一种检测二化螟抗药性的方法技术

本发明专利技术提供了一种检测二化螟抗药性的方法，在人工饲料浸药法的诊断剂量下制备带药人工饲料薄片，快速检测二化螟田间种群对药剂的抗性水平。所述药剂为三唑磷、阿维菌素、氯虫苯甲酰胺和杀虫单；药剂的诊断剂量:阿维菌素为1.502mg/L，杀虫单为38.8334mg/L，三唑磷为20.9033mg/L，氯虫苯甲酰胺为20.2148mg/L。本发明专利技术方法使用简便，可充分反映药剂的毒力和活性，用虫量少，克服了传统生测方法用虫量大，操作繁琐、费时费工等缺点，可用于快速检测二化螟田间种群抗药性水平。

A method for detecting drug resistance of Chilo suppressalis

The invention provides a method for detection of Chilo suppressalis resistance, diagnostic dose drug dipping method in artificial diets prepared with artificial diet drug resistance level slice, rapid detection of insecticides in field populations of Chilo suppressalis. The medicine for three Triazophos, avermectin, chlorantraniliprole and Shachongdan; diagnostic dose: avermectin 1.502mg/L, Shachongdan 38.8334mg/L, 20.9033mg/L three Triazophos, chlorantraniliprole 20.2148mg/L. The method of the invention is easy to use, can fully reflect the toxicity and active agents, with worms less, to overcome the traditional methods for insect large amount of tedious and time-consuming disadvantages, can be used for rapid detection of insecticide resistance in field populations of Chilo suppressalis.

【技术实现步骤摘要】
一种检测二化螟抗药性的方法
本专利技术涉及害虫化学防治领域，具体地说，涉及一种检测二化螟抗药性的方法。
技术介绍
二化螟Chilosuppressalis(Walker)，属鳞翅目螟蛾科，是水稻的重要害虫之一，可为害水稻形成枯鞘、枯心、死孕穗、白穗和虫伤株等症状，对水稻生产造成重大损失。近年来，由于气候、耕作制度和栽培方式的改变，二化螟种群呈迅猛上升势头，尤其在1998年以后，已成为长江流域及江南稻区的首要害虫，严重阻碍了水稻的稳产和高产。长期以来，化学药剂防治是控制二化螟为害的主要措施，但是由于药剂的长期不合理使用，导致二化螟对多种药剂都产生了不同程度的抗性，大量药剂对二化螟的防治效果明显下降。为了及时有效地控制二化螟为害，必须对田间二化螟种群进行抗药性监测，明确抗药性水平，制定科学的用药方案指导生产。害虫抗药性监测是害虫抗药性治理的基础工作，目的是为了明确害虫的抗性水平、抗性分布情况、抗性变化的时空动态以及检测抗性治理措施的效果等。害虫是否产生抗药性以及抗性程度的高低，主要是通过比较田间种群与相对敏感种群的LD50(或LC50)值来判断。而抗药性检测结果是否准确，则与采用的抗药性检测方法和敏感毒力基线密切相关。因此，培育敏感品系，建立准确而又简便、快速的抗药性检测方法和敏感毒力基线是开展害虫抗药性监测的前提。目前，在二化螟的抗药性监测中，不同实验室相继采用点滴法、稻苗浸渍法和人工饲料药膜法。点滴法是FAO推荐的方法。早期的点滴法测定的虫期是6龄幼虫，但是由于6龄幼虫饲养时间长，费时费力，个体间差异大，给选择标准试虫带来较大难度，后来改为4龄幼虫并建立了相应的敏感毒力基线，并以此制定了农业部行业标准NY/T2058-2011。但该法需要精密的点滴工具(例如微量点滴仪)，且仅适用于触杀性药剂，只能反应杀虫剂的触杀毒力，不能体现杀虫剂的胃毒作用，不适于检测胃毒作用为主的药剂的毒力和抗性。稻苗浸渍法可以同时检测胃毒和触杀作用，充分反映杀虫剂的毒力。但是，该法需要预先准备好生长3周左右的水稻苗，药后5-6天检查试验结果，显得费时耗工，比较繁琐，而且在处理3-4天后稻苗即开始变黄枯萎，对试虫的存活不利从而影响试验结果的准确性。人工饲料药膜法也可以同时检测胃毒和触杀作用，可以充分反映杀虫剂的毒力。但该法的主要缺陷是药剂在饲料表面分布不均匀，而且选用初孵幼虫为试虫，在调查试验结果时因虫体太小而难以准确判断试虫的存活情况。因此，有必要建立一套简便、快速、准确且适用性广的二化螟抗药性检测新方法。诊断剂量是指引起99％敏感种群个体死亡的剂量。应用诊断剂量监测害虫田间种群抗药性是联合国粮农组织推荐的方法。该方法认为用诊断剂量处理田间种群后，只有抗性个体才能存活。传统的点滴法、稻苗浸渍法和人工饲料药膜法进行毒力测定，操作繁琐，均要设定若干浓度和重复，以保证结果的可信度。人工饲料浸药法是本研究室专利技术的一种检测二化螟抗药性的新方法，具有操作简便，快速、准确以及可充分反映各种药剂的毒力和活性的优点，但对于浓度和重复问题仍然与传统方法一样，没有改进。但是利用本专利技术的人工饲料浸药法的诊断剂量进行二化螟田间种群抗药性检测，不仅利用了人工饲料浸药法的优点，而且在诊断剂量下，在虫量较少的情况下仍可快速检测二化螟抗药性，解决了传统毒力测定实验步骤繁琐、费时费工以及用虫量大的弊端，提高了效率。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种操作简便，能够充分反映药剂毒力，适用于快速检测二化螟田间种群抗性水平的方法。为了实现本专利技术目的，本专利技术提供了一种检测二化螟抗药性的方法，在人工饲料浸药法的诊断剂量下制作带药的人工饲料，检测二化螟田间种群对药剂的抗性水平，所述药剂为三唑磷、杀虫单、阿维菌素和氯虫苯甲酰胺，各药剂的诊断剂量：阿维菌素为1.502mg/L，杀虫单为38.8334mg/L，三唑磷为20.9033mg/L，氯虫苯甲酰胺为20.2148mg/L。其中各药剂的诊断剂量是通过不同浓度的药剂采用人工饲料浸药法对室内饲养的二化螟敏感种群进行毒力测定，计算LC99作为药剂的诊断剂量。进一步地，药剂的诊断剂量是通过如下步骤确定的：(1)二化螟室内敏感种群：在室内一直在未接触任何药剂的条件下，以人工饲料饲养至40余代，且采用单卵块筛选敏感性筛选了3代次的二化螟种群；(2)采用二甲基甲酰胺溶解和稀释三唑磷、阿维菌素和氯虫苯甲酰胺为5-7个不同的浓度作为毒力测定浓度；采用蒸馏水溶解和稀释杀虫单为5-7个不同的浓度作为毒力测定浓度；(3)人工饲料制备：①A相的制备：在1000ml水中加入135克麦胚粉、120克蔗糖、45克纤维素、155克酪蛋白和20克酵母粉，搅拌均匀后置于自动蒸汽灭菌器中124℃灭菌30分钟；将180克琼脂放入2000毫升水中，于微波炉中煮熔为止，将煮熔的琼脂溶液加入至上述灭菌后的饲料中并搅拌均匀；②B相的制备：把15克对羟基苯甲酸丙酯钠、15克山梨酸钾、2.5克氯霉素、4克韦氏盐、30克加强维生素混合液、4克氯化胆碱、7毫升40％甲醛、10毫升菜子油和5克胆固醇放入含1000毫升灭菌水的烧杯中，在磁力搅拌器上搅拌溶解20分钟；③待A相的温度下降至60℃时加入B相并搅拌均匀，然后分装于无菌铝盒中，置于4℃冰箱中保存备用；(4)带药人工饲料制备：把步骤(3)制备的人工饲料切成长度1.5cm×宽度1.5cm×厚度1.2mm的薄片，将薄片挑入步骤2制备的不同药液中浸渍10s后捞出，置于与水平面呈45度的不锈钢丝网面上晾干30min，吸去多余药液后，将带药的人工饲料薄片挑入到直径3cm×高9cm的平底玻璃管中；(5)毒力测定：将4龄2日龄敏感二化螟幼虫挑入至步骤(4)中的带药人工饲料的玻璃管中，每个浓度处理10头，进行4次生物学重复；(6)结果及诊断剂量：三唑磷、杀虫单和阿维菌素三种药剂均在药剂处理后48h检查各浓度处理的幼虫死亡数，氯虫苯甲酰胺在药剂处理后96h检查各浓度处理的幼虫死亡数；死亡标准：以尖锐镊子轻触虫体，不能正常爬行者视作为死亡个体；以对照死亡率小于10％为有效测定，并用对照死亡率进行校正，对步骤(5)的结果做毒力回归线，并计算LC99得出各个药剂的诊断剂量。本专利技术的有益效果在于：①本专利技术使用的人工饲料，与其他配方中需要活体材料(例如茭白，水稻或小麦)的二化螟人工饲料不同，本配方中所需的材料均可随时在市场上购买获得，确保试验可随时开展。②将人工饲料薄片浸渍在药液中后，药剂便粘附在人工饲料薄片上，由于幼虫在浸药后的人工饲料中爬行和取食，因此，该法可以同时检测药剂的胃毒和触杀活性，可以充分反映杀虫剂的毒力。③人工饲料在2个小时内即可制备完成，药剂处理后2-4天即可获得试验结果，具有快速性的特点。④该测定方法所需设备简单，无需精密仪器；试验操作简便，基层技术人员也易于掌握应用，具有良好的实用性。⑤应用人工饲料浸药法诊断剂量检测二化螟抗药性的方法，克服了传统生测方法用虫量大，操作繁琐、费时费工等缺点，且可以在虫量较少的情况下，快速检测二化螟田间种群抗性水平，明确二化螟的抗性水平，指导田间用药。具体实施方式以下通过具体实施例对本专利技术作进一步说明，并结合相应试验进一步说明本专利技术的有益效果。但本专利技术的内容并不局限于此，不能因此而理解为对本专利技术范围的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测二化螟抗药性的方法，其特征在于：在人工饲料浸药法的诊断剂量下测试二化螟4龄2日龄幼虫的死亡率，判断二化螟田间种群对药剂是否产生抗药性。

【技术特征摘要】
1.一种检测二化螟抗药性的方法，其特征在于：在人工饲料浸药法的诊断剂量下测试二化螟4龄2日龄幼虫的死亡率，判断二化螟田间种群对药剂是否产生抗药性。2.根据权利要求1所述的一种检测二化螟抗药性的方法，其特征在于：所述人工饲料浸药法的诊断剂量通过如下方法得到：(1)二化螟室内敏感种群：在室内一直在未接触任何药剂的条件下，以人工饲料饲养至40余代，且采用单卵块筛选敏感性筛选了3代次的二化螟种群；(2)采用二甲基甲酰胺溶解和稀释三唑磷、阿维菌素和氯虫苯甲酰胺为5-7个不同的浓度作为毒力测定浓度；采用蒸馏水溶解和稀释杀虫单为5-7个不同的浓度作为毒力测定浓度；(3)人工饲料制备：①A相的制备：在1000ml水中加入135克麦胚粉、120克蔗糖、45克纤维素、155克酪蛋白和20克酵母粉，搅拌均匀后置于自动蒸汽灭菌器中124℃灭菌30分钟；将180克琼脂放入2000毫升水中，于微波炉中煮熔为止，将煮熔的琼脂溶液加入至上述灭菌后的饲料中并搅拌均匀；②B相的制备：把15克对羟基苯甲酸丙酯钠、15克山梨酸钾、2.5克氯霉素、4克韦氏盐、30克加强维生素混合液、4克氯化胆碱、7毫升40％甲醛、10毫升菜子油和5克胆固醇放入含1000毫升灭菌水的烧杯中，在磁力搅拌器上搅拌溶解20分钟；③待A...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄水金，孙杨，秦文婧，秦厚国，
申请(专利权)人：江西省农业科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：江西,36