科尔维尔氏菌属嗜冷新菌种及其培养方法与应用技术

科尔维尔氏菌属嗜冷新菌种及其培养方法与应用，涉及海洋微生物。所述科尔维尔菌属(Colwellia sp.)NB097‑1，保藏编号为CCTCC NO：M 2016597。科尔维尔菌属(Colwellia sp.)NB097‑1的培养：将科尔维尔菌属(Colwellia sp.)NB097‑1接种于培养基中，在培养温度4～25℃，pH 6.4～9.7，质量百分浓度为1％～6％的NaCl条件下进行培养。科尔维尔菌属(Colwellia sp.)NB097‑1的16S rRNA基因序列为SEQ所示的碱基序列。可在液体发酵生产低温蛋白酶、酯酶和淀粉酶中应用。

【技术实现步骤摘要】
科尔维尔氏菌属嗜冷新菌种及其培养方法与应用
本专利技术涉及海洋微生物，尤其是涉及科尔维尔氏菌属嗜冷新菌种及其培养方法与应用。
技术介绍
科尔维尔氏菌属由Deming等人在1988年提出建立的，模式菌种为Colwelliapsychrerythraea。目前科尔维尔氏菌属共包括14个种，全部分离自海水环境。菌属特征为杆状或曲杆状细胞，革兰氏阴性，不产生孢子，具运动性，兼性厌氧，大部分生活于低温海水环境。多相分类的概念最初由Colwell于1970年提出，是指利用微生物多种不同的信息，包括表型的、基因型的和系统发育的信息，综合起来研究微生物分类和系统进化的过程。其中DNA同源性分析是确定正确的分类地位的最直接的方法，而DNA-DNA杂交可以在总体水平上研究微生物间的关系，用于种水平上的分类学研究。1987年，国际系统细菌学委员会规定，DNA同源性≥70％为细菌种的界限。低温酶由于其低温催化活性以及热不稳定性在工业应用上具有中温酶无法比拟的优势：可以通过温和的热处理使低温酶失活，快速而经济地终止反应；生产过程在低温或室温下进行，无需加热和冷却，可以降低成本。在食品、医药以及化工等行业较中温酶具有较大的优越性。科尔维尔菌属中大部分微生物都为嗜冷微生物，而且可以产生丰富的低温蛋白酶、淀粉酶和酯酶，在食品、医疗以及化工等行业显示出很好的应用前景。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于提供科尔维尔菌属(Colwelliasp.)NB097-1。本专利技术的目的之二在于提供科尔维尔菌属(Colwelliasp.)NB097-1的培养方法。本专利技术的目的之三在于提供科尔维尔菌属(Colwelliasp.)NB097-1的16SrRNA基因序列。本专利技术的目的之四在于提供科尔维尔菌属(Colwelliasp.)NB097-1在液体发酵生产低温蛋白酶、酯酶和淀粉酶中的应用。所述科尔维尔菌属(Colwelliasp.)NB097-1，已于2016年10月27日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉武汉大学，邮编：430072，保藏中心保藏编号为CCTCCNO：M2016597。所述科尔维尔菌属(Colwelliasp.)NB097-1的培养方法如下：将科尔维尔菌属(Colwelliasp.)NB097-1接种于培养基中，在培养温度4～25℃，pH6.4～9.7，质量百分浓度为1％～6％的NaCl条件下进行培养。所述培养基可采用海洋细菌常规培养基，优选2216E培养基。所述培养温度优选10～13℃，pH优选7.0～9.7，NaCl质量百分浓度优选2％～3％。所述培养可在需氧条件下进行，培养可以是各种微生物的培养方式，可采用液体培养、固体培养、半固体培养、摇床培养或发酵罐发酵。所述培养的接种量为常规，按体积百分比优选1％～2％。所述科尔维尔菌属(Colwelliasp.)NB097-1的16SrRNA基因序列为SEQ所示的碱基序列。所述科尔维尔菌属(Colwelliasp.)NB097-1可在液体发酵生产低温蛋白酶、酯酶和淀粉酶中应用。在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可以任意组合，即得本专利技术各较佳实例。本专利技术所用试剂盒及原料均市售可得。本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供了科尔维尔氏菌属的一个嗜冷新菌种，该菌株的分类地位是Colwelliasp.。该新种的发现和其潜在的利用价值丰富了我们的可利用海洋微生物资源，对以后更好地利用海洋细菌有一定的贡献。本专利技术的科尔维尔氏菌，可以提取低温蛋白酶、酯酶和淀粉酶，在食品、医药以及化工等行业将具有广泛应用。附图说明图1为科尔维尔菌属(Colwelliasp.)NB097-1透射电镜照片。图2为科尔维尔菌属(Colwelliasp.)NB097-1在温度10℃、13℃、16℃下的生长曲线。图3为科尔维尔菌属(Colwelliasp.)NB097-1在温度19℃、22℃、25℃、28℃下的生长曲线。图4为科尔维尔菌属(Colwelliasp.)NB097-116SrRNA基因的系统发育进化树。图5为科尔维尔菌属(Colwelliasp.)NB097-1对干酪素与淀粉的降解。a，科尔维尔菌属(Colwelliasp.)NB097-1降解干酪素产生透明圈；b，科尔维尔菌属(Colwelliasp.)NB097-1降解淀粉，革兰氏碘液染色出现透明圈。具体实施方式下面通过实施例的方式进一步说明本专利技术，但并不因此将本专利技术局限在所述的实例范围之内，下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规条件和方法，或按照商品说明书。实施例1、本专利技术科尔维尔菌属(Colwelliasp.)NB097-1的分离纯化取第六次北极考察所采集海水沉积物样品，利用稀释涂平板法，将其稀释后涂布于2216E固体培养基平板上，置于10℃培养箱培养5～7天，挑取单菌落，然后划线纯化。实施例2、本专利技术科尔维尔菌属(Colwelliasp.)NB097-1的表观特征1、菌落特征取科尔维尔菌属(Colwelliasp.)NB097-1的单菌落，转接到2216E固体培养基上，于10℃恒温培养箱中培养60h，观察其菌落的大小、颜色、边缘、凸起、光滑度、粘性、透明度等特点。结果显示，科尔维尔菌属(Colwelliasp.)NB097-1在2216E固体培养基上形成边缘整齐，光滑，湿润，不透明，白色的菌落，直径约为2mm。2、细胞形态学特征细胞为杆状，具端生鞭毛，革兰氏染色阴性，单生(如图1所示)。实施例3、本专利技术新科尔维尔菌属(Colwelliasp.)NB097-1的生长特性挑取在2216E固体培养基上培养60h的新鲜培养物，接种到2216E液体培养基，13℃摇床培养大约24h，作为种子。1、生长温度将所培养的科尔维尔菌属(Colwelliasp.)NB097-1种子按1％接种量转接至新鲜的2216E液体培养基中并混匀。置于10℃、13℃、16℃、19℃、22℃、25℃、28℃摇床培养，每个温度梯度做三个平行，分别测定生长曲线。4℃下的生长情况通过固体平板上的培养来检测，将科尔维尔菌属(Colwelliasp.)NB097-1接种至2216E固体培养基，置于4℃培养箱中培养，两天后有明显的菌落出现。以上显示科尔维尔菌属(Colwelliasp.)NB097-1的生长温度范围为4～25℃，最适生长温度约为13℃(如图2和3所示)。2、NaCl耐受性将所培养的科尔维尔菌属(Colwelliasp.)NB097-1种子按1％接种量转接NaCl浓度分别为0％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％和8％的2216E培养基，13℃下摇床培养，并分别测定其生长的最大生物量，结果显示科尔维尔菌属(Colwelliasp.)NB097-1可以在NaCl浓度范围为1％～6％的培养基中生长，最适生长NaCl浓度为2％～3％，没有NaCl的情况下检测不到生长。3、生长pH范围将2216E培养基用1MHCl和1MNaOH分别调整pH至3.4、4.4、5.4、6.4、7.0、7.8、8.8、9.8和10.8，并将所培养的NB09701种子按1％接种量接入，13℃下摇床培养，检测其生长的最大生物量，结果显示科尔维尔菌属(Colwelliasp.)NB097-1生长本文档来自技高网...

【技术保护点】
科尔维尔菌属(Colwellia sp.)NB097‑1，已于2016年10月27日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏中心保藏编号为CCTCC NO：M 2016597。

【技术特征摘要】
1.科尔维尔菌属(Colwelliasp.)NB097-1，已于2016年10月27日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏中心保藏编号为CCTCCNO：M2016597。2.如权利要求1所述科尔维尔菌属(Colwelliasp.)NB097-1的培养方法，其特征在于具体步骤如下：将科尔维尔菌属(Colwelliasp.)NB097-1接种于培养基中，在培养温度4～25℃，pH6.4～9.7，质量百分浓度为1％～6％的NaCl条件下进行培养。3.如权利要求2所述科尔维尔菌属(Colwelliasp.)NB097-1的培养方法，其特征在于所述培养基采用海洋细菌常规培养基。4.如权利要求3所述科尔维尔菌属(Colwelliasp.)NB097-1的培养方法，其特征在于所述培养基采用2216E培养基。5.如权利要求2所述科尔维尔菌属(Colwelliasp.)NB097...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈新华，张聪，郭文斌，王玉光，
申请(专利权)人：国家海洋局第三海洋研究所，
类型：发明
国别省市：福建,35