褪黑激素的高灵敏度检测制造技术

技术编号:14758843 阅读:78 留言:0更新日期:2017-03-03 05:56
本发明专利技术涉及褪黑激素衍生物在测定法中的用途,其中所述衍生物是在褪黑激素的吲哚环的3位的缀合物,并且其中所述缀合物包含至少2个碳原子的接头,条件是所述缀合物不包含多肽或蛋白抗原。所述衍生物优选包含3‑(2‑乙基酰氨基戊二酸)‑5‑甲氧基吲哚(GUS)并偶联至载体诸如葡聚糖。本发明专利技术进一步涉及用于使用包含所述褪黑激素衍生物的化合物检测和/或定量样品中的褪黑激素的方法,相应的免疫生物学测定法和用于基于褪黑激素衍生物检测和/或定量褪黑激素的部件试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】专利
本专利技术涉及褪黑激素衍生物在测定法中的用途,其中所述衍生物是在褪黑激素的吲哚环的3位的缀合物,并且其中所述缀合物包含至少2个碳原子的接头,条件是所述缀合物不包含多肽或蛋白抗原。所述衍生物优选包含3-(2-乙基酰氨基戊二酸)-5-甲氧基吲哚(GUS)并偶联至载体诸如葡聚糖。本专利技术进一步涉及用于使用包含所述褪黑激素衍生物的化合物检测和/或定量样品中的褪黑激素的方法,相应的免疫生物学测定法和用于基于褪黑激素衍生物检测和/或定量褪黑激素的部件试剂盒。专利技术背景褪黑激素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)是松果体的激素,并且参与许多生理功能,例如,调节昼夜节律和季节性繁殖。褪黑激素已与几种病症或生理问题(包括抑郁、睡眠障碍、偏头痛发作、免疫系统或人繁殖的调节)相关。具体而言,人昼夜节律(即24小时生物钟)在每日光-暗周期中是高度调节且依赖性的。在昼夜节律的夜间相位期间产生的褪黑激素可用于建立患者的昼夜节律中的疑似问题。主要使用免疫学或HLPC检测技术对特定样品类型诸如唾液或提取的血浆样品进行人中的褪黑激素的检测(Voultsios等人,1997,JournalofBiologicalRhythms,12:457–466;Römsing等人,2006,Scand.J.Clin.Lab.Invest,66:181–190)。褪黑激素的免疫学检测通常依赖于对褪黑激素具有反应性的特异性抗体,其与褪黑激素缀合物或褪黑激素放射性标记物一起孵育以测定从样品捕获的褪黑激素的量。由于褪黑激素太小而不能单独产生抗血清,所以其通常偶联至抗原蛋白诸如BSA。因此,褪黑激素充当半抗原,得到与所述半抗原和相邻蛋白结构结合的抗血清(Grota等人,1983,CanJBiochemCellBiol,61:1096-1101)。第一免疫测定使用放射性标记物,其随后被替换为酶或荧光探针(Voultsios等人,1997,JournalofBiologicalRhythms12:457–466)。免疫学测定法中最广泛使用的缀合物是修饰的褪黑激素衍生物,诸如褪黑激素-1-丙酸,其在褪黑激素分子的氮处被修饰,并确保该测定法与使用的抗体组合的特异性。通常,褪黑激素的灵敏性(<10pg/ml)免疫学检测依赖于长孵育时间(3小时-16小时)与约4至20℃的低测定温度的组合(Chegini等人,1995,Clin.Chem,41:381–386;或Di等人,1998,ClinChem,44:304–310)。因此,对允许在约20℃和更高的温度下和较短孵育时间期间高度灵敏性检测褪黑激素的有效技术存在需求。本专利技术的目标和概述本专利技术解决了这些需求并提供了用于在约20℃和更高的温度下以及在小于16小时、特别是仅约0.5小时的孵育时间期间高度灵敏性检测褪黑激素的方式和方法。上述目标具体地通过在测定中使用褪黑激素衍生物来实现,其中所述衍生物是在褪黑激素的吲哚环的3位的缀合物,并且其中所述缀合物包含至少2个碳原子的接头,条件是所述缀合物不包含多肽或蛋白抗原。本专利技术人提供了令人惊讶的解决方案,在褪黑激素在其3位(即在褪黑激素的吲哚环的3位)与至少2个C-原子的长度的接头缀合后,获得褪黑激素衍生物,当用于免疫生物测定或方法中时,所述褪黑激素衍生物允许进行在20℃下和更高持续小于16小时、例如仅30分钟的急剧缩短的孵育时间的褪黑激素检测或定量测定。对于进一步与葡聚糖结合的褪黑激素类似物3-(2-乙基酰氨基戊二酸)-5-甲氧基吲哚(GUS),该原理已经具体地得到证明。因此,在本专利技术的一个优选实施方案中,所述褪黑激素衍生物是或包含3-(2-乙基酰氨基戊二酸)-5-甲氧基吲哚(GUS)。在一个进一步优选实施方案中,所述衍生物偶联至载体。特别优选的是葡聚糖作为载体,而也可以使用其它载体。在又另一个优选实施方案中,所述载体可以进一步偶联至颗粒。在又另一个优选实施方案中,偶联至如上定义的褪黑激素衍生物的载体可以结合至表面。在具体实施方案中,所述载体可以是包被在表面上。在另一个优选实施方案中,标记所述包含褪黑激素衍生物和载体的化合物。在一个进一步优选实施方案中,所述测定法是免疫生物学褪黑激素测定法,具有灵敏度为<10pg褪黑激素/ml。在一个特别优选实施方案中,所述测定法是免疫生物学褪黑激素定量测定法,具有灵敏度为<10pg褪黑激素/ml。在又另一个优选实施方案中,所述测定法在高于约20℃的温度下进行。在一个特别优选实施方案中,所述测定法在约20℃至25℃的温度下进行。在另一个优选实施方案中,所述测定法进行少于16小时。在一个特别优选实施方案中,所述测定法进行约0.5小时。在另一个方面,本专利技术涉及用于检测和/或定量样品中的褪黑激素的方法或免疫生物学测定法,其包括以下步骤:(a)将样品与预定量的包含如本文上述褪黑激素衍生物的化合物一起孵育;(b)使褪黑激素和/或包含所述褪黑激素衍生物的化合物与褪黑激素结合分子结合,其中所述褪黑激素结合分子固定在表面上;(c)测量结合至所述褪黑激素结合分子的包含所述褪黑激素衍生物的化合物的量;和(d)基于包含所述褪黑激素衍生物的化合物的测量量的反比例,检测所述样品中的褪黑激素的存在和/或推导所述样品中的褪黑激素的量。在另一个方面,本专利技术涉及用于检测和/或定量样品中的褪黑激素的方法或免疫生物学测定法,其包括以下步骤(a)提供表面上的固定形式或可固定形式的包含如上文所述的褪黑激素衍生物的化合物;(b)将所述表面上的样品与预定量的褪黑激素结合分子孵育,由此允许所述褪黑激素结合分子与褪黑激素和/或固定或可固定的包含所述褪黑激素衍生物的化合物结合;(c)测量与固定的包含所述褪黑激素衍生物的化合物结合的所述褪黑激素结合分子的量;和(d)基于所述褪黑激素结合分子的测量量的反比例,推导所述样品中的褪黑激素的量。在所述方法或测定法的一个优选实施方案中,所述结合分子是褪黑激素特异性抗体。在所述方法或测定法的另一个优选实施方案中,所述方法或测定法在高于约20℃的温度下进行和/或进行小于16小时,具有<10pg褪黑激素/ml的灵敏度。在一个特别优选实施方案中,所述方法或测定法在约20℃至25℃的温度下进行。在进一步特别优选实施方案中,所述方法或测定法进行约0.5小时。在一个进一步优选实施方案中,所述方法或测定法在允许磁驱动颗粒的装置中进行。进一步优选的是,如上所述的所述样品是唾液、血液、血清、血浆、尿液或汗液样品。在一个最后方面,本专利技术涉及用于检测和/或定量褪黑激素的部件试剂盒,其包含如上文所述的褪黑激素衍生物和褪黑激素特异性抗体。附图简述图1显示褪黑激素的化学结构包括指示相关位置的其吲哚环。图2描绘褪黑激素衍生物GUS3-(2-乙基酰氨基戊二酸)-甲氧基吲哚),其为褪黑激素在3位的衍生物。图3在左侧小图中例举了一种测定形式,所述测定形式具有包含载体的褪黑激素衍生物,所述载体偶联至珠粒(颗粒),所述珠粒(颗粒)在褪黑激素不存在的情况下通过表面上包被/印刷的结合分子(抗体)来检测。样品中褪黑激素的存在将防止复合物的形成并导致信号减少。在右侧小图中,举例说明根据本专利技术的测定形式的一个进一步示例性实施方案,其中包含载体的褪黑激素本文档来自技高网...
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【技术保护点】
褪黑激素衍生物在测定法中的用途,其中所述衍生物是在褪黑激素的吲哚环的3位的缀合物,并且其中所述缀合物包含至少2个碳原子的接头,条件是所述缀合物不包含多肽或蛋白抗原。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.04.03 EP 14163378.41.褪黑激素衍生物在测定法中的用途,其中所述衍生物是在褪黑激素的吲哚环的3位的缀合物,并且其中所述缀合物包含至少2个碳原子的接头,条件是所述缀合物不包含多肽或蛋白抗原。2.权利要求1的用途,其中所述衍生物是3-(2-乙基酰氨基戊二酸)-5-甲氧基吲哚(GUS)或包含3-(2-乙基酰氨基戊二酸)-5-甲氧基吲哚(GUS)。3.权利要求1或2的用途,其中所述衍生物偶联至载体。4.权利要求3的用途,其中所述载体是葡聚糖。5.权利要求3或4的用途,其中所述载体进一步偶联至颗粒,或包被表面。6.权利要求3至5中任一项的用途,其中所述包含褪黑激素衍生物和载体的化合物是被标记的。7.权利要求1的用途,其中所述测定法是灵敏度为<10pg褪黑激素/ml的免疫生物学褪黑激素测定法,优选免疫生物学褪黑激素定量测定法。8.权利要求1的用途,其中所述测定法在高于约20℃的温度下,优选在约20℃至25℃的温度下进行,和/或其中所述测定法进行小于16小时,优选约0.5小时。9.用于检测和/或定量样品中的褪黑激素的方法或免疫生物学测定法,其包括以下步骤:(a)将样品与预定量的包含如权利要求1至6中任一项中所定义的褪黑激素衍生物的化合物一起孵育;(b)使褪黑激素和/或包含所述褪黑激素衍生物的化合物与褪黑激素结合分子结合,其中所述褪黑激素结合分子固定在表面上;(c)测量结合至所述褪...

【专利技术属性】
技术研发人员:MH范鲁斯马伦
申请(专利权)人:皇家飞利浦有限公司
类型:发明
国别省市:荷兰;NL

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