一种检测西他沙星中异构体杂质含量的方法技术

本发明专利技术公开了一种检测西他沙星中异构体杂质含量的方法，包括如下步骤：分别制备各异构体及西他沙星的对照品溶液及待测样品的供试品溶液；采用毛细管电泳方法分别对对照品溶液、供试品溶液进行检测；按外标法以峰面积计算，或者根据峰面积与浓度之间的标准曲线计算各异构体杂质的含量。本发明专利技术具有成本低廉、操作简单、分离度高、灵活性好及良好的线性关系、专属性、精密度、稳定性、灵敏度和重复性，加样回收率高，检测结果准确、可靠等诸多优点，能够实现将西他沙星及其异构体IMA、IMB、IMC、IMD、IME同时分离，可为西他沙星产品质量监控提供一种行之有效的方法，具有实用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种检测西他沙星中异构体杂质含量的方法
本专利技术涉及一种检测西他沙星中异构体杂质含量的方法，属于化学分析

技术介绍
本领域公知：药物中的杂质是影响药物纯度的主要因素，如果药物中所含杂质超过质量标准规定的限量要求，极有可能造成药物的外观形状、理化参数发生改变，甚至影响药物的稳定性，会致使药物活性降低而毒副作用增加，严重危害药物的产品质量和患者的用药安全；同时，药物中的杂质涵盖范围非常广泛，不仅包括常规意义上不同分子式的杂质，对于手性药物而言，还包括药物异构体的杂质；药物中大约有80％以上的药物都是手性药物，大多数情况下，其中一种异构体具有药理活性，而另一种异构体通常活性差，甚至有毒副作用，因此对手性异构体的分析检测就显得尤为重要。西他沙星(Sitafloxacin，STFX，别名DU-6859a)是由日本第一制药三共株式会社(DaiichiSankyo)开发的第四代广谱氟喹诺酮类抗菌药，药用形式为3/2水合物(M/W＝436.84)，化学结构式为：其主要结构特点是1位N原子上的顺式氟代环丙烷取代基，现认为西他沙星优异的药效学、药动学特征多与该基团的存在有关；临床上，西他沙星主要用于呼吸道感染、泌尿生殖系统感染、咽喉扁桃体炎、中耳炎及牙周炎等急、慢性感染；西他沙星具有良好的体内、外抗菌活性，抗菌谱广，其抗菌作用方面的亮点包括对含氟喹诺酮类耐药菌株在内的一些耐药菌具有良好抗菌活性，对细菌靶蛋白的抑制能力强，诱导耐药的可能性较低应用前景良好。西他沙星结构中有3个手性中心，共计4对异构体，具体如下：因此在合成过程中会可能产生上述异构体杂质。由于目前西他沙星主要是按照以下合成路线进行合成：因由于IMF和IMG这两个异构体在合成路线中不会产生，因此在杂质检测时通常不需要考虑，但是对其余异构体杂质IMA、IMB、IMC、IMD和IME则需要进行严格控制，其中的IMA、IMB和IMC异构体需要进行准确地定量分析，而IMD和IME异构体则只需要进行定性分析，需要保证检测时IMD和IME异构体对其它异构体杂质的检测不会构成干扰。目前对西他沙星异构体的分析方法主要采用HPLC手性分析方法，例如：张秋佳等采用十八烷基硅烷键合硅胶柱为色谱柱，选用D-苯丙氨酸为手性添加剂，硫酸铜作为配位金属，以HPLC法分离西他沙星手性药物(HPLC法测定西他沙星异构体，张秋佳、陈雷、邹德超、张猛，中国抗生素杂志2012年3月第37卷第3期)，该方法存在色谱柱昂贵，色谱柱平衡时间长，使用寿命短，柱效低，仅能分离出西他沙星异构体中的IMA和IMB两个异构体杂质等缺陷；朱子微等采用十八烷基硅烷键合硅胶柱为色谱柱，选用L-苯丙氨酸为手性添加剂，硫酸铜作为配位金属，以HPLC法分离西他沙星异构体(HPLC法测定西他沙星片异构体的方法研究，朱子微，宓寅筱，张晓丽，叶虹，中国抗生素杂志2015年12月第40卷第12期)，该方法虽然分离度有所提高，但是也仅能分离出西他沙星中的IMA、IMB和IMC三个异构体杂质。除了手性HPLC法，也有文献曾报道采用毛细管电泳手性拆分西他沙星异构体，例如：庄晓庆等采用β-环糊精以及硫酸化β-环糊精作为手性添加剂，在毛细管电泳上分离了西他沙星STX及其三个异构体IMA、IMB和IMC(毛细管电泳手性拆分西他沙星异构体，庄晓庆、毛白杨、狄斌、解双陆，药物分析杂志ChinJPharmAnal2012，32(8))，该方法虽然分离度有所提高，但是分离度依旧较低，重现性差，仅能将STX及IMA、IMB和IMC进行分离，无法实现对西他沙星中IMD和IME异构体的定性定量分析。综上所述，虽然目前西他沙星异构体的手性分析检测方法较多，但是存在检测分析成本太高、操作复杂、分离度低、灵活性差，最多仅能分离出西他沙星异构体中的IMA、IMB和IMC杂质，不能实现对西他沙星中的IMD和IME异构体杂质的定性定量分析等问题，不能实现对西他沙星质量的精确监控。
技术实现思路
针对现有技术存在的上述问题，本专利技术的目的是提供一种成本低廉、操作简单、分离度高、灵活性好、可完全检测分析西他沙星中IMA、IMB、IMC、IMD和IME各异构体杂质的检测西他沙星中异构体杂质含量的方法，以满足西他沙星质量监控要求。为实现上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案如下：一种检测西他沙星中异构体杂质含量的方法，包括如下步骤：c)分别制备各异构体及西他沙星的对照品溶液；d)制备待测样品的供试品溶液；c)采用毛细管电泳方法分别对对照品溶液、供试品溶液进行检测；d)按外标法以峰面积计算，或者根据峰面积与浓度之间的标准曲线计算，得到西他沙星中各异构体杂质的含量；其特征在于，所述毛细管电泳方法的检测条件为：石英毛细管总长为50～70cm，有效长度为45～55cm，柱内径为45～75μm；分离缓冲溶液的组成为：5～15mmol/L磷酸钾，5～9mmol/L硫酸铜，5～9mmol/LD-苯丙氨酸，15～30mmol/Lγ-环糊精，pH为4.0～4.5；分离电压为10～20kV；柱温为20～25℃；检测波长为296～297nm；采用压力进样，进样压力为0.5～1psi，进样时间为10～20秒。步骤a)中的异构体至少包括西他沙星的IMA、IMB、IMC、IMD和IME异构体。作为优选方案，所述对照品溶液和供试品溶液的浓度均为0.01mg/mL～1mg/mL。作为优选方案，所述毛细管电泳方法的检测条件为：石英毛细管裸柱长为60cm，有效长度为49.5cm，柱内径为50μm；分离缓冲溶液的组成为：15mmol/L磷酸钾，7mmol/L硫酸铜，7mmol/LD-苯丙氨酸，30mmol/Lγ-环糊精，pH为4.5；分离电压为15kV；柱温为25℃；检测波长为297nm；采用压力进样，进样压力为0.5psi，进样时间为10秒。与现有技术相比，本专利技术具有如下显著性有益效果：本专利技术提供的检测西他沙星中异构体杂质含量的方法，相较于传统的手性HPLC和毛细管电泳法而言，具有成本低廉、操作简单、分离度高、灵活性好及良好的线性关系、专属性、精密度、稳定性、灵敏度和重复性，加样回收率高，检测结果准确、可靠等诸多优点，能够实现将西他沙星及其异构体IMA、IMB、IMC、IMD、IME同时分离，可为西他沙星产品质量监控提供一种行之有效的方法，因而具有极强的实用价值，相对于现有技术而言，取得了显著性进步。附图说明图1为杂质IMA对照品溶液在本专利技术所述检测条件下的CE分离图；图2为杂质IMB对照品溶液在本专利技术所述检测条件下的CE分离图；图3为杂质IMC对照品溶液在本专利技术所述检测条件下的CE分离图；图4为杂质IMD对照品溶液在本专利技术所述检测条件下的CE分离图；图5为杂质IME对照品溶液在本专利技术所述检测条件下的CE分离图；图6为西他沙星(STX)对照品溶液在本专利技术所述检测条件下的CE分离图；图7为混合溶液1在本专利技术所述检测条件下的CE分离图；图8为混合溶液2在本专利技术所述检测条件下的CE分离图；图9为杂质IMA的标准曲线图，纵坐标为峰面积，横坐标为浓度；图10为杂质IMB的标准曲线图，纵坐标为峰面积，横坐标为浓度；图11为杂质IMC的标准曲线图，纵坐标为峰面积，横坐标为浓度。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术技术方案本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测西他沙星中异构体杂质含量的方法，包括如下步骤：a)分别制备各异构体及西他沙星的对照品溶液；b)制备待测样品的供试品溶液；c)采用毛细管电泳方法分别对对照品溶液、供试品溶液进行检测；d)按外标法以峰面积计算，或者根据峰面积与浓度之间的标准曲线计算，得到西他沙星中各异构体杂质的含量；其特征在于，所述毛细管电泳方法的检测条件为：石英毛细管总长为50～70cm，有效长度为45～55cm，柱内径为45～75μm；分离缓冲溶液的组成为：5～15mmol/L磷酸钾，5～9mmol/L硫酸铜，5～9mmol/L D‑苯丙氨酸，15～30mmol/Lγ‑环糊精，pH为4.0～4.5；分离电压为10～20kV；柱温为20～25℃；检测波长为296～297nm；采用压力进样，进样压力为0.5～1psi，进样时间为10～20秒。

【技术特征摘要】
2016.10.20 CN 201610912737X1.一种检测西他沙星中异构体杂质含量的方法，包括如下步骤：a)分别制备各异构体及西他沙星的对照品溶液；b)制备待测样品的供试品溶液；c)采用毛细管电泳方法分别对对照品溶液、供试品溶液进行检测；d)按外标法以峰面积计算，或者根据峰面积与浓度之间的标准曲线计算，得到西他沙星中各异构体杂质的含量；其特征在于，所述毛细管电泳方法的检测条件为：石英毛细管总长为50～70cm，有效长度为45～55cm，柱内径为45～75μm；分离缓冲溶液的组成为：5～15mmol/L磷酸钾，5～9mmol/L硫酸铜，5～9mmol/LD-苯丙氨酸，15～30mmol/Lγ-环糊精，pH为4.0～4.5；分离电压为10～20kV；柱温为20～2...

【专利技术属性】
技术研发人员：康经武，孟然然，
申请(专利权)人：中国科学院上海有机化学研究所，
类型：发明
国别省市：上海,31