一种维氏气单胞菌菌蜕发酵用培养基及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种维氏气单胞菌菌蜕发酵用培养基，以水为溶剂，包括以下质量浓度的组分：蛋白胨8～12g/L、豆粕4～6g/L、酵母粉5～8g/L和氯化钠8～12g/L；培养基的pH值为7.0～7.5。本发明专利技术提供的维氏气单胞菌菌蜕发酵用培养基通过选择蛋白胨、豆粕、酵母粉和氯化钠四种组分，同时严格控制四种组分的用量来满足使维氏气单胞菌菌蜕浓度达到8.8×10

Culture medium and its preparation method and application of a Vivtorinox Aeromonas bacterial ghosts for fermentation

The invention provides a culture medium for Vivtorinox Aeromonas bacterial ghosts for fermentation, using water as solvent, which comprises the following components: the mass concentration of 8 ~ 12g/L, soybean peptone, yeast powder 4 ~ 6g/L, 5 ~ 8g/L and 8 ~ 12g/L sodium chloride medium; pH value is 7 to 7.5. Medium by selecting peptone, soybean meal, yeast powder and sodium chloride of four species of Aeromonas from Vivtorinox chantui fermentation provided by the invention, and strict control of the four components to meet the amount of Vivtorinox Aeromonas bacterial ghost concentration reached 8.8 * 10

【技术实现步骤摘要】
一种维氏气单胞菌菌蜕发酵用培养基及其制备方法和应用
本专利技术属于微生物
，具体涉及一种维氏气单胞菌菌蜕发酵用培养基及其制备方法和应用。
技术介绍
细菌菌蜕即不含菌体内容物(包括胞浆、核糖体、胞质颗粒等)，但其细胞外膜形态物质保持不变，能够有效识别外源抗原，且不可繁殖的死菌形态。一般的基因工程疫苗都需要佐剂辅助才能发挥良好的免疫效力，但目前所知的佐剂都具有毒性，没有毒副作用的佐剂还尚未出现。而细菌菌蜕疫苗自身就具备佐剂的性质，且免疫效率高，安全性良好，是一种前景广阔的新型疫苗。维氏气单胞菌属于气单胞菌属，主要分布于淡水环境中，世界范围内分布极为广泛，主要感染免疫力相对低下的淡水鱼类，给水产养殖业带来了巨大的经济损失。为更好防治该类细菌引起的疾病，通过构建了一种新型的基因工程疫苗-维氏气单胞菌菌蜕疫苗，应用于水产养殖中疾病的防治。维氏气单胞菌在适宜环境下生长，通过升温诱导裂解酶基因E表达，使维氏气单胞菌内容物丢失，形成菌蜕。目前，维氏气单胞菌菌蜕主要通过发酵生产的方法获得，并且一直依赖进口培养基进行研究的，但是进口培养基不仅具有菌蜕浓度高的优点，还具有裂解率高的优点，但是进口培养基价格昂贵，大大增加了生产成本，因此，大大限制了维氏气单胞菌菌蜕的生产。而国内报道的维氏气单胞菌菌蜕发酵用培养基发酵生产的维氏气单胞菌菌蜕产量较低，同时裂解率不能达到生产要求。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种维氏气单胞菌菌蜕发酵用培养基及其制备方法和应用，使所述培养基能够达到进口培养基的发酵效率的同时还能大幅度降低生产成本。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种维氏气单胞菌菌蜕发酵用培养基，以水为溶剂，包括以下质量浓度的组分：蛋白胨8～12g/L、豆粕4～6g/L、酵母粉5～8g/L和氯化钠8～12g/L；培养基的pH值为7.0～7.5。优选的，包括以下质量浓度的组分：蛋白胨10g/L，豆粕5g/L，酵母粉6g/L和氯化钠10g/L。优选的，所述蛋白胨为百家工贸蛋白胨。优选的，所述酵母粉为安琪酵母粉。优选的，所述培养基的pH值为7.2。本专利技术提供了所述的维氏气单胞菌菌蜕发酵用培养基的制备方法，包括以下步骤：将蛋白胨、豆粕、酵母粉、氯化钠和水混合搅拌，得到的混合物调整pH值，得到维氏气单胞菌菌蜕发酵用培养基。本专利技术提供了所述培养基或所述的方法制备的培养基在维氏气单胞菌菌蜕发酵中的应用。优选的，所述维氏气单胞菌菌蜕发酵的温度优选为27～29℃；所述发酵的转速优选为150～190rpm。优选的，所述维氏气单胞菌菌蜕发酵时诱导维氏气单胞菌菌蜕的温度为41～43℃。本专利技术提供了一种维氏气单胞菌菌蜕发酵用培养基，以水为溶剂，包括以下质量浓度的组分：蛋白胨8～12g/L、豆粕4～6g/L、酵母粉5～8g/L和氯化钠8～12g/L；培养基的pH值为7.0～7.5。本专利技术提供的维氏气单胞菌菌蜕发酵用培养基通过选择蛋白胨和豆粕作为氮源，酵母粉作为碳源，氯化钠作为无机盐，同时严格控制四种组分的用量来满足使维氏气单胞菌菌蜕浓度达到8.8×107cell/mL，同进口培养基能使菌蜕浓度能达到1×108cell/mL比较接近，能够满足市场需要。培养基的营养成分不同会影响细菌活性，而细菌活性对细菌的裂解有重要影响，活性不强的细菌或未正常分裂细菌不能正常裂解，本专利技术提供的培养基使菌蜕裂解率达到99.999％，因此本专利技术提供的培养基能够保证发酵得到的维氏气单胞菌活力强的优点。同时本专利技术提供的培养基降低生产成本，提高工厂化生产的可能性，大大克服了维氏气单胞菌菌蜕发酵依赖进口培养基的现状。具体实施方式本专利技术提供了一种维氏气单胞菌菌蜕发酵用培养基，以水为溶剂，包括以下质量浓度的组分：蛋白胨8～12g/L、豆粕4～6g/L、酵母粉5～8g/L和氯化钠8～12g/L；培养基的pH值为7.0～7.5。本专利技术提供的维氏气单胞菌菌蜕发酵用培养基以水为溶剂，包括质量浓度为8～12g/L的蛋白胨，优选为9～11g/L，更优选为10g/L。所述蛋白胨为维氏气单胞菌生长提供氮源。在本专利技术的实施例中，所述蛋白胨的来源优选为百家工贸蛋白胨、奥博星蛋白胨，更优选为百家工贸蛋白胨。本专利技术提供的维氏气单胞菌菌蜕发酵用培养基包括质量浓度为4～6g/L的豆粕，优选为4.5～5.5g/L，更优选为5g/L。所述豆粕的来源没有特殊限制，采用本领域技术人员所熟知的豆粕即可。所述豆粕为维氏气单胞菌生长提供氮源。本专利技术提供的维氏气单胞菌菌蜕发酵用培养基包括质量浓度为5～8g/L的酵母粉，优选为5.5～7g/L，更优选为6g/L。所述酵母粉为维氏气单胞菌生长提供碳源。所述蛋酵母粉的来源优选为安琪酵母粉、奥博星蛋白胨，更优选为安琪酵母粉。本专利技术提供的维氏气单胞菌菌蜕发酵用培养基包括质量浓度为8～12g/L的氯化钠，优选为9～11g/L，更优选为10g/L。所述氯化钠的来源没有特殊限制，采用本领域技术人员所熟知的氯化钠即可。本专利技术实施例中，所述氯化钠购自西陇化工公司。所述氯化钠为维氏气单胞菌生长提供无机盐。本专利技术提供的维氏气单胞菌菌蜕发酵用培养基包括水，以水为溶剂，溶解上述组分。所述水优选为双蒸水、纯净水或蒸馏水，更优选为蒸馏水。本专利技术提供的维氏气单胞菌菌蜕发酵用培养基的pH值优选为7.0～7.5，更优选为7.2。本专利技术提供了所述维氏气单胞菌菌蜕发酵用培养基的制备方法，包括以下步骤：将蛋白胨、豆粕、酵母粉、氯化钠和水混合搅拌，得到的混合物调整pH值，得到维氏气单胞菌菌蜕发酵用培养基。本专利技术中，所述混合搅拌的的转速优选为200～300rpm。本专利技术中，pH值调整的方法没有特殊限制，采用常规的方法即可。本专利技术提供了上述技术方案所述培养基或上述技术方案所述方法制备的培养基在维氏气单胞菌菌蜕发酵中的应用。简单说明发酵过程或发酵的步骤，引出诱导的过程本专利技术中，所述维氏气单孢菌(Aeromonasschubertii)由北京市水产研究所提供，由本实验室传代并进行保存。本专利技术中，所述维氏气单胞菌菌蜕发酵的温度优选为27～29℃，更优选为28℃；所述发酵的转速优选为150～190rpm，更优选为160～180rpm，最优选为170rpm。本专利技术中，所述诱导维氏气单胞菌发生菌蜕的时间为发酵开始10～48h。本专利技术中，所述维氏气单胞菌菌蜕发酵时诱导维氏气单胞菌菌蜕的温度优选为41～43℃，更优选为42℃。本专利技术中，提高培养温度的目的是诱导裂解酶基因E表达，所述基因E的表达使维氏气单胞菌发生裂解，内容物排出，形成菌蜕。本专利技术中，所述裂解率的测量时机优选为诱导温度持续22.5h后进行。所述菌蜕得率按照式I进行计算：所述菌蜕得率＝[(n1-n2)/n1]×100％式In1为温度诱导前活菌数，n2为温度诱导后活菌数。下面结合实施例对本专利技术提供的一种维氏气单胞菌菌蜕发酵用培养基及其制备方法和应用进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本专利技术保护范围的限定。实施例1配制如下组分含量的维氏气单胞菌菌蜕发酵用培养基，以水为溶剂，百家工贸蛋白胨8g/L、豆粕6g/L、安琪酵母粉5g/L和氯化钠12g/L；用1％的NaOH溶液和1％的HCl溶液调整培养基的pH值为7.0。采用上述制备的维氏气单胞菌菌蜕发本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种维氏气单胞菌菌蜕发酵用培养基，以水为溶剂，包括以下质量浓度的组分：蛋白胨8～12g/L、豆粕4～6g/L、酵母粉5～8g/L和氯化钠8～12g/L；培养基的pH值为7.0～7.5。

【技术特征摘要】
1.一种维氏气单胞菌菌蜕发酵用培养基，以水为溶剂，包括以下质量浓度的组分：蛋白胨8～12g/L、豆粕4～6g/L、酵母粉5～8g/L和氯化钠8～12g/L；培养基的pH值为7.0～7.5。2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，包括以下质量浓度的组分：蛋白胨10g/L，豆粕5g/L，酵母粉6g/L和氯化钠10g/L。3.根据权利要求1或2所述的培养基，其特征在于，所述蛋白胨为百家工贸蛋白胨。4.根据权利要求1或2所述的培养基，其特征在于，所述酵母粉为安琪酵母粉。5.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，培养基的pH值为7...

【专利技术属性】
技术研发人员：马志宏，姜娜，罗琳，李铁梁，邢薇，袁丁，徐冠玲，周云，
申请(专利权)人：北京市水产科学研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11