用于确定精子性别的抗体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及一种用于确定精子的性别的抗体，及其用途，更具体地，涉及一种用于确定精子的性别的组合物，一种用于确定性别的方法，一种用于生产特定性别的动物的方法，所述组合物和所述方法使用所述抗体。已确认的是，在本发明专利技术中，带有X‑染色体的精子和带有Y‑染色体的精子可通过由所述抗体的处理引起的带有Y‑染色体的精子的凝集反应容易地区分开，由此可大量生产具有特定性别的定制的动物。此外，可选择性地生产具有期望性别的牲畜，因此预期本发明专利技术有助于计划性繁殖、育种改良以及管理效率的提高。

Antibodies for determining the sex of sperm and its use

The present invention relates to an antibody for determining the sex of a sperm and its use, more specifically, a composition for determining the sex of a sperm, a method for determining sex, a method for producing a sex specific animal, and the composition and the method using the antibody. It is confirmed that in this invention, sperm with X chromosome and sperm with Y chromosome can be easily separated by the agglutination reaction of sperm with Y chromosomes caused by the treatment of the antibody, thereby producing a large quantity of customized animals with specific sex. In addition, it is possible to selectively produce livestock with desired sex, so it is expected that the invention will be helpful for planned breeding, breeding improvement and management efficiency improvement.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于确定精子性别的抗体及其用途
本专利技术涉及一种用于性控分离精子的抗体及其用途，更具体地，涉及一种使用所述抗体性控分离精子的组合物和方法，以及产生特定性别的动物的方法。
技术介绍
精子性控分离(sexing)生物技术是一种用于通过仅分离期望性别的精子并诱导受精和怀孕来产生所需性别后代的技术。该技术对于生产效率、管理和商业方面是非常重要的，并且对技术发展的需求正在增长。特别地，在例如产生受精卵和人工受精的各种体内或体外方案中，期望性别的选择可产生巨大的经济效益。例如，就奶牛(cow)来说，可选择性地生产能够产奶的雌性小牛，就肉牛来说，因为雄性小牛有更高的生长速度和体重增加，所以可选择性地生产能够有效地产生比雌性小牛更多的肉类的雄性小牛，或出于生产高质量肉牛的育种改良的目的，可选择性地大量生产高产雌性牛，这有助于在牲畜饲养人和由此产生的经济效益方面进行有效管理。同时，在牲畜的性别鉴定方面，怀孕期后代的性别是通过构成性染色体对的两种染色体的组合确定的，因此通过精子的染色体即精子的性别确定怀孕期间后代的性别。具体地，在牲畜精液中存在的精子分为雌性(X染色体)精子和雄性(Y染色体)精子，睾丸组织中的二倍体精子母细胞分化成成熟的单倍体精子。50％带有X染色体的精子和50％带有Y染色体的精子存在于精液中。因此，后代的性别是由卵子(X染色体)通过精液中的带有X染色体和Y染色体中任何一种的精子受精形成的性染色体对(XX或XY)确定的。因此，天然的雌性-与-雄性的性别比通常上为50:50的雌性后代：雄性后代。实际上，性别控制技术的重要性和必要性在包括畜牧生产在内的许多领域中早已受到承认，并且通过物理方法或形态学方法分选带有X染色体的X精子和带有Y染色体的Y精子的各种技术已被尝试。在1982年，自从美国农业部、科罗拉多大学和英国剑桥大学的科学家报道了基于根据精子的X和Y染色体的长度DNA含量的不同可进行精子的性控分离，到现在进行了各种研究。例如，基于根据精子运动性的移动速率的分选精子的方法已被公开，在该方法中进行了离心分离或精子穿过各种材料制成的珠层、柱子等等，基于精子的大小、重量和密度(韩国专利公开号10-2009-0024034)，但是存在的问题是仅仅通过这些方法很难获得具有高质量的期望性别的精子。进一步地，现在常用的是通过X和Y染色体的长度差异来性控分离精子的性控分离技术(权利转移自XYLLC)，在该技术中，用荧光染料对精子的染色体进行短时间染色，然后将通过细胞分类器所带的激光产生的散射光转换为电信号以确定精子的性别，或使精子通过高压分离器以分离所需的精子。这些机械分选方法导致在没有分选的情况下损失了大量精子，并且明显地影响精子的运动性和成活率，运动性和成活率对卵母细胞的受精是非常关键的，这是由于分选方法的长期性和激光产生的压力和电刺激造成的。进一步地，由于精子是通过使用仪器分选的，所以它们的售价比非分选的精液高大约4倍，储存在商业冷冻精液吸管中的精子的数量比非分选的精子的数量少5-10倍，这是造成低受孕率的主要原因。进一步地，由于采用上述方法的精子分选需要昂贵的设备和专业人员以及对于大量生产来说绝对必需的额外设备和人力，因此对通过装置进行的精子性控分离有许多限制，造成相关产业正面临许多困难。此外，最重要的问题是由于用于精子分选的荧光材料是非特异性地与所有的染色体结合，并且受精发生时没有在卵母细胞受精之前被除去，因此对后代的基因安全性有很多怀疑。在欧洲，动物福利是头等大事，禁止精子分选方法尚在讨论中。当前仍然迫切需要发展新技术以克服上述使用仪器的精子分选方法的问题。为了发现能够区分X精子和Y精子的生物标志物，许多科学家正在进行研究。专利技术详述技术问题为了解决上述问题，本专利技术人开发了一种与Y染色体精子特异性结合的抗体，他们发现可通过使用所述抗体分选所需的X染色体精子或Y染色体精子，导致精子性控分离，从而完成本专利技术。因此，本专利技术的一个目的是提供一种抗体，其包括重链可变区，所述重链可变区包括选自下组中的一个或多个：包括如SEQIDNO:1所示的氨基酸序列的HCDR1，包括如SEQIDNO:2所示的氨基酸序列的HCDR2，和包括如SEQIDNO:3所示的氨基酸序列的HCDR3；和轻链可变区，所述轻链可变区包括选自下组中的一个或多个：包括如SEQIDNO:4所示的氨基酸序列的LCDR1，包括如SEQIDNO:5所示的氨基酸序列的LCDR2，和包括如SEQIDNO:6所示的氨基酸序列的LCDR3。进一步地，本专利技术的另一个目的是提供一种包括所述抗体作为活性组分的用于性控分离精子组合物，和/或一种包括试剂盒的相关产品，和/或其应用方法。进一步地，本专利技术的另一个目的是提供一种用于生产抗体的表达载体，其包括编码包含SEQIDNO:7或SEQIDNO:8的氨基酸序列的分离的核苷酸，一种用所述表达载体体外转化的宿主细胞，一种通过使用所述宿主细胞生产所述抗体的方法。进一步地，本专利技术的另一个目的是提供一种哺乳动物精子的性控分离方法，所述方法包括a)从雄性主体收集精液；b)用所述抗体处理精液；和c)对精液中与抗体特异性结合的精子和非结合的精子进行分选。进一步地，本专利技术的另一个目的是提供一种用于生产特定性别的哺乳动物的方法，所述方法包括a)从雄性主体收集精液；b)通过用所述抗体处理精液来性控分离精子；c)使用性控分离的精子进行受精；和d)生产特定性别的后代。然而，本专利技术所解决的技术问题并不限于上述目的，其他未提及的目的将从以下描述清楚地被本领域技术人员所理解。技术方案为了实现本专利技术的上述目的，本专利技术提供了一种抗体，其包括重链可变区，所述重链可变区包括选自下组中的一个或多个：包括如SEQIDNO:1所示的氨基酸序列的HCDR1，包括如SEQIDNO:2所示的氨基酸序列的HCDR2，和包括如SEQIDNO:3所示的氨基酸序列的HCDR3；和轻链可变区，所述轻链可变区包括选自下组中的一个或多个：包括如SEQIDNO:4所示的氨基酸序列的LCDR1，包括如SEQIDNO:5所示的氨基酸序列的LCDR2，和包括如SEQIDNO:6所示的氨基酸序列的LCDR3。在本专利技术的一个具体实施方式中，所述重链可变区可包括如SEQIDNO:7所示的氨基酸序列，所述轻链可变区可包括如SEQIDNO:8所示的氨基酸序列。在本专利技术的另一个具体实施方式中，所述重链可变区可包括选自下组中的一个或多个：包括编码如SEQIDNO:9所示的核苷酸序列的氨基酸序列的HCDR1，包括编码如SEQIDNO:10所示的核苷酸序列的氨基酸序列的HCDR2，和包括编码如SEQIDNO:11所示的核苷酸序列的氨基酸序列的HCDR3；所述轻链可变区可包括选自下组中的一个或多个：包括编码如SEQIDNO:12所示的核苷酸序列的氨基酸序列的LCDR1，包括编码如SEQIDNO:13所示的核苷酸序列的氨基酸序列的LCDR2，和包括编码如SEQIDNO:14所示的核苷酸序列的氨基酸序列的LCDR3。在本专利技术的另一个具体实施方式中，所述重链可变区可包括编码如SEQIDNO:15所示的核苷酸序列的氨基酸序列，所述轻链可变区可包括编码如SEQIDNO:16所示的核苷酸序列的氨基酸序列。在本专利技术的另一个具本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗体，其包括：重链可变区，所述重链可变区包括选自下组中的一个或多个：包括如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的HCDR1，包括如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的HCDR2，和包括如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的HCDR3；和轻链可变区，所述轻链可变区包括选自下组中的一个或多个：包括如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列的LCDR1，包括如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的LCDR2，和包括如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列的LCDR3。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.07.13 KR 10-2015-0099080;2016.07.12 KR 10-2011.一种抗体，其包括：重链可变区，所述重链可变区包括选自下组中的一个或多个：包括如SEQIDNO:1所示的氨基酸序列的HCDR1，包括如SEQIDNO:2所示的氨基酸序列的HCDR2，和包括如SEQIDNO:3所示的氨基酸序列的HCDR3；和轻链可变区，所述轻链可变区包括选自下组中的一个或多个：包括如SEQIDNO:4所示的氨基酸序列的LCDR1，包括如SEQIDNO:5所示的氨基酸序列的LCDR2，和包括如SEQIDNO:6所示的氨基酸序列的LCDR3。2.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述重链可变区包括如SEQIDNO:7所示的氨基酸序列，所述轻链可变区包括如SEQIDNO:8所示的氨基酸序列。3.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述重链可变区包括选自下组中的一个或多个：包括编码如SEQIDNO:9所示的核苷酸序列的氨基酸序列的HCDR1，包括编码如SEQIDNO:10所示的核苷酸序列的氨基酸序列的HCDR2，和包括编码如SEQIDNO:11所示的核苷酸序列的氨基酸序列的HCDR3；并且所述轻链可变区包括选自下组中的一个或多个：包括编码如SEQIDNO:12所示的核苷酸序列的氨基酸序列的LCDR1，包括编码如SEQIDNO:13所示的核苷酸序列的氨基酸序列的LCDR2，和包括编码如SEQIDNO:14所示的核苷酸序列的氨基酸序列的LCDR3。4.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述重链可变区包括编码如SEQIDNO:15所示的核苷酸序列的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包括编码如SEQIDNO:16所示的核苷酸序列的氨基酸序列。5.根据权利要求1-4中任意一项所述的抗体，其特征在于，所述抗体是单克隆抗体或多克隆抗体。6.用于产生权利要求1至4中任一项所述的抗体的表达载体，所述表达载体包括编码SEQIDNO:7或SEQIDNO:8的氨基酸序列的分离的核苷酸。7.一种宿主细胞，其由权利要求6所述的表达载体体外转化。8.根据权利要求7所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞选自下组中的任何一种：微生物例如细菌(大肠杆菌)、酵母等等，CHO细胞，F2N细胞，HEK293细胞和产生抗体的杂交瘤细胞。9.一种生产权利要求1至4中任一项所述的抗体的方法，包括以权利要求6所述的表达载体转染宿主细胞。10.一种用于性控分离精子的组合物，包括权利要求1至4中任一项所述的抗体作为活性组分。11.根据权利要求10所述的组合物，其特征在于，所述抗体与哺乳动物的Y染色体精子结合从而引起精子凝集。12.根据权利要求11所述的组合物，其特征在于，所述哺乳动物选自由牛、小鼠、狗和马构成的组中的任意一种。13.一种用于性控分离精子的试剂盒，包括作为活性组分的抗体，所述抗体包括...

【专利技术属性】
技术研发人员：金东具，
申请(专利权)人：努里塞恩斯有限公司，金东具，
类型：发明
国别省市：韩国,KR