本发明专利技术公开了一种丁酸梭菌和丁酸梭菌活菌制剂的制备及应用，丁酸梭菌(Clostridium butyricum)LXKJ‑1，2016年3月24日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO:M201613。同时还公布了该菌株的种子培养基、发酵培养基配方、培养条件及其活菌制剂的生产方法。本发明专利技术提供的丁酸梭菌耐酸、耐碱、耐高温，产丁酸能力强，对大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄杆菌、单增李斯特菌、产气荚膜梭菌等动物病原菌都具有抑制作用，可预防畜禽由大肠杆菌、沙门氏菌、产气荚膜梭菌等引起的腹泻，改善肠道菌群平衡，促进畜禽生长，缓解母猪便秘，提高蛋鸡蛋重，改善蛋鸡蛋壳质量，降低料蛋比。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物发酵领域，涉及一种丁酸梭菌及丁酸梭菌活菌制剂生产方法和应用。
技术介绍
目前随着人们养殖规模的进一步扩大，为了提高养殖效益，各种抗生素做为促生长剂的大量使用已经成为一种普遍现象，其弊端日益凸显，如药物残留、耐药病原菌的报道、动物肠道菌群的失衡、环境污染等，严重威胁到了人类的健康及食品安全。微生态制剂做为一种安全、高效、无污染及无耐药性的抗生素替代产品逐步做为防病、促生长制剂应用于养殖业。微生态制剂是益生菌发酵及后加工而得到的微生物菌体及其代谢产物的生物制剂及活菌制剂。因此具有维持肠道微生态平衡、提高词料转化效率，改善畜禽生长性能、提高免疫功能、抗氧化和防癌及改善环境，降低有害物质的生成等作用，日益受到养殖业所追捧。丁酸梭菌(Clostridiumbutyricum)，首次是由日本千叶医科大学宫入近治博士首次发现并报道的，因此丁酸梭菌也被叫做宫入菌，同时日本也成为了研究丁酸梭菌历史最长的国家。丁酸梭菌(Clostridiumbutyricum)为革兰氏阳性菌，菌体呈直或者弯形，(0.5~1.7x2.4~7.6μm)，单个或者成对、短链，有鞭毛可运动，菌体可形成芽孢，中部膨大成梭形，芽孢偏心成次端生、无孢子外壁或附属丝；菌落多呈圆形，较小，凸起，乳白色，丁酸梭菌属于厌氧菌，液体发酵时能够产生丁酸、丙酸、乙酸，同时还能够产生氢气等，有研究发现丁酸梭菌产生的丁酸、乙酸对猪、鸡等动物肠道内的益生菌如双歧杆菌，乳酸菌等的生长繁殖具有很好的促进作用，而对肠道有害菌如大肠杆菌、产气荚膜梭菌、伤寒沙门氏菌等都具有很好的抑制作用，代谢产生的丁酸直接被肠道绒毛所利用，促进了肠道上皮组织细胞的再生和修复，代谢产生的氢气对机体肝、肾器官的氧化损伤具有修复作用，同时可以增强机体解毒功能。因此丁酸梭菌被人们称为“肠道健康第一菌”。专利CN201110116927，CN201110126498等涉及到了丁酸梭菌的生产加工方法，但这些方法普遍存在培养基成分复杂，发酵成本高，不适合工业化生产问题。CN201110454790，CN201310082656、CN201310083900、CN201410469885等涉及到了丁酸梭菌的应用，但未涉及到不同剂量丁酸梭菌对猪、蛋鸡、肉鸡生产性能的影响。
技术实现思路
本专利技术从健康猪肠道分离筛选了一株丁酸梭菌(Clostridiumbutyricum)LXKJ-1，其活性高，抗逆性强，同时找到了适宜其生长、繁殖的培养基及培养条件，发酵所得培养物活菌数高、芽孢率高，该专利技术所使用的培养基成分简单，成本低廉，很适合工厂的规模化生产。丁酸梭菌(Clostridiumbutyricum)LXKJ-1耐酸、耐碱、耐高温，产丁酸能力强，对大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄杆菌、单增李斯特菌、产气荚膜梭菌等动物病原菌都具有抑制作用，可预防猪、鸡由大肠杆菌、沙门氏菌、产气荚膜梭菌等引起的腹泻，改善肠道菌群平衡，促进猪、鸡生长，提高蛋鸡产蛋率和蛋重，改善蛋壳质量，降低料蛋比。本专利技术的技术方案是：一种丁酸梭菌，名称为LXKJ-1，分类名称为：丁酸梭菌LXKJ-1ClostridiumbutyricumLXKJ-1，保藏编号为：CCTCCNO:M201613，保藏日期：2016年3月24日，保藏地址为：中国，武汉，武汉大学，保藏单位：中国典型培养物保藏中心。一种丁酸梭菌LXKJ-1制备的丁酸梭菌活菌制剂。一种丁酸梭菌活菌制剂制备方法，包括以下步骤：①将丁酸梭菌(Clostridiumbutyricum)LXKJ-1其保藏在甘油管中，冷冻保藏，通过划线法接入斜面培养基，在厌氧条件下，35～37℃培养20～24h，用无菌生理盐水洗下芽孢悬液，作为原始菌液；②将原始菌液为菌种进行扩增培养，其具体步骤如下：将1体积的菌悬液接入到20体积的一级种子培养基中，于1L蓝盖试剂瓶中，厌氧条件下、35～37℃培养8～12h，做为一级种子液；将1体积的一级种子液接入到10体积的二级种子培养基中，于20L发酵罐中，氮气环境下、35～37℃培养8～12h，作为二级种子液；将二级种子液移入20倍体积的三级发酵培养基中，于200L发酵罐中，氮气环境下、35～37℃培养20～24h，即得到丁酸梭菌(Clostridiumbutyricum)LXKJ-1的培养物；③采用高速离心法对培养物进行菌体收集，离心收集的菌泥；④按1:1～5的比例添加5～20%的脱脂奶粉悬液、蔗糖、乳糖、海藻糖、麦芽糊精、山梨醇、甘油中的一种或一种以上的组合作为冻干保护剂，采用冷冻干燥法制备冻干菌体；⑤使用葡萄糖、淀粉、石粉、沸石粉、豆粕粉、玉米芯粉、麸皮粉中的一种或一种以上的组合作为辅料对菌粉进行稀释，根据需要，配制成不同活菌数的丁酸梭菌活菌制剂。进一步地，上述斜面培养基为：葡萄糖1.2%，L-半胱氨酸0.03%，硫代乙醇酸钠0.03%，K2HPO40.2%，酵母浸粉0.3%，大豆蛋白胨0.5%，蛋白胨1%，胰蛋白胨1%，NaCl0.3%，海藻酸钠0.5%，琼脂2%，pH6.5～7.0。进一步地，上述一级种子培养基为：葡萄糖5～30g/L，L-半胱氨酸0.1～5g/L，硫代乙醇酸钠0.1～5g/L，K2HPO40.1～5g/L，酵母浸粉1～10g/L，大豆蛋白胨5～20g/L，NaCl1～10g/L，海藻酸钠1～10g/L，pH6.5～7.0；所述二级种子培养基为：蛋白胨10～40g/L，豆饼粉1～5g/L，葡萄糖10～30g/L，KNO30.5～2.0g/L，K2HPO40.5～2.0g/L，MgSO40.1～0.5g/L，MnSO40.1～0.5g/L，L-半胱氨酸0.1～1.0g/L，海藻酸钠1.0～10g/L，尿素1.0～5.0g/L，CaCO31.0～10g/L，pH6.5～7.0；所述三级发酵培养基为：玉米粉10～40g/L，豆饼粉1～5g/L，胰蛋白胨10～40g/L，葡萄糖10～40g/L，NH4NO30.5～2.0g/L，K2HPO4.5～2.0g/L，MgSO40.1～0.5g/L，MnSO40.1～0.5g/L，L-半胱氨酸0.1～1.0g/L，海藻酸钠1.0～10g/L，尿素1.0～5.0g/L，CaCO31.0～10g/L，pH6.5～7.0；以上所有的培养基在使用前都需要蒸汽灭菌（121℃，30min），冷却待用。一种上述丁酸梭菌或上述的丁酸梭菌制剂在制备畜禽饲料微生物添加剂中的应用。进一步地，上述酸梭菌活菌制剂用于断奶仔猪提高生产性能和降低腹泻率，并显著降低盲肠中大肠杆菌和沙门氏菌数量。进一步地，上述丁酸梭菌活菌制剂用于蛋鸡提高生产性能、蛋品质，增加肉鸡盲肠中乳酸菌和双歧杆菌的数量及降低大肠杆菌数量。进一步地，上述丁酸梭菌活菌制剂用于肉鸡提高肉鸡成活率，降低腹泻率，促进生长，增加肉鸡盲肠中乳酸菌和双歧杆菌的数量及降低大肠杆菌数量。本专利技术从健康猪肠道分离筛选了一株丁酸梭菌(Clostridiumbutyricum)LXKJ-1，其活性高，抗逆性强，同时找到了适宜其生长、繁殖的培养基及培养条件，发酵所得培养物活菌数高、芽孢率高，该专利技术所使用的培养基成分简单本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种丁酸梭菌，其特征在于：名称为 LXKJ‑1，分类名称为：丁酸梭菌 LXKJ‑1Clostridium butyricum LXKJ‑1，保藏编号为：CCTCC NO:M201613，保藏日期：2016年3月24日，保藏地址为：中国，武汉，武汉大学，保藏单位：中国典型培养物保藏中心。
【技术特征摘要】
1.一种丁酸梭菌，其特征在于：名称为LXKJ-1，分类名称为：丁酸梭菌LXKJ-1ClostridiumbutyricumLXKJ-1，保藏编号为：CCTCCNO:M201613，保藏日期：2016年3月24日，保藏地址为：中国，武汉，武汉大学，保藏单位：中国典型培养物保藏中心。2.由权利要求1所述的丁酸梭菌LXKJ-1制备的丁酸梭菌活菌制剂。3.如权利要求2所述的一种丁酸梭菌活菌制剂制备方法，其特征在于，包括以下步骤：①将丁酸梭菌(Clostridiumbutyricum)LXKJ-1其保藏在甘油管中，冷冻保藏，通过划线法接入斜面培养基，在厌氧条件下，35～37℃培养20～24h，用无菌生理盐水洗下芽孢悬液，作为原始菌液；②将原始菌液为菌种进行扩增培养，其具体步骤如下：将1体积的菌悬液接入到20体积的一级种子培养基中，于1L蓝盖试剂瓶中，厌氧条件下、35～37℃培养8～12h，做为一级种子液；将1体积的一级种子液接入到10体积的二级种子培养基中，于20L发酵罐中，氮气环境下、35～37℃培养8～12h，作为二级种子液；将二级种子液移入20倍体积的三级发酵培养基中，于200L发酵罐中，氮气环境下、35～37℃培养20～24h，即得到丁酸梭菌(Clostridiumbutyricum)LXKJ-1的培养物；③采用高速离心法对培养物进行菌体收集，离心收集的菌泥；④按1:1～5的比例添加5～20%的脱脂奶粉悬液、蔗糖、乳糖、海藻糖、麦芽糊精、山梨醇、甘油中的一种或一种以上的组合作为冻干保护剂，采用冷冻干燥法制备冻干菌体；⑤使用葡萄糖、淀粉、石粉、沸石粉、豆粕粉、玉米芯粉、麸皮粉中的一种或一种以上的组合作为辅料对菌粉进行稀释，根据需要，配制成不同活菌数的丁酸梭菌活菌制剂。4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述斜面培养基为：葡萄糖1.2%，L-半胱氨酸0.03%，硫代乙醇酸钠0.03%，K2HPO40.2%，酵母浸粉0.3%，大豆蛋白胨0.5%，蛋白胨1%，胰蛋白胨1%，NaCl0.3%...
【专利技术属性】
技术研发人员：王丽，张仁文，姜文明，黄跃忠，冯丽萍，
申请(专利权)人：湖北绿雪生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42
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