一种通过敲除mstnb基因获得快速生长红鲫纯合品系的方法技术

本发明专利技术属于鱼类育种领域，公开了一种通过敲除mstnb基因获得快速生长红鲫纯合品系的方法，包括如下步骤：制备红鲫mstnb基因的gRNA，将gRNA与Cas9mRNA的混合物显微注射到红鲫的一细胞期受精卵中，筛选获得F0代突变体；将F0代突变体与野生型红鲫交配，筛选获得F1代突变体；F1代突变体自交获得F2代突变体，筛选得到纯合突变体；纯合突变体自交扩繁，即得。本发明专利技术首次在红鲫中通过CRISPR/Cas9基因编辑技术成功建立了mstnb纯合敲除品系，获得的mstnb突变红鲫在12月龄较野生型体重提高29.57％、肌肉蛋白含量提高9.80％，为鱼类遗传育种提供优质种质资源，具有良好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于鱼类育种，公开了一种通过敲除mstnb基因获得快速生长红鲫纯合品系的方法。

技术介绍

1、鱼类是人类获取优质蛋白质的重要来源，而鱼类蛋白主要存在其肌肉组织中。鱼类养殖技术很关键的点就在于提高鱼类的生长速度，根本上来说就是最大限度地促进鱼类肌纤维细胞的快速繁殖，实现肌肉组织快速生长，从而实现生产效益的增加。提高生长速率能缩短上市时间，还能间接降低了鱼类发病概率，缩小了养殖风险。红鲫属于鲤科鲫属，它具有抗逆性强、肉质鲜嫩等优点，但其生长速度比不上大多数鲫鱼。研究人员通过以红鲫作为亲本，成功创制了湘云鲫2号、合方鲫和合方鲫2号等国家级水产新品种和异源四倍体鲫鲤、同源四倍体鲫等种质，为我国水产种业提供了优质种质资源。因此，实现红鲫的生长等重要经济性状的改良将对鱼类遗传育种研究具有重要的意义。

2、crispr/cas9基因编辑技术是以生物的特定功能基因为研究对象，由sgrna引导对这些特定基因的编码序列定位，由cas9核酸酶进行靶向编辑的技术，其操作简便快速，成本低，已广泛用于基因的敲除、插入、替换等定点人工修饰，实现分子改良。自2013本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种通过敲除mstnb基因获得快速生长红鲫纯合品系的方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述红鲫mstnb基因的gRNA制备方法为：针对红鲫mstnb基因的基因敲除靶点设计gRNA特异F引物，以gRNA质粒为模板用所述特异F引物和通用R引物进行扩增并回收片段得到gRNA DNA模板，将所述gRNA DNA模板体外转录纯化后获得mstnb基因的gRNA。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述基因敲除靶点的核苷酸序列为GGATCGTAAGAGCGCAGCTG；

4.根据权利要求3所述的方...

【技术特征摘要】

1.一种通过敲除mstnb基因获得快速生长红鲫纯合品系的方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述红鲫mstnb基因的grna制备方法为：针对红鲫mstnb基因的基因敲除靶点设计grna特异f引物，以grna质粒为模板用所述特异f引物和通用r引物进行扩增并回收片段得到grna dna模板，将所述grna dna模板体外转录纯化后获得mstnb基因的grna。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述基因敲除靶点的核苷酸序列为ggatcgtaagagcgcagctg；

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，制备所述grna dna模板时采用的扩增体系为：20μm的特异f引物和通用r引物各2.6μl、10×buffer 5.0μl、dntp 5.0μl、extaq0.4μl、dr274质粒模板2μl、无核酸酶水补齐至50μl，扩增程序为：95℃变性5min，之后95℃30s、64℃20s、72℃20s共30个循环，72℃8min；

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘庆峰，刘少军，张轩翊，李贝，舒玉琴，胡方舟，文明，陶敏，张纯，覃钦博，王静，
申请(专利权)人：湖南师范大学，
类型：发明
国别省市：