滇橄榄多酚的高浓缩发酵方法及其活性制品技术

本发明专利技术提供一种滇橄榄多酚的高浓缩发酵方法及其活性制品，能够充分利用滇橄榄资源，提供一种高效率、低成本、纯度高且易于推广的滇橄榄多酚活性物质制备方法，并提供一种具有抗疲劳功能的活性制品。

Highly concentrated fermentation method of Yunnan olive polyphenol and its active product

The present invention provides high concentration fermentation method of Yunnan olive polyphenol and active product, can make full use of Yunnan olive resources, provide a kind of efficient, Yunnan olive polyphenol active material preparation method of low cost, high purity and easy popularization, and has a function of anti fatigue activity products.

【技术实现步骤摘要】
滇橄榄多酚的高浓缩发酵方法及其活性制品
本专利技术属于食品加工
，具体涉及一种滇橄榄多酚的高浓缩发酵方法及其活性制品。
技术介绍
滇橄榄又名余甘子，余甘子为大戟科叶下珠属植物余甘子（PhyllanthusemblicaL）的果实，别名油柑子，橄榄子（四川），滇橄榄（云南），青果等。《唐本草》称之为庵摩勒，余甘，《南方草木状》谓“树叶细，似合昏，花黄，食似李，青黄色，核圆作六七棱，食之先苦后甜”，《本草纲目》称之为庵摩落迦果，载有“其味初食苦涩，良久更甘，故曰余甘”。余甘子为一种常用藏药，与诃子，毛诃子三者在藏药中常被称为“三大果”使用频率很高，在《藏药标准》所载的290种藏药成药中，含余甘子的有72种，占总数的25%，卫生部药品标准1995年版藏药标准所载200种成药中，有59种含余甘子，占29%，余甘子被载入《中国药典》1977年版一部。余甘子果实味酸微涩，清热凉血，消食健脾，生津止渴。主治血热血瘀，消化不良，腹胀，咳嗽，喉痛，口干及维生素C缺乏症。在藏药中，余甘子主治培根病、赤巴病、血病、高血压病等。近年研究结果表明，余甘子具有抗炎，抗氧化，抗衰老，保肝等作用。果实(余甘子)：甘、微涩，凉。清热利咽，润肺止咳。用于感冒发热，咽喉痛，咳嗽，口千烦渴，耳痛，维生素丙缺乏症。根(油柑根)：辛，寒。有毒。消食，利水，化痰，杀虫。用于高血压症，胃痛，泄泻，瘰疬。叶(油柑叶)：辛、平。祛湿利尿。用于水肿，皮肤湿疹。树皮(油柑木皮)：甘、酸，寒。杀菌祛腐，止血。用于口疮，疗疮，痔疮，阴囊湿疹，外伤出血。树枝的虫瘿(油柑虫节)：用于胃痛，疝气，遗精，小儿疳积，牙痛。但是目前对滇橄榄的食用方式还只停留于直接食用或榨汁以果汁的方式饮用，食用方式比较单调，滇橄榄中多酚类物质含量高，在滇橄榄加工领域内，大多都是滇橄榄果汁和饮料，基本上都是利用新鲜滇橄榄榨汁后调制而成，从而导致滇橄榄渣大量浪费，利用效率不高。因此，亟待开发一种滇橄榄的高浓缩发酵方法。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供一种滇橄榄多酚的高浓缩发酵方法，能够充分利用滇橄榄资源，提供一种高效率、低成本、纯度高且易于推广的滇橄榄多酚活性物质制备方法，并提供一种能够改善人体免疫功能，提高免疫力的滇橄榄多酚制品。本专利技术的技术方案为：一种滇橄榄多酚的高浓缩发酵方法，包括如下步骤：（1）原料预处理：滇橄榄的新鲜果实为原料，用水清洗干净，放入含0.1％柠檬酸的沸水中热烫4min，冷却，破碎去核，加1∶1的水打浆，果浆经真空干燥，粉碎过40目筛得滇橄榄果肉粉；（2）将步骤（1）制得滇橄榄果肉粉按料液比1:4接种于液体发酵培养基中，在温度22℃的条件下，液体发酵培养3-6天，然后加入裂壶藻发酵蛋白产物以及植物内生菌，使裂壶藻发酵蛋白产物的浓度为0.15-0.85mg/mL，植物内生菌的浓度为1.9×106CFU/ml-4.6×107CFU/ml然后继续培养1-4天，分离，得到滇橄榄果肉粉发酵液；（3）从步骤（2）制得的发酵液中提取滇橄榄多酚；所述步骤（2）中的液体发酵培养基，每升组分如下：3g乳糖、2g糖蜜、2g豆粕粉、1.5g蛋白胨，0.1gMgSO4、0.03gCaCl2、0.1gKH2PO4、0.1gK2HPO4；所述裂壶藻发酵产物的制备方法为：取经过清洗的裂壶藻原料，设定酶解条件为料液比1∶10（m/V）、纤维素酶CellulaseACCF-4740添加量2%、温度55℃、pH4.5、反应时间1.3h，进行酶解，纤维素酶水解结束后，沸水浴灭酶15min，9000r/min离心，收集上清液得到裂壶藻纤维素酶水解液；裂壶藻酶解液灭酶活后，调节pH值至6.2-6.6，高压蒸汽灭菌（121℃，20min），然后接种体积分数1%的MRS培养基活化的戊糖片球菌液到裂壶藻酶解液，37℃恒温培养箱静置，进行发酵；发酵结束后，9000r/min离心，收集上清液得到裂壶藻发酵产物；所述植物内生菌的提取方法为：采用组织块法，取新鲜反枝苋的根、茎、叶分别洗净至没有明显的杂质，，表面消毒处理后，接种至PDA（分离内生真菌）和高氏一号培养基（分离内生放线菌）上培养7-10d，然后分离单菌落；从活化斜面中挑取菌丝块接种于装有100mL发酵培养基的锥形瓶中，置28℃，200r/min摇床振荡培养7d；发酵培养物除去菌体，滤液用等体积乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，55℃减压浓缩蒸干，即为菌液粗提物；离心和过滤得到的菌体，用适量95%乙醇冷凝回流3次，合并乙醇相，减压浓缩蒸干，即为菌体粗提物；置4℃冰箱保存备用。进一步的，步骤（2）中所述的分离是在15000r/min条件下离心分离5-10min。进一步的，所述步骤（3）中提取滇橄榄多酚的方法，步骤如下：取步骤（2）制得的发酵液，加入4倍体积的95%乙醇，混匀后4℃静置5h，12000rpm离心10min，取上清液，冷冻干燥后制得滇橄榄多酚。本专利技术以滇橄榄为原料，采用非常规技术高效、快速的从中提取高品质的多酚类物质。本专利技术充分利用了滇橄榄多酚是水溶性物质，先通过裂壶藻发酵蛋白产物和植物内生菌对果肉成分发酵，充分释放出滇橄榄内部的多酚类活性物质，在利用多酚的水溶性随温度的升高而增大的特性，先用沸水热烫；采用设定浓度的乙醇溶液对多酚与其他多糖类物质之间相互缔合所形成的氢键和疏水键具有较好的阻断作用，而且乙醇对多酚具有较高的溶解性，对蛋白质、多糖等的溶解性较低，减少了提取物中的杂质，同时提高了提取速度和效果。与传统提取技术相比，具有操作简便、提取速度快、效率高、耗能少、纯度高等优点，同时本专利技术加工过程中，还可减少对产品的污染和热敏性物质的分解。一种滇橄榄多酚活性制品，由以下重量份计组分组成：滇橄榄多酚40-50，氯化钾1-3，山梨糖醇5-8，柠檬酸钠2-4，白砂糖10-30，血蛤酶解产物11-15，苍术提取物9-13，碳酸氢钠2-6，猕猴桃香精0.3-0.5，乳酸钙3-5，水50-120。进一步的，所述滇橄榄多酚活性制品，由以下重量份计组分组成：滇橄榄多酚43，氯化钾2，山梨糖醇6，柠檬酸钠3，白砂糖14，血蛤酶解产物13，苍术提取物11，碳酸氢钠4，猕猴桃香精0.4，乳酸钙4，水78。本专利技术中，所述血蛤酶解产物的制备方法为：S1.取取血蛤全脏器，使料水比为1:3(w/v)，用2mol/L盐酸将溶液pH值调至2.5以呈现胃部酸碱环境，以酶与底物浓度比为1300U/g加入胃蛋白酶，在恒温水浴振荡器中保持37℃、110r/min振荡酶解2h，在此条件下获得经胃蛋白酶酶解的初产物；S2.用2mol/L的氢氧化钠将经胃蛋白酶酶解后的酶解液pH值调至8.5，保持37℃酶解温度，复合酶添加量为5200U/g，所述复合酶中胰蛋白酶与胰凝乳蛋白酶的质量比为5:1，所述料水比1:4.5，酶解时间为3.5h，酶解结束后，在100℃沸水浴中灭酶10min；将S2中的酶解产物通过真空冷冻干燥，设置干燥条件为预冷温度-30℃,预冷时间2h，加热温度从-10℃开始18h后缓慢升温,达到25℃,并保持到干燥终点，得到血蛤酶解产物。所述苍术提取物的制备方法为：采用有机溶剂冷浸提取法对苍术分别进行提取。将植物材料放在60℃的恒温鼓风干燥箱中烘干至脆，置于植物粉碎机中粉碎后，过筛(0.本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种滇橄榄多酚的高浓缩发酵方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）原料预处理：滇橄榄的新鲜果实为原料，用水清洗干净，放入含0.1％柠檬酸的沸水中热烫4min，冷却，破碎去核，加1∶1的水打浆，果浆经真空干燥，粉碎过40目筛得滇橄榄果肉粉；（2）将步骤（1）制得滇橄榄果肉粉按料液比1:4接种于液体发酵培养基中，在温度22℃的条件下，液体发酵培养3‑6天，然后加入裂壶藻发酵蛋白产物以及植物内生菌，使裂壶藻发酵蛋白产物的浓度为0.15‑0.85mg/mL，植物内生菌的浓度为1.9×10

【技术特征摘要】
1.一种滇橄榄多酚的高浓缩发酵方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）原料预处理：滇橄榄的新鲜果实为原料，用水清洗干净，放入含0.1％柠檬酸的沸水中热烫4min，冷却，破碎去核，加1∶1的水打浆，果浆经真空干燥，粉碎过40目筛得滇橄榄果肉粉；（2）将步骤（1）制得滇橄榄果肉粉按料液比1:4接种于液体发酵培养基中，在温度22℃的条件下，液体发酵培养3-6天，然后加入裂壶藻发酵蛋白产物以及植物内生菌，使裂壶藻发酵蛋白产物的浓度为0.15-0.85mg/mL，植物内生菌的浓度为1.9×106CFU/ml-4.6×107CFU/ml然后继续培养1-4天，分离，得到滇橄榄果肉粉发酵液；（3）从步骤（2）制得的发酵液中提取滇橄榄多酚；所述步骤（2）中的液体发酵培养基，每升组分如下：3g乳糖、2g糖蜜、2g豆粕粉、1.5g蛋白胨，0.1gMgSO4、0.03gCaCl2、0.1gKH2PO4、0.1gK2HPO4；所述裂壶藻发酵产物的制备方法为：取经过清洗的裂壶藻原料，设定酶解条件为料液比1∶10（m/V）、纤维素酶CellulaseACCF-4740添加量2%、温度55℃、pH4.5、反应时间1.3h，进行酶解，纤维素酶水解结束后，沸水浴灭酶15min，9000r/min离心，收集上清液得到裂壶藻纤维素酶水解液；裂壶藻酶解液灭酶活后，调节pH值至6.2-6.6，高压蒸汽灭菌（121℃，20min），然后接种体积分数1%的MRS培养基活化的戊糖片球菌液到裂壶藻酶解液，37℃恒温培养箱静置，进行发酵；发酵结束后，9000r/min离心，收集上清液得到裂壶藻发酵产物；所述植物内生菌的提...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭佳琛，陈韦廷，
申请(专利权)人：惠州嘉联生物科技开发有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44