一种法罗培南杂质的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种法罗培南杂质的检测方法，它包括如下步骤：高效液相色谱仪的固定相为100%多孔渗水石墨，流动相10mmol/l甲酸铵水溶液‑甲醇=45:55～55:45，柱温为30℃～40℃，检测波长为218nm～222nm。吸取对照品溶液、供试品溶液、空白溶液各20µl注入液相色谱仪，记录色谱图。计算对照品溶液浓度的值为X与相应峰面积值为Y，进行线性拟合，得出线性回归方程，中间体C的线性范围为0.38~5.25μg/ml，法罗培南的线性范围为0.38~28.92μg/ml。本发明专利技术应用高效液相色谱法分离法罗培南中前一步的中间体C，分离效率高、分析速度快、检测灵敏度高，通过检测法罗培南中中间体C的含量，能够更好控制法罗培南的质量。

【技术实现步骤摘要】
一种法罗培南杂质的检测方法
本专利技术涉及高效液相色谱
，具体涉及一种高效液相色谱法测定法罗培南所含杂质中间体C的方法。
技术介绍
法罗培南钠是由日本Suntory公司开发，于1997年上市的一种青霉烯类抗生素，具有抗菌谱广、抗菌活性强。对β-内酰胺酶稳定，对超广谱β-内酰胺酶产生菌、枸橼酸杆菌、肠球菌有良好作用的特点，罗培南钠由法罗培南经过碳酸钠、碳酸氢钠或2-乙基己酸钠处理得到。因此法罗培南是法罗培南钠生产的关键中间体，法罗培南生由中间体C经过加氢反应制得，由于加氢反应不彻底时法罗培南中会有部分中间体C残留，不仅影响收率，还会对成品法罗培南钠的质量造成影响。为此通过合理的手段检测并控制法罗培南中中间体C的量具有重要的现实意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是建立一种法罗培南杂质的检测方法，可以更好的控制法罗培南的质量，更好的对法罗培南中可能存在的中间体C进行检测。本专利技术的技术方案是：高效液相色谱测定法罗培南中中间体C的方法，它包括如下步骤：系统测试液的制备：称取中间体C对照品置量瓶中，中间体C分子结构图见图1，另称取法罗培南对照品适量，法罗培南分子结构图见图2，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含中间体C3.75μg、法罗培南25μg的混合溶液溶液，作为系统测试液；对照品溶液制备：精密称取法罗培南对照品适量，精密称定，用流动相溶解并用稀释液稀释制成每1mL约含25µg的溶液即得；供试品溶液制备：精密称取本品适量置容量瓶中加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含法罗培南2.5mg的溶液，作为供试品溶液；空白溶液的制备：流动相；测定：高效液相色谱仪的固定相为100%多孔渗水石墨，流动相为0.1mol/l甲酸铵缓冲液，10mmol/l甲酸铵水溶液-甲醇=50:50，柱温为35℃，检测波长为220nm。吸取对照品溶液、供试品溶液、空白溶液各20µl注入液相色谱仪，记录色谱图，读取数据；计算对照品溶液浓度的值与相应峰面积值的线性回归方程，相关系数而应不小于0.99，对照品溶液峰形对称，理论塔板数以法罗培南2000以上；每克法罗培南中间体中，中间体C总量不得超过50mg。附图说明：图1为中间体C分子结构式；图2为法罗培南分子结构式；图3为法罗培南系统测试液色谱图；图4中间体C峰面积与浓度曲线关系图；图5法罗培南峰面积与浓度曲线关系图。以下通过实施例形式再对本专利技术的内容做进一步详细说明，但不应就此理解为本专利技术上述主题范围内仅限于以下实施例。在不脱离本专利技术上述技术前提下，根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的相应替换或变更的修改，均包括在本专利技术内。实施例1色谱柱及流动相的确定系统测试液的制备：称取中间体C对照品置量瓶中，中间体C分子结构图见图，另称取法罗培南对照品适量，法罗培南分子结构图见图2，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含中间体C3.75μg、法罗培南25μg的混合溶液溶液，作为系统测试液；色谱柱：WatersXterraRP，150mm×4.6mm×3.50µm；波长：220nm；流速：1.0ml/min；进样量：20μl；柱温：35℃；流动相：5mg/l乙酸铵缓冲液：乙腈=90:10；取系统测试液注入液相色谱仪，结果显示色谱图中出现一个色谱峰。结论：该方法保留时间法罗培南和中间体C无法分离实施例2色谱柱及流动相的确定系统测试液的制备，同实施例1。色谱柱：WatersXterraRP，150mm×4.6mm×3.50µm；波长：220nm；流速：1.0ml/min；进样量：20μl；柱温：35℃；流动相：0.1mol/l甲酸铵缓冲液5mg/l乙酸铵缓冲液：乙腈=50:50；取系统测试液注入液相色谱仪，结果显示色谱图中出现一个色谱峰，保留时间为3.53min。结论：法罗培南保留时间太短，理论板数达不到要求。实施例3色谱柱及流动相的确定系统测试液的制备，同实施例1。色谱柱：ThermoHypercarb，150mm×4.6mm×3.00µm,100%多孔渗水石墨填料；波长：220nm；流速：1.0ml/min；进样量：20μl；柱温：35℃；流动相：0.1mol/l甲酸铵缓冲液，10mmol/l甲酸铵水溶液-甲醇=80:20；取系统测试液注入液相色谱仪，结果显示色谱图中出现两个色谱峰，法罗培南保留时间为2.64min，中间体C保留时间为2.51min。结论：法罗培南和中间体C不能完全分离，分离度达不到要求。实验例4系统适用性实验系统测试液的制备，同实施例1色谱柱：ThermoHypercarb，150mm×4.6mm×3.00µm,100%多孔渗水石墨填料；波长：220nm；流速：1.0ml/min；进样量：20μl；柱温：35℃；流动相：0.1mol/l甲酸铵缓冲液，10mmol/l甲酸铵水溶液-甲醇=50:50。取系统测试液注入液相色谱仪，结果显示色谱图中出现两个色谱峰，法罗培南保留时间为4.72min，中间体C保留时间为3.79min，结果见图3。结论：法罗培南和中间体C能完全分离，分离度达符合要求。实验例5线性和范围色谱柱：ThermoHypercarb，150mm×4.6mm×3.00µm,100%多孔渗水石墨填料；波长：220nm；流速：1.0ml/min；进样量：20μl；柱温：35℃；流动相：0.1mol/l甲酸铵缓冲液，10mmol/l甲酸铵水溶液-甲醇=50:50；取不同浓度的中间体C和法罗培南溶液注入色谱仪结果见图4、5和表1、2。表1中间体C峰面积与浓度曲线关系表浓度ug/ml平均峰面积峰面积RSD5.3612240.47%4.7520410.86%3.8426621.86%1.9216352.38%0.9124052.95%0.445900.03%表2法罗培南峰面积与浓度曲线关系表浓度ug/ml平均峰面积峰面积RSD28.93671560.78%24.13036460.22%9.61231232.01%5.6649201.28%4.7569170.89%3.8456031.99%1.9225962.13%0.9132801.45%0.3856570.42%结论：中间体C在0.4~5.3μg/ml范围内y=13147.8x+885.5R=0.999，法罗培南0.4~28.92μg/ml范围内y=12692.8x-1252.0R=0.9998，各峰峰面积与浓度呈良好线性关系。实验例6检测限与定量限色谱柱：ThermoHypercarb，150mm×4.6mm×3.00µm,100%多孔渗水石墨填料；波长：220nm；流速：1.0ml/min；进样量：20μl；柱温：35℃；流动相：0.1mol/l甲酸铵缓冲液，10mmol/l甲酸铵水溶液-甲醇=50:50；检测限和定量限是根据通过信噪比法来确定的，测出的信号与空白处的信号进行比较，算出能被可靠的检测出的最低浓度或百分比。当S/N≈3时为检测限，当S/N≈10时为定量限。结论：中间体C检测限为0.0814µg/ml，法罗培南检测限为0.2088µg/ml。实验例7精密度试验色谱柱：ThermoHypercarb，150mm×4.6mm×3.00µm,100%多孔渗水石墨填料；波长：220nm；流速：1.0ml/min；进样量：20本文档来自技高网...

【技术保护点】
高效液相色谱测定法罗培南中中间体C的方法，其特征在于，它包括如下步骤：系统测试液的制备：称取中间体C对照品、置量瓶中，另称取法罗培南对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含中间体C 3.75μg、法罗培南25μg的混合溶液溶液，作为系统测试液；对照品溶液制备：精密称取法罗培南对照品适量，精密称定，用流动相溶解并用稀释液稀释制成每1mL约含25µg的溶液即得；供试品溶液制备：精密称取本品适量置容量瓶中加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含法罗培南2.5mg的溶液，作为供试品溶液；空白溶液的制备：流动相；测定：高效液相色谱仪的固定相为100%多孔渗水石墨，流动相为0.1mol/l甲酸铵缓冲液，10mmol/l甲酸铵水溶液‑甲醇=45:55～55:45，柱温为30℃～40℃，检测波长为218nm～222nm；吸取对照品溶液、供试品溶液、空白溶液各20µl注入液相色谱仪，记录色谱图，读取数据；计算对照品溶液浓度的值与相应峰面积值的线性回归方程，相关系数而应不小于0.99，对照品溶液峰形对称，理论塔板数以法罗培南2000以上； 每克法罗培南中间体中，中间体C总量不得超过50mg。

【技术特征摘要】
1.高效液相色谱测定法罗培南中中间体C的方法，其特征在于，它包括如下步骤：系统测试液的制备：称取中间体C对照品、置量瓶中，另称取法罗培南对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含中间体C3.75μg、法罗培南25μg的混合溶液溶液，作为系统测试液；对照品溶液制备：精密称取法罗培南对照品适量，精密称定，用流动相溶解并用稀释液稀释制成每1mL约含25µg的溶液即得；供试品溶液制备：精密称取本品适量置容量瓶中加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含法罗培南2.5mg的溶液，作为供试品溶液；空白溶液的制备：流动相；测定：高效液相色谱仪的固定相为100%多孔渗水石墨，流动相为0.1mol/l甲酸铵缓冲液，10mmol/l甲酸铵水溶液-甲醇=45:55～55:45，柱温为30℃～40℃，检测波长为218nm～222nm；吸取对照品溶液、供试品溶液、空白溶液各20µl注入液相色谱仪，记录色谱图，读取数据；计算对照品溶液浓度的值与相应峰面积值的线性回归方程，相关系数而应不小于0.99，对照品溶液峰形对称，理论塔板数以法罗培南2000以上；每克法罗培南中间体中，中间体C总量不得超过50mg。2.权利要求1所述的高效液相色谱测定法罗培南中中间体C的方法，其特征在于，它包括如下步骤：系统测试液的制备：称取中间体C对照品、置量瓶中，另称取法罗培南对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含中间体C3.75μg、法罗培南25μg的混合溶液溶液，作为系统测试液；对照品溶液制备：精密称取法罗培南对照品适量，精密称定，用流动相溶解并用稀释液稀释制成每1mL约含25µg的溶液即得；供试品溶液制备：精密称取本品适量置容量瓶中加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含法罗培南2.5mg的溶液，作为供试品溶液；空白溶液的制备：流动相；测定：高效液相色谱仪的固定相为100%多孔渗水石墨，流动相为0.1mol/l甲酸铵缓冲液，10mmol/l甲酸铵水溶液-甲醇=50:50，柱温为35℃，检测波长为220nm；吸取对照品溶液、供试品溶液、空白溶液各20µl注入液相色谱仪，记录色谱图，读取数据；计算对照品溶液浓度的值与相应峰面积值的线性回归方程，相关系数而应不小于0.99，对照品溶液峰形对称，理论塔板数以法罗培南2000以上；每克法罗培南中间体中，中间体C总量不得超过5...

【专利技术属性】
技术研发人员：王崇益，王玲，陈晨，嵇利娟，汪玥言，
申请(专利权)人：江苏正大清江制药有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32