本发明专利技术的目的是提供一种灵敏、可靠的方法，能快速检测出盐酸溴己新原料中细菌内毒素的含量。方法具体操作如下：取盐酸溴己新粉末，用DMSO(二甲基亚砜)溶解，进行预干扰实验，找出最大稀释倍数；按找出的最大稀释倍数1600倍，制备盐酸溴己新供试液，与两个不同厂家的灵敏度为0.25EU／ml的鲎试剂进行干扰实验，最终确认是否存在干扰因素的影响，确认细菌内毒素的限度值；按照无干扰时的最大有效稀释倍数稀释盐酸溴己新溶液，再进行细菌内毒素检查。
Method for detecting bacterial endotoxin content of hydrochloride bromide raw material
The aim of the invention is to provide a sensitive and reliable method for rapidly detecting the content of bacterial endotoxin in a new raw material of the hydrochloric acid bromide. Specific methods of operation are as follows: the bromhexine hydrochloride powder, with DMSO (two DMSO) dissolved, pre interference test, find the maximum dilution; according to the maximum dilution of the 1600 times, the preparation of bromhexine hydrochloride for the test solution, and the sensitivity of two different manufacturers for 0.25EU / ml tal the interference experiment, the final confirmation of the presence of interfering factors, confirm the bacterial endotoxin limit value; in accordance with the maximum valid dilution had no interference when the dilution of bromhexine hydrochloride solution, then the bacterial endotoxin test.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物检验领域，涉及一种药物原料盐酸溴己新细菌内毒素检测方法，也就是检测盐酸溴己新原料中细菌内毒素含量的方法。
技术介绍
盐酸溴己新是一种粘痰溶解剂，可直接作用于支气管腺体，促使粘液分泌细胞的溶酶体释出，使痰中的粘多糖纤维分化裂解，使痰液稀释，易于咳出。临床上主要用于急性及慢性支气管炎、哮喘、支气管扩张、肺气肿，尤适用于白色粘痰咳出困难者及因痰液广泛阻塞小支气管引起的危重急症等。而细菌内毒素是一种能引起人体发热、白细胞减少等一系列生理反应的物质。盐酸溴己新作为注射剂药物的原料时，应进行细菌内毒素含量的检查控制。目前国内外没有针对盐酸溴己新原料进行细菌内毒素检查的文献报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种灵敏、可靠的方法，能快速检测出盐酸溴己新原料中细菌内毒素的含量。本专利技术的盐酸溴己新原料的细菌内毒素检查方法是：取盐酸溴己新，用DMSO(二甲基亚砜)溶解、制备成浓度为10mg／ml的盐酸溴己新溶液，再用细菌内毒素检查用水分别稀释至200、400、800、1600和3200倍，将此系列浓度溶液记为A。同时在上述试验液中加入细菌内毒素标准溶液，使每一浓度的实验液中均含有2λ(λ为所用鲎试剂的标示灵敏度)浓度的细菌内毒素，记此系列溶液为B。取灵敏度为0.25EU／ml的两个不同厂家的鲎试剂，分别与上述A和B进行反应，每一浓度重复两管，并设阳性和阴性对照，进行预干扰试验，找出最大稀释倍数。再按找出的最大稀释倍数，制备盐酸溴己新供试液。按《中华人民共和国药典》二部附录中的“细菌内毒素检查方法”，与两个不同厂家的灵敏度为0.25EU／ml的鲎试剂进行干扰实验，最终确认是否存在干扰因素的影响，确认细菌内毒素的限度值；将盐酸溴己新溶液用DMSO(二甲基亚砜)稀释1600倍，作为供试品溶液，同时取上述供试品溶液，加入细菌内毒素标准溶液，使其含有2λ(λ为所用鲎试剂的标示灵敏度)浓度的细菌内毒素，作为阳性对照，分别加入灵敏度为0.25EU／ml的鲎试剂，按照《中华人民共和国药典》二部附录细菌内毒素检查法规定，进行盐酸溴己新原料细菌内毒素检查，根据鲎试剂的反应结果，判断内毒素是否符合规定。本专利技术有如下优点：1、可以快速、准确地检测出盐酸溴己新原料中的细菌内毒素的含量。2、通过预干扰试验确定最大稀释倍数，再进行干扰试验可以降低检验成本。具体实施方式(1)、限值的确定公式：L=K／M根据盐酸溴己新说明书：“肌肉注射或静脉注射。一次4mg，一日8～12mg。静脉注射时用0.9％氯化钠注射液或5％葡萄糖注射液稀释后使用。”确定人用最大剂量为12mg／h。K：为人每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU/kg／hr表示，注射剂K=5EU／kg／hr。L=K/M=5EU/kg/hr12mg/60kg/hr=25EU/mg]]>考虑到在实际使用时，盐酸溴己新会被溶解到大输液中，而大输液本身也含有内毒素，为保证联合用药的安全，将盐酸溴己新内毒素限值进一步严格，定为10EU／mg。(2)、试剂a、盐酸溴己新原料药中国医学科学院药物研究所提供规格：1g/瓶批号：100401、100402、100403b、鲎试剂湛江安度斯生物有限公司规格：0.1ml批号：1005062灵敏度：0.25EU／ml湛江安度斯生物有限公司规格：0.1ml批号：0810222灵敏度：0.06EU／ml湛江博康海洋生物有限公司规格：0.1ml批号：1004131灵敏度：0.25EU／mlc、细菌内毒素国家标准品中国药品生物制品检定所规格：1ml批号：150600-200707效价：10000EU／支d、细菌内毒素检查用水中国药品生物制品检定所规格：10ml批号：2010-1(3)、鲎试剂灵敏度复核实验按照《中华人民共和国药典》二部附录细菌内毒素检查法规定，进行鲎试剂的标示灵敏度复核，结果见下表所示。鲎试剂灵敏度复核3批鲎试剂经用细菌内毒素国家标准品检查λc与λ一致，结果均符合规定。(4)、干扰实验预实验a、盐酸溴己新有效稀释倍数(MVD)的计算公式MVD=L×C／λ其中L为盐酸溴己新的细菌内毒素限值10EU／mg，C为盐酸溴己新配置成溶液的浓度，盐酸溴己新原料不溶于水，使用DMSO溶解、制备成10mg/m1，λ为鲎试剂标示灵敏度，目前市售鲎试剂灵敏度λ通常在0.5～0.03EU／ml则盐酸溴己新对应最大有效稀释倍数为：MVD0.5=10EU／mg×10mg／ml÷0.5EU／ml=200倍MVD0.25=10EU／mg×10mg／ml÷0.25EU／ml=400倍MVD0.125=10EU／mg×10mg／ml÷0.125EU／ml=800倍MVD0.06=10EU／mg×10mg／ml÷0.06EU／ml＝1600倍MVD0.03=10EU／mg×10mg／ml÷0.03EU／ml=3200倍。b、实验操作取盐酸溴己新，用DMSO溶解、制备成浓度为10mg／ml的盐酸溴己新溶液，再用细菌内毒素检查用水分别稀释至200、400、800、1600倍、3200倍，将此系列浓度溶液记为NPC。同时在上述试验液中加入细菌内毒素标准溶液，使每一浓度的实验液中均含有2λ(λ为所用鲎试剂的标示灵敏度)浓度的细菌内毒素，记此系列溶液为PPC。取灵敏度为0.25EU／ml的两个不同厂家的鲎试剂，分别与上述PPC和NPC进行反应，每一浓度重复两管，并设阳性和阴性对照。结果见下表：盐酸溴己新干扰预试验(湛江安度斯生物有限公司lotNo.1005062，λ=0.25EU／ml)盐酸溴己新干扰预试验(湛江博康海洋生物有限公司lotNo.1004131，λ=0.25EU／m1)由以上干扰实验预实验结果可以初步了解：此3批样品对两个厂家的鲎试剂在稀释至灵敏度为0.06EU／ml鲎试剂对应的MVD：1600倍(浓度为0.00625mg/ml)时即无干扰作用。(5)、正式干扰试验为了最终确认是否存在干扰因素的影响，进行以下正式干扰实验。取盐酸溴己新，用DMSO溶解、制备成浓度为10mg/ml的盐酸溴己新溶液，用细菌内毒素检查用水稀释至1600倍，按《中华人民共和国药典》二部附录中的“细菌内毒素检查供试品干扰试验项”，使用灵敏度为0.25EU／ml的鲎试剂进行实验，测定结果见下表：盐酸溴己新干扰试验(湛江安本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测盐酸溴己新原料的细菌内毒素含量的方法，其特征在于先通过预干扰试验找出最大稀释倍数；再按最大稀释倍数制备供试液进行干扰试验，验证确认有无干扰：最大稀释倍数为1600倍；盐酸溴己新内毒素限值为10EU／mg。
【技术特征摘要】
1.一种检测盐酸溴己新原料的细菌内毒素含量的方法，其特征在于先通
过预干扰试验找出最大稀释倍数；再按最大稀释倍数制备供试液进行干扰试
验，验证确认有无干扰：最大稀释倍数为1600倍；盐酸溴己新内毒素限值为
10EU／mg。
2.权利要求1所述的检验方法，其特征在于盐酸溴己新原料用DMSO
(二甲基亚砜)溶解。
3.如权利要求1所述的检验方法，其特征在于盐酸溴己新的浓度为
1～20mg／ml，最佳为10mg／ml。
4.如权利要求1所述的检验方法，采用如下方法操作：
1)鲎试剂灵敏度复核实验，按照《中华人民共和国药典》二部附录细菌
内毒素检查法规定，进行鲎试剂的标示灵敏度复核；
2)预干扰实验：取盐酸溴己新粉末，用DMSO(二甲基亚砜)溶解、
制备成浓度为1～20mg／ml的盐酸溴己新溶...
【专利技术属性】
技术研发人员：张嵩，
申请(专利权)人：张嵩，
类型：发明
国别省市：江西;36
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