The invention discloses a method and application of the preparation and application of a recombinant bovine infectious bovine rhintracheitis virus gD protein and subunit vaccine expressed by CHO cells, and proves that the vaccine can produce strong humoral immunity in cattle, which belongs to the field of animal vaccine and veterinary biologics. The aim is to provide a large-scale industrialization. The preparation method of recombinant subunit vaccine for the production of infectious bovine rhintracheitis virus, the preparation method of the recombinant subunit vaccine includes the following steps: 1) clone the eukaryotic expression vector containing the gD protein encoding gene; 2) transfect the CHO cells by the formula of selection, screening and domestication to obtain the CHO fines of the stable and efficient expression of gD protein. Cell strain; 3) the cell strain of 2) was cultured and cultured. After purification, the recombinant gD protein was purified; 4) the recombinant gD protein was fully mixed with ISA 201 VG to get the recombinant subunit vaccine. The method provided by the invention can harvest the target protein from the cell culture supernatant, and the yield is up to 2 3g/L, not only shortening the time of protein purification and simplifying the production steps of the vaccine, but also greatly reducing the cost of the vaccine production.
【技术实现步骤摘要】
CHO细胞表达牛传染性病气管炎病毒gD蛋白及其亚单位疫苗的制备和应用
本专利技术涉及一种稳定高效分泌表达牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白的CHO细胞系及牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白亚单位疫苗的制备方法和应用,属于动物疫苗与兽用生物制品
技术介绍
牛传染性鼻气管炎(InfectiousBovineRhinotracheitis,IBR)是由牛传染性鼻气管炎病毒(InfectiousBovineRhinotracheitisvirus,IBRV)引起的一种急性、热性、接触性传染病,它以高热、呼吸困难、鼻炎、窦炎和上呼吸道炎症为特征。该病毒还可引起母牛生殖系统损害,导致流产、死胎等,有时还会引发肠炎、小牛脑炎、眼结膜炎和角膜炎等。该病对奶牛的产奶量、牛群的肥育率及繁殖力均有较大的影响,并且急性的IBR呼吸道感染可继发牛致命性细菌性肺炎。该病于20世纪50年代初最早报道于美国,但目前在世界范围内流行。我国1980年首次从新西兰进口种牛中发现此病,目前在大部分省份的奶牛、黄牛和水牛均有IBRV感染。流行病学调查显示,我国14个养牛主要省份IBRV平均感染率为33.3%,给我过养牛业造成巨大的经济损失。IBRV基因组由一个长独特区(UL,106kb)和一个短独特区(Us,l0kb)及Us区两侧的重复序列IRs和TRs组成,IBRV基因组为双股线性DNA分子,约138kb。整个基因组编码33个结构蛋白和15个非结构蛋白,其中四个糖蛋白gB、gC、gD和gE是IBRV的主要抗原,而gD蛋白是病毒粒子表面和病毒感染细胞的主要分子,是IBRV的主要结构蛋白,同时也是IB ...
【技术保护点】
一种重组牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括以下步骤:1)将牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白基因克隆到真核表达载体中得到含有牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白编码基因的重组质粒;2)再将含有牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白编码基因的重组质粒转染至CHO细胞中;3)通过培养、筛选、驯化2)中所述CHO细胞株得到高度表达的细胞株;4)发酵培养3)中所述细胞株,纯化后得到重组牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白。
【技术特征摘要】
1.一种重组牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括以下步骤:1)将牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白基因克隆到真核表达载体中得到含有牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白编码基因的重组质粒;2)再将含有牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白编码基因的重组质粒转染至CHO细胞中;3)通过培养、筛选、驯化2)中所述CHO细胞株得到高度表达的细胞株;4)发酵培养3)中所述细胞株,纯化后得到重组牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白。2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述含有牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白编码基因的重组质粒是先将牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白编码基因进行密码子优化,然后克隆到真核表达载体中,得到重组质粒。3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,所述牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白编码基因如SEQIDNO.1所...
【专利技术属性】
技术研发人员:钱泓,吴有强,卞广林,张强,吴素芳,车影,宋月鸿,吕洋萍,陈滨,查银河,
申请(专利权)人:浙江海隆生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:浙江,33
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