VEGF‑C在筛选用于诊断或治疗种植转移癌的药物中的用途制造技术

本发明专利技术公开了VEGF‑C在筛选用于诊断或治疗种植转移癌的药物中的用途，属于医学领域。本发明专利技术证实TAM相关球状体与卵巢癌临床病理间有紧密联系，在小鼠中建立的卵巢上皮癌模型表明TAM在卵巢癌种植转移早期促进球体形成及肿瘤的生长，TAM分泌的EGF激活肿瘤细胞上的EGFR后，其反过来上调周边肿瘤细胞VEGFs‑VEGFRs通路信号转导而促使肿瘤细胞增殖和分化，并且EGF能上调αMβ2整合蛋白在TAM、ICAM‑1在肿瘤细胞上的表达，促使肿瘤细胞‑TAM相关联。在小鼠中去除TAM、药物阻滞VEGF或者以抗体中和ICAM‑1后将阻碍球体形成及卵巢癌进展，本发明专利技术揭示出TAM介导球体形成的一种新机制，这将为卵巢癌及其他远端转移的癌症提供一种新的靶向治疗。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及VEGF-C在筛选用于诊断或治疗种植转移癌的药物中的用途，属于医学领域。
技术介绍
卵巢癌(OC)是全美妇科排名第二的常见肿瘤及主要死亡原因之一。高死亡率主要是由于卵巢癌在早期(I/II)诊断困难，直至其扩散进展至晚期(III/IV)后方能确诊。我们已报道过OC患者从I期到IV的确诊率分别为7.19％、8.63％、72％和72.18％。OC患者的预后不良，各期OC患者五年平均生存率为42％。对III期和IV期患者的长期随访观察后发现其五年生存率低于10％。但对于早期(I-II)确诊的患者，特别是那些肿瘤局限于原发部分的患者，其五年生存率达92.7％。研究显示OC患者5年生存率与10年前相比上升不到2％。广泛腹腔和盆腔内种植转移是OC预后不良的主要原因，手术治疗通常不能完全将这些病灶清除干净。在这种情况下，对大多数OC患者来说肿瘤细胞减灭术成为最后的选择。到目前为止尚没有发现有效的特定靶向药物对种植转移有所疗效，而现在用于OC的化疗药物极易诱发药物耐药性且治疗后患者的长期预后并不理想，因此，弄清OC种植转移的机制很有必要，其对于治疗OC种植转移靶向新药物的研发以及提高OC患者生存率都至关重要。肿物增大破入腹膜表面后肿瘤细胞从原位癌上脱落下来，随着腹水在腹腔中进行转运直至定植在腹腔中，这是目前对腹膜种植转移现象最为普遍认同的解释。许多研究认为种植转移的过程分为如下几个步骤：1)细胞脱落、存活及抵抗失巢凋亡；2)躲避免疫监视；3)上皮-间质转分化；4)球状体形成；5)腹水形成以及6)腹膜种植。但是，自由脱落的肿瘤细胞在种植转移环境中如何生存以及种植转移初期球体形成的机制仍不清楚。
技术实现思路
本专利技术的目的在于通过小鼠原位卵巢癌模型揭示出OC种植转移的相关机制，对肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)在OC种植转移中所起作用有一定新认识，从而可能提供阻断肿瘤种植转移的新靶点。为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：VEGF-C在筛选用于诊断或治疗种植转移癌的药物中的用途。作为对上述技术方案的进一步改进，所述种植转移癌的种植转移与巨噬细胞相关。作为对上述技术方案的进一步改进，所述种植转移癌为卵巢癌、胰腺癌或大肠癌。作为对上述技术方案的进一步改进，所述药物通过降低VEGF-C水平、阻滞VEGF-C的受体或阻断VEGF-C的下游信号来治疗种植转移癌。作为对上述技术方案的进一步改进，所述阻断VEGF-C的下游信号通过抑制ICAM-1来进行。作为对上述技术方案的更进一步改进，所述药物通过降低VEGF-C水平或阻滞VEGF-C的受体而抑制EGFR阳性肿瘤细胞迁移以及肿瘤细胞-TAMs球体的形成来治疗种植转移癌。另外，本专利技术还提供了VEGF-C抑制剂、VEGF-C的受体阻滞药或VEGF-C的下游信号拮抗药在制备用于治疗种植转移癌的药物中的用途。作为对上述技术方案的进一步改进，所述VEGF-C抑制剂为VEGF-C中和抗体。作为对上述技术方案的进一步改进，所述VEGF-C的受体阻滞药为VEGFR3拮抗剂MAZ51。作为对上述技术方案的进一步改进，所述VEGF-C的下游信号拮抗药为ICAM-1中和抗体。需要说明的是，本专利技术中出现的中和抗体也即普通抗体，之所以称为中和抗体主要从抗体的治疗角度命名。本专利技术的有益效果在于：本专利技术表明了TAMs在卵巢癌种植转移球状体形成过程中起到必不可少的作用。TAMs能分泌大量EGF从而激活周围肿瘤细胞中的EGFR，激活的EGF/EGFR信号通路能上调VEGF-C，其反过来又上调整合蛋白和ICAM-1从而形成自分泌正反馈环路，进而促进肿瘤细胞增生、分化、粘附、形成球状体及腹膜转移，揭示出球状体形成的关键机制，为抑制种植转移提供了一种新策略以及改善OC患者的预后情况。附图说明图1显示了巨噬细胞(TAMs)在原位卵巢癌模型中参与球体的形成；将稳定表达mCherry荧光蛋白标记的ID8OCs植入8周大的tomatolyz-cre受体小鼠体内，在瘤细胞分别植入2，4，6及8周时检测渗入腹腔的Cherry+肿瘤细胞和GFP+细胞；其中，A为显示将腹腔细胞涂于切片上后置于荧光显微镜下观察的荧光图，每个时间点取n＝5只小鼠；B为对GFP+细胞总数进行量化，插图为对从0到20天对GFP+细胞总数进行量化的统计图，每个时间点取n＝5只小鼠；C为对Cherry+肿瘤细胞总数进行量化，插图为0到20天对Cherry+肿瘤细胞总数进行量化的统计图，每个时间点取n＝5只小鼠；D-G显示巨噬细胞和球体形成，3至6周时的典型荧光图像如D所示，图E为对球体总数[球体/100μl腹水]的量化统计图，图F为对球体体积[细胞数/球体]的量化统计图，每个时间点取n＝5只小鼠，已证实在3周时开始启动球体形成；G为用APC(647nm)-结合型抗-CD68和DAPI对8周时采集的球体进行免疫染色后以共焦成像技术所得的图像，对GFP+和CD68+巨噬细胞、Cherry+肿瘤细胞和DAPI进行细胞核染色后可见，右图所示为融合后图像，所有数据结果以均值±标准差形式表示,n＝5,星号*为P<0.05，星号**为P<0.01，星号***为P<0.001。图2显示了M2型肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)聚合与卵巢癌的进展相关；原位卵巢癌模型中F4/80+CD11b+巨噬细胞来自于指定时间(1,4和8周)点的单个细胞群或球体；A为用qRT-PCR技术对M1型特异性和M2型特异性的标志物进行检测的统计图，以外周血单核细胞作为对照，与1周内单个细胞体内的基因表达相比，所有数据结果以均值±标准差形式表示，n＝5，星号*为P<0.05，星号**为P<0.01，星号***为P<0.001(双侧t分布检验)；B-C为用FACS法对第1和8周个体细胞群内CD163和CD206在巨噬细胞中的表达情况的统计分析结果图，所有数据结果以均值±标准差形式表示,n＝5,星号*为P<0.05，星号**为P<0.01，星号***为P<0.001。图3显示了腹腔球体形成及卵巢癌肿瘤细胞生长所必需；将小鼠ID8细胞注入C57BL/6雌性受体小鼠腹腔内建立原位小鼠OC模型，然后小鼠分别予脂质体(ID8组)或氯膦酸二钠脂质体(ID8+LC组)治疗，一半供体小鼠接受了ID8细胞加上从患癌供体小鼠球体中分离出来的TAMs及脂质体(ID8+TAM)或者氯膦酸二钠脂质体(ID8+TAM+LC)；A-D显示氯膦酸二钠脂质体和TAM对肿瘤生长的效应，A为在指定时间(0-60天)小鼠体重的增加曲线图；B-C显示在第60天时测量腹水体积和肿瘤净重的统计结果图，数据以平均值±标准差表示,n＝10，星号***为P<0.001；D为监测小鼠状态对其生存率的量化统计图，每组n＝24只小鼠，用对数秩和检验进行Kaplan-Meier分析，星号***为P<0.001；E-G显示氯膦酸二钠脂质体和TAM对球体形成的影响作用，图E为8周时从腹水中收集球体进行H&E染色图，图F为球体总数统计图，图G为球体大小统计图；H-J显示氯膦酸二钠脂质体和TAM对肿瘤细胞生长作用，H为采集8周时单个细胞群和球体，用抗-Ki67、抗-CD68和D本文档来自技高网...

【技术保护点】
VEGF‑C在筛选用于诊断或治疗种植转移癌的药物中的用途。

【技术特征摘要】
1.VEGF-C在筛选用于诊断或治疗种植转移癌的药物中的用途。2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述种植转移癌的种植转移与巨噬细胞相关。3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述种植转移癌为卵巢癌、胰腺癌或大肠癌。4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物通过降低VEGF-C水平、阻滞VEGF-C的受体或阻断VEGF-C的下游信号来治疗种植转移癌。5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述阻断VEGF-C的下游信号通过抑制ICAM-1来进行。6.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物通过降低V...

【专利技术属性】
技术研发人员：王敏，
申请(专利权)人：广州道瑞医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44