一个人类ＳＮＸ家族新基因ＳＮＸ２１，涉及一种人类基因。它的ｃＤＮＡ全长１８１４ｂｐ，位于染色体２０ｑ１２－１３．１区，整个基因长度大约８Ｋｂ，编码蛋白质为３６４个氨基酸，分子量约为４０．３ＫＤａ，ＳＮＸ２１在成人和胚胎时期的肝脏中有高水平的表达，可能参与胚胎肝脏的形成，并有望成为肝脏疾病治疗的基因药物。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及人类基因，具体是Sorting Nexin(SNX)家族的人类新基因SNX21的cDNA全长克隆及它在人体心脏胚胎发育过程中和成年时期的详细表达。包含PX同源域的基因在人类中目前发现了超过50个，其中SNX家族的成员已达29个，根据PX域在蛋白质中的位置不同，可以将所有成员分成几个类群，目前的研究主要集中在第一与第二类群。过去的研究证明，SNX家族的主要功能是蛋白质的分选，而目前这些被分选的蛋白质又主要是一些受体蛋白。SNX1在表皮生长因子受体和凝血酶(thrombin)因子的受体的分选中具有重要作用，而SNX2，4，6则分别被发现与酪氨酸激酶受体、凝血酶受体、血小板起源的生长因子以及胰岛素的受体在细胞内的运输有关，而另一个基因SNX9则被发现参与了一个大复合物的构成，该复合物与AP-2这个基因发挥功能有关。而SNX15的过多表达却反而可以抑制蛋白质从质膜到内涵体的正常运输。本专利技术的目的在于提供一个人类SNX家族新基因SNX21，分析它在人体肝脏胚胎发育过程中和成年时期的表达，以探索其对肝细胞病变和肿瘤形成的关系，进而研制开发肝脏疾病的基因治疗药物。在最新的研究中，我们分别鉴定了在人类前列腺中特异性表达和抑制肿瘤转移过程中特异性表达的G蛋白耦联的受体(Liu et al.，2000)。为了研究G蛋白耦联受体的降解和跨膜运输机制，我们用PX同源框的保守序列搜索NCBI数据库，得到一个新EST-AL521242。进一步的搜索找到了一些与EST-AL521242的3’端同源度为100％的EST。其中最长的一个EST-AL521241不属于任何已知基因，含有一个与EST-AL521242相同的250bp的片断。为了确定这两个EST是否属于同一个新基因，利用从胚胎肝脏中的反转录产物及分别位于AL521242和AL521241上一对引物(F1，R1，见后表)进行PCR。在96℃-1min，1个循环；58℃-1min，72℃-1min，30个循环的PCR反应条件下得到了一个420bp的产物。测序结果显示这一产物包括了这两个EST 250bp的重叠序列，所以可以确定这两个EST属于同一个基因。5’-和3’-端的RACE分别得到了一个590bp和834bp的片断。RACE得到的片断和计算机检索的结果拼接得到了新基因的1814bp的全长cDNA。这一序列已被提交到Genebank(Accession No.AF523834).新基因被命名为sorting nexin 21，并得到HUGO命名委员会的确认。SNX21位于20q 12-13.1区，整个基因长度大约为8kb，有4个外显子和3个内含子。SNX21的cDNA全长为1814bp，包括一段96bp的5’端未翻译区域和一段621bp的3’端未翻译区域。开放阅读框为1092bp，编码的蛋白质为364个氨基酸，分子量约为40.3kDa。该蛋白质包括一个109个氨基酸的PX同源框和一个33个氨基酸的不完整tetratricopeptide repeat(TPR)区域。SNX21是一个亲水性蛋白。亲水性分析显示其PX同源框的N-部分基本上全部由亲水区构成，该同源框的C-端则是一个超螺旋结构域。SNX1就包含一个位于N-部分的PX同源框和位于C-端3个超螺旋结构。据推测，这两个区域的作用与亚细胞结构定位及SNX家族成员之间的相互作用有关。其它一些SNX家族成员也含有超螺旋结构域，如SNX2和SNX4，及其它各种功能域，如SNX13/RGS-PX1中的RGS同源框，SNX9中的SH3同源框。SNX21的PX同源框与保守的PX同源框区域的同源度为40％(见图1)。在已被研究过的SNX家族成员中，它与SNX15的结构较为相似。后者也有位于N-端的PX同源框和位于C-端的超螺旋结构域。除了PX同源框，SNX21和SNX15都有位于C-端的TPR同源框(Barr et al.，2000)。TPR同源框存在于大量蛋白质中，其功能很可能与蛋白质之间的相互作用有关。据推测，TPR蛋白质倾向于与WD-40蛋白或含有TPR同源框的蛋白质相互作用，形成多蛋白复合物。SNX21的表达分析显示其转录产物在成年人的肝脏，胰脏和骨骼肌中有高水平的表达(见图2)。而在胚胎时期，SNX21仅仅在肝脏中有高水平的特异性表达(见图3)。该基因在成年人肝脏组织中表达水平的虽然下降，但表达的绝对量仍然不少，显示了SNX21在肝脏发育和再生过程中潜在的重要作用。本专利技术的优点1.提供了一个人类新基因SNX21基因的全长cDNA序列，并描述了其编码的蛋白产物与重要结构域的同源性，证明了该基因是SNX家族的成员之一。2.该基因编码的蛋白产物为亲水性蛋白，并且在人类成体组织大量限制在肝脏表达，有可能成为肝脏疾病治疗的基因工程产物。3.该基因在胚胎发育期可检测到强表达水平，说明该基因作为转录因子在发育早期起着很重要的作用，可能参与胚胎肝脏的形成。本专利技术通过以下附图和实施例作进一步阐述，但并不限制本专利技术的范围。附图说明图1.SNX21的氨基酸与PX同源域、几个模式动物的同源基因比较。图中黑色阴影表示氨基酸同源部分。图中的序列号为该同源蛋白在GeneBank内的Accession号码。PX(SNX21，人)，NP_608709(果蝇)，NP_082116(小鼠)，和NM_037438(SNX15，人)图2.SNX21在成人组织的Northern杂交图中1胰腺2肾3骨骼肌4肝5肺6胎盘7脑8心脏图3.SNX21在人类胚胎组织的Northern杂交 3A-12周胚胎，3B-17周胚胎，3C-18周胚胎，3D-20周胚胎，3E-23周胚胎，3F-25周胚胎图中1脾2胃3骨骼肌4肾5小脑6大脑7舌8肺9心脏10肾上腺11小肠12肝具体实施例方式一个人类SNX家族新基因SNX21的克隆、测序及其表达。1SNX21全长cDNA的克隆和测序以检索获得的cDNA序列设计RACE引物、其它引物及反应条件(见下表)Primer Sequence ProgramsCyclesF1 5’-CGCCGTTACTCGGACTTT 96℃-1min 1R1 5’-AGGGCCTTCTCACAGCAT 58℃-1min；72℃-Lnin30GSP 5’-GACTGCCCCACTGCCCA50℃-30min；94℃-2min 1F2 5’-GACGACGAGGACGAGGACGAC94℃-1min 1R2 5’-GCTCTGAGCTCTCC 56℃-1min；72℃-1min30F3 5’-TCGGGGATGGGACGTCA94℃-1min 1R3 5’-GGAAACTGCTCGGCCTCTG 58℃-1min；72℃-1min30F4 5’-CGCCCCTGAATGCACCGT 94℃-1min 1R4 5’-CCTTAAATCTAGGCAAGGGTTCGTC60℃-1min；72-2min 30F1，R1用于检测EST AL521242和AL521241是否属于同一基因。GSP用于肝mRNA的反转录F2，R2，F3，R3用于反转录产物的多重PCR扩增。F本文档来自技高网...
【技术保护点】
一个人类ＳＮＸ家族新基因ＳＮＸ２１，其特征在于该基因的全长ｃＤＮＡ核苷酸序列和编码氨基酸序列如下：ｇａａｃｃｃｇｇｃｃ ｇａｃｃｔｃｃａｔｇ ｇｇｃｔｇｃｇｇｇｇ ｇｇｃｔｇｃａｃｃｃ ｇｇａｃｃｃｃｔｇｇ ｇｇｃｇｃｇｇｃｇｃ ６０ ｇｃｃｃｃｔｇａａｔ ｇｃａｃｃｇｔｇｇｇ ａｃｇｃａｇｇａｇｇ ｇｔｇｃｃ ９５ａｔｇ ｇｃｃ ｔｃｃ ｃｇｇ ｃｔｃ ｃｔｇ ｃａｃ ｃｇｇ ｃｔｇ ｃｇｇ ｃａｃ ｇｃｃ ｔｔｇ ｇｃｃ ｇｇｃ １４０Ｍｅｔ Ａｌａ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｈｉｓ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ｈｉｓ Ａｌａ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｇｌｙ１ ５ １０ １５ｇａｃ ｇｇｃ ｃｃｃ ｇｇｇ ｇａｇ ｇｃｇ ｇｃｇ ｇｃｃ ａｇｔ ｃｃａ ｇａｇ ｇｃｃ ｇａｇ ｃａｇ ｔｔｔ １８５Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ａｌａ Ａｌａ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｇｌｎ Ｐｈｅ２０ ２５ ３０ｃｃｇ ｇａｇ ａｇｃ ｔｃａ ｇａｇ ｃｔｇ ｇａｇ ｇａｃ ｇａｃ ｇａｃ ｇｃｃ ｇａｇ ｇｇｃ ｃｔｇ ｔｃｃ ２３０Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ａｓｐ Ａｓｐ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｓｅｒ３５ ４０ ４５ｔｃｃ ｃｇａ ｃｔｃ ａｇｃ ｇｇｃ ａｃｃ ｃｔｃ ａｇｃ ｔｔｃ ａｃｃ ａｇｃ ｇｃｃ ｇａｇ ｇａｃ ｇａｃ ２７５Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ａｓｐ５０ ５５ ６０ｇａｇ ｇａｃ ｇａｃ ｇａｇ ｇａｃ ｇａｇ ｇａｃ ｇａｃ ｇａｇ ｇａｇ ｇｃｔ ｇｇｃ ｃｃｔ ｇａｃ ｃａｇ ３２０Ｇｌｕ Ａｓｐ Ａｓｐ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ａｓｐ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ａｓｐ Ｇｌｎ６５ ７０ ７５ｃｔｇ ｃｃｃ ｃｔｃ ｇｇｇ ｇａｔ ｇｇｇ ａｃｇ ｔｃａ ｇｇａ ｇａａ ｇａｃ ｇｃａ ｇａａ ｃｇｇ ａｇｃ ３６５Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ａｌａ Ｇｌ ｕ Ａｒｇ Ｓｅｒ８０ ８５ ９０ｃｃｃ ｃｃａ ｃｃｔ ｇａｔ ｇｇｇ ｃａｇ ｔｇｇ ｇｇｃ ａｇｔ ｃａｇ ｃｔｃ ｃｔ...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
【专利技术属性】
技术研发人员：吴秀山，朱传炳，曾伟奇，李永青，王跃群，袁婺洲，刘明耀，
申请(专利权)人：湖南师范大学，
类型：发明
国别省市：43[中国|湖南]
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