本发明专利技术公开了一种人类Y染色体29个STR基因座的荧光标记复合扩增试剂盒，其特点在于：所述的试剂盒包含29对STR基因座的特异性扩增引物，其中STR基因座为:DYS389Ⅰ/Ⅱ、DYS458、DYS19、DYS385a/b、DYS393、DYS391、DYS439、DYS635、DYS392、Y GATA H4、DYS437、DYS438、DYS448、DYS456、DYS390、DYS449、DYS576、DYS481、DYS549、DYS533、DYS570、DYS643、DYS460、DYS627、DYS387a/b、DYS518。本发明专利技术具有累积个体识别率较高、有效减小等位基因越界的风险等优点。
【技术实现步骤摘要】
人类Y染色体29个STR基因座的荧光标记复合扩增试剂盒
本专利技术涉及分子遗传学领域，具体来说是一种人类Y染色体29个STR基因座的荧光标记复合扩增试剂盒。
技术介绍
短串联重复序列基因座(ShortTandemRepeat，STR)遗传标记又称微卫星DNA，其广泛存在于原核及真核生物基因组中，是一类由2-6个核苷酸为重复单元组成的几十至一百多个的核苷酸重复序列,不同数目的核心序列呈中联重复排列,而长度呈现多态性,根据两端保守性序列，设计引物，进行PCR，然后通过聚丙烯酰胺、琼脂糖凝胶电泳或毛细管电泳等检测STR遗传标记的多态性,STR标记与其他遗传标记物相比，STR基因座片段小、容易扩增,更适用于微量和降解检材，各基因座的扩增条件相近而能够复合扩增,因而具有快速、高效、准确、灵敏、信息量大等优点,尤其是在建立DNA数据库方面，与以往RFLP等技术相比，STR复合扩増技术具有极大的优越性。Y染色体STR遗传标记是指存在于人类Y染色体非重组区域的短串联重复序列,目前，以各种形式确认并命名的Y-STR基因座己有220多个，将己发现的Y染色体STR遗传标记与常染色体STR遗传标记相比，大多数Y染色体STR遗传标记具有复杂重复结构，含有两种或两种以上的不同重复单位，群体中个体的核心重复序列或重复次数不同，形成群体遗传多态性,Y染色体STR遗传标记具有男性特有、父系遗传及单倍型造传等三大特征，将其独特性与STR位点分型检测的优越性相结合，可进行法医学个体识别、亲子鉴定及DNA家谱构建等。法医上将突变率高于1%的基因座称为快速突变基因座(RapidlyMutatingY-STR),快速突变基因座具有较高的相关男性区分能力，而且一般具有较高的多态性,但基因座突变率较高会干扰某些情况的Y-STR家系排査。目前法医上利用Y-STR进行建库,主要功能是家系排査,缩小嫌疑人范围，而非认定嫌疑人,在中国,特别是农村，主要是家族聚居的方式,在Y-STR建库的实际操作过程中，往往只对一个大家族中一个或者几个成员进行采样建库,这样在花费较小的情况下就能利用Y-STR快速缩小侦査范围，然后通过比对常染色体STR,对嫌疑人进行认定,由于Y-STR建库釆样的一个或几个人即代表了整个家系的Y-STR信息，这就存在一种不利的情況：嫌疑人属于此家系一员，但与建库对象Y-STR有3个或更多基因座分型不一致，此时容易将嫌疑人所属的真实家系排除,如果建库试剂盒中快速突变基因座较多，那么这种可能性会变得非常高,另一方面，由于Y-STR建库主要目的不是认定嫌疑人，不需要区分相关男性，因而快速突变基因座的优势在这里用处不大,所以，不建议在这种情况下使用快速突变率的基因座,然而，低突变率基因座往往多态性较低，不利于家系之间的区分,因此,需要基因座的数量要多，同时基因座的多态性要高，以保证Y-STR试剂金具有足够高的整体多态性。目前市场上主流的商品化试剂盒通常采用的是五色荧光检测技术,但随着Y-STR建库市场的扩大,现有的Y-STR试剂盒已无法满足目前市场的需求，市场急需一个的个体别率更高，检测基因座数更多的Y-STR试剂盒,是STR荧光检测试剂盒的必然趋勢。市面上主流试剂盒有Yfiler、YfilerPlus、PowerPlexY23、GoldeneyeY26、STRtyper27Y、AGCUDatabaseY24等荧光检测试剂盒,基因座数量分别为17个、27个、23个、26个、27个、24个,法医学常用的Yfiler的基因座数量较少，累积个体识别率较低，Yfiler已被确认在某些特定的人群中具有非常低的多态性,YfilerP1us、STRtyper27Y、powerplexY23、GoldeneyeY26分别含有7个、7个、2个和3个快速突变基因。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决现有技术中的累积个体识别率较低、具有等位基因越界的风险的缺陷，提供一种人类Y染色体29个STR基因座的荧光标记复合扩增试剂盒来解决上述问题。本专利技术公开了一种人类Y染色体29个STR基因座的荧光标记复合扩增试剂盒，其特点在于：所述的试剂盒包含29对STR基因座的特异性扩增引物，其中STR基因座为:DYS389Ⅰ/Ⅱ、DYS458、DYS19、DYS385a/b、DYS393、DYS391、DYS439、DYS635、DYS392、YGATAH4、DYS437、DYS438、DYS448、DYS456、DYS390、DYS449、DYS576、DYS481、DYS549、DYS533、DYS570、DYS643、DYS460、DYS627、DYS387a/b、DYS518。作为优选，在本专利技术的一个实施例中，针对上述29个基因座在其重复序列的侧翼分别设计特异性荧光标记引物。作为优选，所述的26对STR基因座的特异性扩増引物分为五组:第一组，DYS392、DYS389I、DYS449、DYS389II、DYS438、DYS526、DYS570；第二组，DYS391、DYS456、DYS19、DYS448、DYS385a、DYS385b；第三组,DYS481、DYS437、DYS390、DYS460、DYS533、DYS458；第四组,DYS393、YGATAH4、DYS439、DYS635、DYS570、DYS643；第五组,DYS549、DYS627、DYS387a、DYS387b、DYS518；每对引物中至少一条采用荧光染料标记其5'端。作为优选，所述的人类Y染色体29个STR基因座的荧光标记复合扩增试剂盒包括反应混合液、26对STR基因座的特异性扩増引物、29个基因座的等位基因、热启动Taq酶、DNA标准品、sdH20和荧光分子量内标，具体成分为：反应混合液含Tris-HCl、MgCl2、KCl和dNTPMix2mlDatabaseY29Primers含29个基因座荧光引物1ml热启动Taq酶具有热稳定性的DNA聚合酶200ulDNA标准品人类基因组DNA20ulsdH2O超纯水1.85mlDatabaseY29AllelicLadder含29个基因座的等位基因25ulMarkerSIZ-500荧光分子量内标250ul作为优选，所述的反应混合液的组成为：MgCl27.5mM，Tris-HCl125mM，KCl125mM，dNTPs7.5mM，BSA2g/L。作为优选，本专利技术还公开了采用上述人类Y染色体29个STR基因座的荧光标记复合扩增试剂盒在法医鉴定、亲权鉴定和DNA家谱构建中的检测应用，具体检测方法为：将试剂盒内试剂与样品DNA装入PCR扩増管，置于热循环仪上，进行PCR扩增，然后在4℃的条件下进行保温，得到扩增产物，将扩增产物在遗传分析仪上进行荧光检测，再用片段分析软件GeneMapper分析基因测序仪上进行检测，即得到检测结果。作为优选，Y染色体STR基因座的扩増采用聚合酶链式反应，其扩増产物的检测采用毛细管电泳、聚丙烯酰胺或琼脂糖凝胶电泳，聚合酶链式反应的扩增程序为：95℃2min，94℃30S、59℃1min、72℃1min，共29个循环；60℃30min。作为优选，所述的样品DNA包括利用Che1ex法、磁珠提取法或有机抽提法中任意一种方法提取的人基因组D本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种人类Y染色体29个STR基因座的荧光标记复合扩增试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒包含29对STR基因座的特异性扩增引物，其中STR基因座为:DYS389Ⅰ/Ⅱ、DYS458、DYS19、DYS385a/b、DYS393、DYS391、DYS439、DYS635、DYS392、Y GATA H4、DYS437、DYS438、DYS448、DYS456、DYS390、DYS449、DYS576、DYS481、DYS549、DYS533、DYS570、DYS643、DYS460、DYS627、DYS387a/b、DYS518。
【技术特征摘要】
1.一种人类Y染色体29个STR基因座的荧光标记复合扩增试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒包含29对STR基因座的特异性扩增引物，其中STR基因座为:DYS389Ⅰ/Ⅱ、DYS458、DYS19、DYS385a/b、DYS393、DYS391、DYS439、DYS635、DYS392、YGATAH4、DYS437、DYS438、DYS448、DYS456、DYS390、DYS449、DYS576、DYS481、DYS549、DYS533、DYS570、DYS643、DYS460、DYS627、DYS387a/b、DYS518。2.根据权利要求1所述的一种人类Y染色体29个STR基因座的荧光标记复合扩增试剂盒，其特征在于：针对上述29个基因座在其重复序列的侧翼分别设计特异性荧光标记引物。3.根据权利要求1所述的一种人类Y染色体29个STR基因座的荧光标记复合扩增试剂盒，其特征在于：所述的26对STR基因座的特异性扩増引物分为五组:第一组，DYS392、DYS389I、DYS449、DYS389II、DYS438、DYS526、DYS570；第二组，DYS391、DYS456、DYS19、DYS448、DYS385a、DYS385b；第三组,DYS481、DYS437、DYS390、DYS460、DYS533、DYS458；第四组,DYS393、YGATAH4、DYS439、DYS635、DYS570、DYS643；第五组,DYS549、DYS627、DYS387a、DYS387b、DYS518；每对引物中至少一条采用荧光染料标记其5'端。4.根据权利要求1所述的一种人类Y染色体29个STR基因座的荧光标记复合扩增试剂盒，其特征在于：所述的人...
【专利技术属性】
技术研发人员：韦玉军，吴远航，李航，苏军，
申请(专利权)人：安徽安龙基因医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽,34
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