用于治疗颅内出血相关症状的方法和组合物技术

本发明专利技术提供了用于治疗颅内出血(ICH)患者的方法和组合物。所述方法包括使用如含有乳铁蛋白重组构建体的产物，以及乳铁蛋白和IgG的Fc结构域的融合蛋白的构建体。

Methods and compositions for treating intracranial hemorrhage related symptoms

The present invention provides methods and compositions for the treatment of intracranial hemorrhage (ICH). The method includes the use of products such as recombinant constructs containing lactoferrin and constructs of fusion proteins containing the Fc domain of lactoferrin and IgG.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗颅内出血相关症状的方法和组合物相关申请的交叉引用本申请要求于2015年6月24日提交的标题为“用于治疗颅内出血相关症状的方法和组合物”的美国临时专利申请No.62/184,049的优先权，其全部内容通过引用方式并入到本文中。关于联邦资助研究或开发的声明本专利技术是由美国政府支持，并在美国国立卫生研究院授予的NS090650号批准下完成的。政府对本专利技术享有一定的权利。
本专利技术涉及用于治疗颅内出血(ICH)及其相关病症的方法和组合物。
技术介绍
颅内出血(ICH)是一个严重的公共健康问题，其在所有中风亚型和长期失能类疾病中死亡率最高，且没有FDA批准的有效疗法。在世界范围内，虽然颅内出血住院人数增加，但死亡率并没有下降。ICH引起瞬间质量效应，破坏周围脑组织，常常导致神经系统早期死亡，并且在蛛网膜下腔出血的情况下延迟脑缺血(DCI)和脑血管痉挛。颅内出血(ICH)由大脑内部或表面的血管破裂/病变导致的渗漏或爆裂引起，导致脑损伤和神经损伤。发生ICH后，沉积的血液首先通过压迫脑组织(质量效应)，然后通过脑组织(包括血管)血肿成分的有害化学作用造成损伤。血液沉积导致溶血产物(例如铁)的毒性，氧化应激，促炎反应，免疫细胞募集，蛋白水解酶介导的细胞外基质修饰，血脑屏障破坏和致命的脑水肿。由于ICH的多因素性，因此治疗该疾病的特定疗法难以实现。由于对ICH没有有效治疗方法，使得获得一种对ICH有效的治疗方法是一个长期而亟待解决的过程。乳铁蛋白(LTF)也被称为乳铁传递蛋白，是一种众所周知的内源性糖蛋白，其具有抗微生物和免疫调节功能，能够抑制炎症反应并促进修复，同时由于LTF属于转铁蛋白家族的铁结合糖蛋白，因此还能有效的螯合游离铁。乳铁蛋白是一种保守的由约692个氨基酸残基组成的，单体分子量80-kDa的单链多肽链糖蛋白，广泛存在于各种分泌液中，如牛奶，唾液，眼泪，支气管，鼻腔分泌物，肠道分泌物以及中性粒细胞次级颗粒。乳铁蛋白也存在于粒细胞(多形核白细胞；PMN)的次级颗粒中，并由一些腺泡细胞分泌。可以从牛奶中纯化或以重组蛋白形式获得乳铁蛋白。乳铁蛋白是调节免疫应答的关键组分，特别是对于先天性与适应性组分之间的协调作用以及相关的应答反应。先天性组分的参与导致触发信号通路以促进炎症，当特异性免疫应答发生或上调时，以确保入侵病原体一直处于被检查的状态。而乳铁蛋白是参与上述过程的关键分子。乳铁蛋白是一种高度保守的单体分子量80-kDa的单链多肽链糖蛋白，由两个高度同源的片段组成，命名为C端片段，每个片段都能结合单个三价铁离子(Fe3+)。在这方面，乳铁蛋白被认为是一种抗氧化剂，因为其结合铁的能力能够抑制铁催化下H2O2和·OH(42-45)的形成。最终，结合Fe3+的乳铁蛋白被安全地转运到巨噬细胞或其他细胞内在胞内被利用或储存。LTF还与过敏反应中的调节组分共同影响免疫调节功能，并保护机体免受线粒体功能障碍的影响。众所周知，乳铁蛋白是一种具有抗微生物和免疫调节功能的内源性糖蛋白，能够抑制炎症反应并通过其与游离铁的有效螯合促进修复。然而，由于LTF在血液中半衰期短且难以穿透血脑屏障，其治疗潜力非常有限。LTF可迅速从体循环中被清除(几分钟的半衰期)。因此，尽管乳铁蛋白具有上述的多种活性，仍然需要开发一种有效的乳铁蛋白构建体，其能够为治疗哺乳动物疾病提供一种有利的治疗方法。最近，乳铁蛋白融合蛋白在现有技术中被公开，如PCT/JP2013/062685和美国专利US20150093382，然而，内源LTF需要进一步优化，从而使这种融合蛋白能进一步改善认知过程和神经功能，以及改变损伤区域的细胞反应，如改善小神经胶质细胞的抗炎反应，减少嗜中性粒细胞的浸润及降低神经元的死亡量。
技术实现思路
本文公开了用于有效预防和治疗与颅内出血(ICH)或其他相关病症相关的症状的组合物和方法。这些组合物包含多种形式的乳铁蛋白以及乳铁蛋白融合蛋白，包括但不限于人乳铁蛋白(hLTF)与IgG的Fc片段组成的新型融合蛋白(PRC14)。因此，为了优化乳铁蛋白的治疗能力并提高其稳定性和生物利用度，在一些实施例中，重组融合蛋白PRC14的获得延长了LTF的生物利用度，并且在另外的一些实施例中增加了LTF的治疗有效性。本文一些实施例中，公开了包含乳铁蛋白编码序列和与乳铁蛋白编码序列融合的免疫球蛋白IgGFc结构域编码序列的重组多肽。关于该多肽的一些实施例中，所述多肽进一步包含了IgG铰链编码序列，其中铰链编码序列位于乳铁蛋白编码序列和Fc结构域编码序列之间，在另一个实施例中，IgGFc结构域编码序列为免疫球蛋白G2(IgG2)编码序列，在又一个实施例中，IgG铰链编码序列是免疫球蛋白G2(IgG2)编码序列。在一些实施例中，编码序列是人源的。在所述多肽的另一个实施例中，所述氨基酸序列包含SEQIDNO：2，在另一个实施例中，所述多肽糖基化从而形成糖基化多肽，并且在又一个实施例中，所述糖基化多肽是N-连接型。在一些实施例中，所述多肽进一步包含接头序列(linkersequence)，其中接头包含两个氨基酸，在另一个实施例中所述接头包含GS序列。在本文的一些实施例中，公开了一种独立的重组多聚核苷酸分子，其包含一段核酸序列，所述核酸序列编码一段具有乳铁蛋白编码序列的多肽，以及与乳铁蛋白编码序列融合的免疫球蛋白IgGFc结构域编码序列。在另一个实施例中，所述多聚核苷酸还包含IgG铰链编码序列，在又一个实施例中，IgG铰链编码序列为免疫球蛋白G2(IgG2)编码序列。在一些实施例中，编码序列是人源的，并且在其他实施例中，核酸序列包含SEQIDNO：1。在一些实施例中，人IgG亚型的核心序列包含IgG1(SEQIDNO：3)；IgG2(SEQIDNO：4)；IgG3(SEQIDNO：5)；IgG4(SEQIDNO：6)。本文的其他实施例中，公开了一种表达载体，所述表达载体包含一段异源启动子序列，所述序列与编码权利要求2多肽的核酸序列相连接。在所述表达载体的一些实施例中，核酸序列包含SEQIDNO：1。在进一步的实施例中，所述载体能够在哺乳动物细胞、CHO细胞、酵母细胞、或昆虫细胞中表达。在本文的一些实施例中公开了一种宿主细胞，其包含编码权利要求2多肽的多聚核苷酸分子，在进一步的实施例中，所述多核苷酸分子编码SEQIDNO：2的多肽。在另一个实施例中，所述宿主细胞为哺乳动物细胞、CHO细胞、酵母细胞或昆虫细胞。在本文的一个实施例中公开了一种组合物，所述组合物包含一种多肽，所述多肽包含乳铁蛋白编码序列和与乳铁蛋白编码序列融合的免疫球蛋白IgGFc结构域编码序列，以及药学上可接受的载体。在所述组合物的另一个实施例中，所述多肽包含SEQIDNO：2，并且在所述组合物的其他实施例中，所述载体是水溶液，盐水或粉末。在又一个实施例中，所述组合物被冷冻或冻干。另一个实施例，公开了用于治疗或预防受试者颅内出血或其相关病症的方法，所述方法包括给受试者施用有效量的包含上述多肽的组合物，其中所述多肽包含乳铁蛋白编码序列和与乳铁蛋白编码序列相融合的免疫球蛋白IgGFc结构域编码序列。在所述方法的一个实施例中，所述多肽通过鞘内，颊部，口服，局部，皮内，皮下，鼻内，肌内，静脉内，动脉内或本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组多肽，其包含：乳铁蛋白编码序列；和与所述乳铁蛋白编码序列融合的免疫球蛋白IgG Fc结构域编码序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.06.24 US 62/184,0491.一种重组多肽，其包含：乳铁蛋白编码序列；和与所述乳铁蛋白编码序列融合的免疫球蛋白IgGFc结构域编码序列。2.根据权利要求1所述的多肽，其特征在于：包含IgG铰链编码序列，其中所述铰链编码序列位于所述乳铁蛋白编码序列和所述Fc结构域编码序列之间。3.根据权利要求1所述的多肽，其特征在于：其中所述IgGFc结构域编码序列是免疫球蛋白G2(IgG2)编码序列。4.根据权利要求2所述的多肽，其特征在于：其中所述IgG铰链编码序列是免疫球蛋白G2(IgG2)编码序列。5.根据权利要求1所述的多肽，其特征在于：其中所述编码序列是人源的。6.根据权利要求3所述的多肽，其特征在于：其中所述氨基酸序列包含SEQIDNO：2。7.根据权利要求1所述的多肽，其特征在于：其中所述多肽被糖基化以形成糖基化多肽。8.根据权利要求7所述的多肽，其特征在于：其中所述糖基化多肽是N-连接的。9.一种包含编码如权利要求1所述多肽的核酸序列的重组多聚核苷酸分子。10.根据权利要求9所述的多聚核苷酸，其特征在于：还包含IgG铰链编码序列。11.根据权利要求10所述的多聚核苷酸，其特征在于：其中所述IgG铰链编码序列是免疫球蛋白G2(IgG2)编码序列。12.根据权利要求9所述的多聚核苷酸，其特征在于：其中所述编码序列是人源的。13.根据权利要求12所述的多聚核苷酸，其特征在于：其中所述核酸序列包含SEQIDNO：1。14.一种表达载体，所述表达载体包含编码权利要求2所述多肽的核酸序列，以及其连接的异源启动子序列。15.根据权利要求14所述的表达载体，其特征在于：其中所述核酸序列包含SEQIDNO：1。16.根据权利要求14所述的表达载体，其特征在于：其中所述载体在哺乳动物细胞中...

【专利技术属性】
技术研发人员：ML·克鲁策尔，J·阿洛诺夫斯基，
申请(专利权)人：德克萨斯大学系统董事会，
类型：发明
国别省市：美国,US