诊断共孵育测定法制造技术

本发明专利技术涉及一种诊断疾病的方法，所述方法包括使供体组织切片与能够从所述供体组织切片提取抗体的液体接触，并使所述液体与包含抗原的受体材料接触，然后检测包括所述抗体和所述抗原的复合物，以及包含供体组织切片和包含抗原的受体材料的诊断上有用的载体。

【技术实现步骤摘要】
诊断共孵育测定法本专利技术涉及一种诊断疾病的方法，所述方法包括使供体组织切片与能够从所述供体组织切片提取抗体的液体接触，并使所述液体与包含抗原的受体材料接触，然后检测包括所述抗体和所述抗原的复合物，以及包含供体组织切片和包含抗原的受体材料的诊断上有用的载体。在大多数人类中，默认地存在所有身体成分的耐受性，即它们不会触发针对其自身组织抗原的抗体的产生。相比之下，发生称为自身免疫疾病的病症，其中宿主对他自己的组织有明显的免疫反应，常常导致组织损伤。无论怎么强调早期可靠诊断自身免疫疾病的重要性都不过分。许多自身免疫疾病不能治愈，但可以使用可用于显著改善其症状的治疗，通常使患者能够正常生活。诊断越早，利用例如免疫抑制药物的施用或严格的无免疫原性抗原饮食来给患者提供全部益处的一系列疗法的机会越多。自身免疫疾病的诊断通常基于在包含抗体的液体样品中检测自身抗体的方法的结果(output)。最常使用从患者常规获得的血清。在其他情况下，使用如脑脊髓液(CSF)、特别是用于检测与神经症状相关的自身抗体的其它液体。乳糜泻(腹部疾病)(coeliacdisease，CD)是自身免疫疾病的一个特例。它是由麸质(gluten)引发的，其在遗传易感受试者中激活针对CD自身抗原(即组织转谷氨酰胺酶(TTG))的免疫反应。在发现针对麦醇溶蛋白和/或TTG的抗体的存在与CD相关联之后，可以确定CD不是罕见的，而是在全世界人群内预期患病率高于1％的常见病症。存在与麸质敏感性相关的一系列疾病，包括以摄取含麸质食物相关肠症状为特征的非腹腔麸质敏感性(NonCoeliacGlutensensitivity，NCGS)，而在许多患者的情况下，仍然难以彻底区分它们。需要具有重要经验的病理学家来检查由活检样品制成的组织切片作为可靠诊断的基础。在许多情况下，这样的检查是不确定的，因为不能观察到特征性特征。然而，病理学家可能不具有由他处理的来自患者的血清样品以补充组织学分析，或者包含外周血的血清样品中抗体的浓度可能不足。在这种情况下，很可能会误诊患者。假阴性结果可能导致患者被拒绝适当治疗，导致继发性疾病的风险增加，其中包括例如肠淋巴瘤的癌症，以及生活质量差。因此，本专利技术内在的一个问题是提供一种诊断自身免疫疾病的方法，该方法可用于证实患病组织的不确定的组织学检查。另一个问题是提供具有增加的灵敏度并降低假阴性结果的可能性的改进的测试。本专利技术内在的至少一个问题在于提供一种可以在不存在血清样品的情况下进行的测定，并允许病理学家基于不确定的组织学检查证实诊断。本专利技术内在的问题由所附独立和从属权利要求的主题来解决。在第一方面，本专利技术内在的问题通过诊断疾病的方法来解决，该方法包括使供体组织切片与能够从所述供体组织切片提取抗体的液体接触，并使所述液体与包含抗原(任选两种或更多种抗原)的受体材料接触，随后检测包含所述抗体和所述抗原的复合物。在优选实施方案中，将所述供体组织切片和所述包含抗原的受体材料在所述液体中共孵育。在第二方面，该问题通过包括供体组织切片和包含抗原的受体材料的诊断上有用的载体来解决，其中所述载体被构造成使得所述供体组织切片和所述包含抗原的受体材料可以在能够从所述供体组织切片提取抗体并将所述抗体转运到所述受体材料的液体中共孵育。在优选实施方案中，所述供体组织切片和所述包含抗原的受体材料包被于所述载体的表面上，并且优选在空间上是分开的。在优选实施方案中，供体组织切片和包含抗原的受体材料在空间上分开的生物芯片上。在优选实施方案中，所述载体被构造成使得能够从所述供体组织切片提取抗体的液体可以置于载体的表面上，使得可以从所述供体组织切片中提取抗体并且抗体通过所述液体扩散到所述包含抗原的受体材料。在优选实施方案中，所述载体包含具有用所述供体组织切片包被的表面的第一部分和具有用所述受体材料包被的表面的第二部分，其中所述第一部分和第二部分是分开的，并且所述载体被构造成使得所述第一部分和第二部分可以接触，优选组装，使得所述第一部分或所述第二部分的表面面朝下地位于所述第一部分和所述第二部分中另一个的表面上，使得一滴液体可以置于第一部分和第二部分的表面之间，以允许任何来自所述供体组织切片的抗体扩散到所述受体材料。在优选实施方案中，已经从待诊断的患者获得供体组织切片。在优选实施方案中，包含抗原的受体材料是包含优选天然多肽形式的抗原的组织样品，产生所述抗原的细胞或分离的多肽。在优选实施方案中，供体组织切片是冷冻组织切片。在优选实施方案中，疾病是胃肠疾病，优选炎性或自身免疫性胃肠疾病，更优选乳糜泻，供体组织切片是胃肠道组织，优选十二指肠组织，抗原是组织转谷氨酰胺酶或脱酰氨麦醇溶蛋白或其变体，优选脱酰氨麦醇溶蛋白或其变体的寡聚物。在一个优选实施方案中，该疾病是天疱疮和/或类天疱疮，优选大疱性类天疱疮，供体组织切片为患病的皮肤组织，受体材料包含来自Dsg1、Dsg3、NC16A、BP180、BP230、LAMA3(SEQIDNO14)，层粘连蛋白332的一种或多种抗原，其优选是包含包括LAMA3(SEQIDNO14)、LAMB3(SEQIDNO15)和LAMC2(SEQIDNO16)和β4整联蛋白(SEQIDNO17)和VII型胶原及其变体的多肽的组合物，任选以组织的形式，优选选自灵长类动物食管、人盐裂皮肤(humansaltsplitskin)和大鼠膀胱。在优选实施方案中，所述疾病是肺出血-肾炎综合征或SLE，供体组织切片是患病的肾组织，并且包含抗原的受体材料是或来源于选自抗肾小球基底膜、dsDNS、人上皮细胞(HEp-2)、pLA2R和THSD7A及其变体的材料。在优选实施方案中，该疾病是克罗恩病，供体组织切片是患病的肠组织，并且包含抗原的受体材料选自健康胰腺组织、CUZD1和GP2及其变体，后两者优选为表达CUZD1和/或GP2或其变体的细胞的形式。在优选实施方案中，该疾病是格雷夫斯病和/或桥本病，供体组织切片来源于甲状腺，并且包含抗原的受体材料是或来源于健康的甲状腺组织。在优选实施方案中，疾病是肌炎，供体组织切片是肌肉或皮肤，优选肌肉组织，并且包含抗原的受体材料是MUP-44或其变体。本专利技术基于本专利技术人出乎意料的发现：可以在组织切片中检测自身抗体。例如，这适用于与CD相关的抗体。不希望受任何理论约束，本专利技术人假设自身抗体积累在病变组织和器官中，并且其转移到患者的血液是不完全的，不足以用于基于血清学的可靠分析。根据本专利技术，提供供体组织切片。这是从患有或怀疑患有待诊断的疾病的患者获得的一块组织。在优选实施方案中，将供体组织切片冷冻，优选浸入液氮或融化异戊烷。组织切片的厚度优选为1-100μm，优选为4-50μm。供体组织切片优选不用任何试剂处理或暴露于基本上改变供体组织切片中存在的抗体的条件。根据本专利技术，供体组织切片与能够从所述供体组织切片提取抗体的液体接触。这是任何液体，其在暴露于供体组织切片时可能接收供体组织切片中存在的抗体，保存其化学组成、结构或结合性质，例如特异性结合抗原的能力，并允许其递送到包含抗原的受体材料。优选地，液体是包含生理缓冲液的水性液体，更优选在pH5至9，更优选6至8，最优选6.2至7.8。在最优选实施方案中，液体为PBSpH7.4。在优选实施方本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种诊断疾病的方法，包括：使供体组织切片与能够从所述供体组织切片提取抗体的液体接触，并使所述液体与包含抗原的受体材料接触，随后检测包含所述抗体和所述抗原的复合物。

【技术特征摘要】
2016.06.21 EP 16001395.91.一种诊断疾病的方法，包括：使供体组织切片与能够从所述供体组织切片提取抗体的液体接触，并使所述液体与包含抗原的受体材料接触，随后检测包含所述抗体和所述抗原的复合物。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述供体组织切片和所述包含抗原的受体材料在所述液体中共孵育。3.一种诊断上有用的载体，其包含供体组织切片和包含抗原的受体材料，其中所述载体被构造成使得所述供体组织切片和所述包含抗原的受体材料可以在能够从所述供体组织切片提取抗体并将所述抗体转运到所述受体材料的液体中共孵育。4.根据权利要求3所述的载体，其中所述供体组织切片和所述包含抗原的受体材料包被于所述载体的表面上，并且优选在空间上是分开的。5.根据权利要求4所述的载体，其中所述载体包含具有用所述供体组织切片包被的表面的第一部分和具有用所述受体材料包被的表面的第二部分，其中所述第一部分和第二部分是分开的，并且所述载体被构造成使得所述第一部分和第二部分可以接触，优选组装，使得所述第一部分或所述第二部分的表面面朝下地位于所述第一部分和所述第二部分中另一个的表面上，使得一滴液体可以置于第一部分和第二部分的表面之间，以允许任何来自所述供体组织切片的抗体扩散到所述受体材料。6.根据权利要求4至5中任一项所述的载体，其中所述供体组织切片和所述包含抗原的受体材料在空间上分开的生物芯片上。7.根据权利要求3至6中任一项所述的载体，其中能够从所述供体组织切片提取抗体的液体在所述载体的表面上，使得可以从供体组织切片提取抗体并且抗体通过所述液体扩散到所述包含抗原的受体材料。8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法或载体，其中已经从待诊断的患者获得所述供体组织切片。9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法或载体，其中所述包含抗原的受体...

【专利技术属性】
技术研发人员：W·斯托克尔，B·特格，A·杨克，
申请(专利权)人：欧蒙医学诊断技术有限公司，
类型：发明
国别省市：德国,DE