28日保藏于中国武汉市武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO：M 2017391。本发明专利技术还提供一种复配菌剂，由溶磷菌YLYP29和DEHP降解菌XB组成，该复配菌剂协同性较好，培养方法简便易行，适应能力强，兼具溶磷和DEHP降解功能，具有良好的应用潜力，既可解决土壤磷素缺乏的问题，又可去除土壤中DEHP污染物，对于改善土壤营养状态，提升土壤生态肥力，修复DEHP污染土壤，进而保障农产品质量和产量，对于实现农田土壤边生产边修复具有重要作用。

A phosphate solubilizing bacterium and its compounding agent with DEHP degrading bacteria and its application

The invention discloses a phosphate solubilizing bacterium and its compounding agent with DEHP degrading bacteria and its application. The strain is Pseudomonas sp. YLYP29, which was preserved in the China Typical Culture Preservation Center of Wuhan University on June 28, 2017. The preservation number is CCTCC NO: M 2017391. The invention also provides a compound bacterium agent, which is composed of phosphorus-solubilizing bacteria YLYP29 and DEHP-degrading bacteria XB. The compound bacterium agent has the advantages of good synergy, convenient cultivation method, strong adaptability, both phosphorus-solubilizing and DEHP-degrading functions, and has good application potential, which can not only solve the problem of phosphorus deficiency in soil, but also remove DEHP pollution in soil. Material plays an important role in improving soil nutrient status, improving soil ecological fertility, remediating DEHP contaminated soil, and ensuring the quality and yield of agricultural products.

【技术实现步骤摘要】
一株溶磷菌及其与DEHP降解菌复配菌剂和应用
本专利技术属于微生物工程
，具体涉及一株溶磷菌及其与DEHP降解菌复配菌剂和应用。
技术介绍
磷素是土壤中重要的肥料之一，促进植物生长发育。在不同的磷化合物形式中，只有可溶性磷素才能被植物吸收利用，但土壤中有95％的磷素以难溶状态存在。我国约有2/3的耕地处于磷素缺乏状态，为保证农产品增产增收，在农业生产中施用大量化学肥料，但当季作物对磷肥的利用率低于25％，很大一部分被土壤中的Ca2+、Fe3+、Al3+等阳离子固定，形成难溶性磷酸盐，并诱发土壤微量元素缺乏、养分失衡、土壤板结等问题。还有部分可溶性磷素被雨水冲刷进入水体中造成环境污染。溶磷菌在土壤中磷素的生物地化循环中起着重要作用，将难溶磷转化为植物可以直接吸收利用的有效磷。因此，通过溶磷菌调动土壤磷库资源，提高土壤磷素利用率，减少化学磷肥的施用量，被认为是经济、高效、环保的利用土壤难溶磷的生物措施，对于促进农业生产可持续发展具有十分重要的意义。另一方面，由于工业“三废”大量排放以及化肥、农药、农膜等农资产品的不合理使用，导致农田土壤邻苯二甲酸酯(PAEs)、多环芳烃(PAHs)等有机污染物污染。大量调查表明，我国农业土壤普遍检出PAEs，土壤中PAEs含量达到mg/kg数量级。污染土壤中的PAEs被农作物吸收累积，严重影响农产品质量安全。土壤中PAEs不仅对土壤生态系统存在潜在危害，而且通过食物链传递进入人体，可在人体内积累。PAEs等有机污染物属于环境内分泌干扰物，具有生殖发育毒性、肝脏毒性和“三致”作用(致癌、致畸、致突变)，居民日常食用含PAEs等有机污染物的农产品导致长期低剂量暴露，严重危及人体健康。利用特异性功能微生物降解土壤中PAEs有机污染物进行有效去除，可达到净化土壤的目的，具有针对性强、高效快捷、成本低廉等优势。因此，面对我国农田土壤普遍磷素缺乏以及PAEs污染现状，研究开发具有溶磷和PAEs降解功能的复合菌剂就显得尤为重要。
技术实现思路
为了克服现有技术的缺点与不足，本专利技术的目的在于提供一种溶磷菌。本专利技术的另一目的在于提供一种复配菌剂。本专利技术的再一目的在于提供上述溶磷菌、复配菌剂的应用。本专利技术提供的溶磷菌及其复配菌剂既可以解决土壤普遍磷素缺乏的问题，又可以修复土壤DEHP污染，促进农业可持续发展。本专利技术的目的通过下述技术方案实现：本专利技术提供一株溶磷菌，命名为Pseudomonassp.YLYP29，是从污水处理厂的活性污泥中分离纯化得到的。所述的溶磷菌为Pseudomonassp.YLYP29，其保藏信息：保藏单位：中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏日期2017年06月28日，保藏地址：中国.武汉.武汉大学，保藏编号：CCTCCNO：M2017391。所述的Pseudomonassp.YLYP29菌体培养特征和菌落特征：该菌为革兰氏阴性菌，扫描电子显微镜下呈短杆状，菌体平均长度0.8～1.0μm，平均宽度0.2～0.3μm(图1)；在LB平板上30℃培养48h，菌落呈黄白色，湿润，呈粘液状，表面光滑不透明，边缘整齐(图2)；所述菌株YLYP29的生理生化鉴定试验结果如表1所示，该菌的最适生长条件为：温度25～35℃，pH为6.0～8.0。本专利技术还提供上述Pseudomonassp.YLYP29在溶解难溶磷酸盐中的应用。所述的难溶磷酸盐为磷酸钙、磷酸铝或磷酸铁。优选的，所述的难溶磷酸盐为磷酸钙。所述的Pseudomonassp.YLYP29在NBRIP培养基中，溶解难溶性磷酸盐至可溶性磷含量达106.3±4.6mg/L～514.1±7.2mg/L。本专利技术还提供一种复配菌剂，包括Pseudomonassp.YLYP29和RhodococcuspyridinivoransXB。本课题组前期研究分离筛选的RhodococcuspyridinivoransXB能够有效降低土壤中邻苯二甲酸二异辛酯(DEHP)污染，并降低玉米对DEHP的吸收累积。该菌种的保藏信息：保藏单位：广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏日期：2016年09月28日，保藏地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所，保藏编号：GDMCCNO：60054。所述的Pseudomonassp.YLYP29和RhodococcuspyridinivoransXB制成浓度为108～1010cfu/mL的菌悬液；所述的Pseudomonassp.YLYP29和RhodococcuspyridinivoransXB按照体积比2～3：3～5进行混合；优选按照体积比2：3进行混合。所述的复配菌剂的制备方法，包括如下步骤：(1)将Pseudomonassp.YLYP29和RhodococcuspyridinivoransXB分别接种于LB液体培养基中，于28～30℃条件下活化12～18h；(2)挑取活化好的2种单菌分别接种于LB液体培养基中，分别培养至细菌数为108～1010CFU/mL；(3)将2种单菌按照2～3：3～5的体积比均匀混合，即得多功能复配菌剂。所述的复配菌剂在溶磷和/或降解DEHP中的应用。所述的复配菌剂在NBRIP培养基中，可溶性磷含量达543.3～581.4mg/L。所述的复配菌剂在含DEHP的MSM培养基中，对DEHP的降解能力显著提高，Pseudomonassp.YLYP29培养液中DEHP不发生降解，RhodococcuspyridinivoransXB对DEHP的降解率为80.5％～91.9％，复配菌剂对DEHP降解率为93.6％～100％。因此，复配菌剂对DEHP的降解能力显著提高，同样实现了1+1>2菌剂复配的效果。所述的复配菌剂在改良土壤质量中的应用。优选的，将复配菌剂接加入土壤中，并搅拌均匀，可以使土壤中有效磷含量增加，并同时降解土壤中的DEHP。将600g土壤加入500mL的烧杯中，并用锡箔纸遮光处理，向土壤中分别添加菌株YLYP29、XB和复配菌剂60mL，均充分混匀。将土壤含水量调整至田间持水量30％，30℃恒温避光培养15d，以不接种任何菌剂土壤为对照，每个处理设置三个重复。测定不同处理土壤中有效磷含量。结果显示，对照土壤中有效磷含量39.8mg/kg，接种单菌Pseudomonassp.YLYP29土壤中有效磷含量53.7～62.1mg/kg，接种单菌RhodococcuspyridinivoransXB土壤中有效磷含量41.7～45.2mg/kg，接种复配菌剂土壤中有效磷含量为69.4～86.2mg/kg。设置DEHP浓度为20mg/kg。将600g土壤加入500mL的烧杯中，加入DEHP，搅拌均匀，并用锡箔纸遮光处理，老化一周后，向土壤中分别添加菌株YLYP29、XB、复配菌剂60mL，搅拌均匀。将土壤含水量调整至田间持水量的30％，30℃恒温培养10d，以不添加任何菌剂的土壤为空白对照，上述每个处理设置3个重复。测定土壤DEHP的残留量，结果显示，空白对照中土壤中DEHP降解率27.1％，接种单菌Pseudomonassp.YLYP29土壤中DEHP降解率30.2～32.9％，接种单菌Rhodococcuspyridinivora本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株溶磷菌，其特征在于：名称为Pseudomonas sp.YLYP29，于2017年06月28日保藏于中国武汉市武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO：M 2017391。

【技术特征摘要】
1.一株溶磷菌，其特征在于：名称为Pseudomonassp.YLYP29，于2017年06月28日保藏于中国武汉市武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCCNO：M2017391。2.权利要求1所述的溶磷菌在溶解难溶磷酸盐中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述的难溶磷酸盐为磷酸钙、磷酸铝或磷酸铁。4.一种复配菌剂，其特征在于包括权利要求1所述的Pseudomonassp.YLYP29和RhodococcuspyridinivoransXB；所述的RhodococcuspyridinivoransXB，于2016年09月28日保藏于广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所的广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号：GDMCCNO：60054。5.根据权利要求4所述的复配菌剂，其特征在于：所述的Pseudomonassp.YLYP29和RhodococcuspyridinivoransXB制成浓度为108～1010cfu/mL的菌悬液。6.根据权利要求4或5所述的复...

【专利技术属性】
技术研发人员：莫测辉，冯乃宪，李彦文，蔡全英，赵海明，李慧，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：广东,44