本发明专利技术公开了一种琼花离体培养和快速繁殖的方法。主要包括以下步骤：步骤一，繁殖材料的选择；步骤二，繁殖材料的消毒；步骤三，培养基配制、灭菌；步骤四，接种、培养，包括琼花试管苗的培育、试管苗叶片愈伤组织培养和生根培养；步骤五，驯化移栽。该方法可以提高琼花的繁殖系数和成活率，减少发芽周期，避开实生苗童期，不仅可以排除外界条件的影响，四季可行，节约育苗占地，降低生产成本；而且可以在短期内得到大量健壮幼苗，进行规模化、工厂化生产，增加琼花种苗的供应量，满足园林绿化市场对琼花苗木的需求，有利于优良种质离体保存，为琼花种苗的快速繁殖和广泛应用提供实用技术支撑。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物繁殖方法，具体为。
技术介绍
琼花(Viburnummacrocephalum f.keteleeri)，为五福花科(原忍冬科)荚莲属半常绿灌木，花型奇特，果实鲜红，树形优美，有极高的观赏价值，是扬州市市花和我国特有的木本植物。琼花适应性强、生长健壮，管理较粗放，花果繁盛。因其耐荫可作为乔、灌、草结合的林下灌木；其果实成熟后色彩红艳，营养成分极为丰富，可作为诱鸟树种；奇异的花型、洁白的花色、浓郁的芳香，可作为优良的观赏树种。既适宜庭园绿化、美化、香化，也可作切花材料，各具特色。因此，琼花是满足城市植物群落和城市生态系统稳定性、景观多样性等多种需求的理想植物材料之一。然而，琼花在自然条件下，存在生殖障碍，种子休眠严重，不易萌发，人工大田扦插成活率极低，自然和人工繁殖都极其困难，导致目前绿化苗木市场琼花种源稀缺，价格昂贵，限制了琼花在各地的普及。琼花传统繁殖方法可分为分株、扦插、播种繁殖，但分株只有在成年大苗基部萌蘖时才能进行，且3?4年分一次，繁殖系数很低；扦插繁殖时生根较困难，成活率低，须借助全光雾苗床和激素处理；播种繁殖因其种子萌发具有双重休眠现象，即需1?2年层积沙藏才能发芽，发芽周期长，且播种的实生苗童期较长，6?8年才开花，不利于大规模快繁应用。快速繁殖成为制约琼花应用的瓶颈问题，为此，建立高效的琼花离体培养和快速繁殖技术有重要的实用价值。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种操作简单、实用的琼花离体培养和快速繁殖的方法。实现本专利技术的技术方案是:(1)繁殖材料的选择选取琼花成年植株上腋芽作为繁殖材料。(2)繁殖材料的消毒取剪好的材料，自来水流水冲洗2h后，用毛刷、洗衣粉将表面清洗干净，用70%(体积浓度)的酒精表面消毒30s，0.1% (质量浓度)吐温浸泡振荡冲洗20?30min，0.3%(质量浓度)次氯酸钠消毒液消毒15min，最后用无菌水冲洗5?7遍。(3)培养基配制、灭菌培养基配制:琼花茎尖启动培养最佳初始培养基为:MS+BA1.0+ZT8.0+ΝΑΑ0.2 ；(配置一升的茎尖启动培养基——MS(培养基):I 50ml，II 5ml，III 5ml，IV 5ml ；BA(6-苄氨基嘌呤):10ml ;ZT(玉米素):80ml ;NAA(萘乙酸):2ml ;定容至1L)琼花丛生芽分化培养的最佳培养基是:MS+BA1.0+ZT15 ；(配置一升的丛生芽分化培养基--MS (培养基):I 50ml，II 5ml，III 5ml，IV 5ml ；BA (6-苄氨基嘌呤):10ml ;ZT (玉米素):150ml ;定容至1L)琼花叶片愈伤组织最佳培养基为:MS+BA0.5+NAA2.0+2, 4-D0.5?1.0 ;(配置一升的叶片愈伤组织培养基——MS(培养基):I50ml，II 5ml，III 5ml，IV 5ml ;BA(6-苄氨基嘌呤):5ml ;NAA(萘乙酸):20ml ;2，4_D (2，4-二氯苯氧乙酸):5?10ml ;定容至1L)琼花试管苗生根诱导最佳培养基为:MS+NAA8.0 ；(配置一升的根诱导培养基--MS(培养基):I 50ml，II 5ml，III 5ml，IV 5ml ；NAA(萘乙酸):80ml ;定容至IL)每种培养基加20g/L蔗糖，琼脂粉6.8g/L，pH6.0?6.2，121 °C高温高压灭菌18min，培养基温度25°C ±2°C，光照12h/d，光照度约20001x。(4)接种、培养，包括琼花试管苗的培育、试管苗叶片愈伤组织培养和生根培养；将腋芽种到启动培养基MS上，在接种过程中，琼花外植体的切口处一般都会迅速褐变，从而污染培养基，通过将外植体浸入无菌水进行切取，在启动培养基中增加0.5%Vc，增加转接培养基的次数可以大大减少褐变污染。经过40d生长后，将丛生芽苗剪成带节小苗，转接入丛生芽分化培养的培养基进行继代增殖培养。在琼花芽继代培养过程中，将多余的叶片剪成lcmX0.5cm左右长方块，接种于琼花叶片愈伤组织培养基。待愈伤组织分化成芽，移入生根培养基进行生根诱导。(5)驯化移栽将达到移栽标准的生根试管苗移入温室，打开瓶口炼苗2?3d，取出洗净培养基，移栽在装有腐殖质土 +硅石(体积比2:1)的基质中，前2?3周每天喷水3?4次，之后适量饶水，培养50?60d即可移栽入大田。本专利技术与现有技术相比，其显著优点是:1、本专利技术使用琼花的腋芽作为材料，取材方便，数量充足，运用组织培养的技术，腋芽经过消毒后接种于培养基，较短时间形成愈伤组织直至生根形成幼苗植株；2、本专利技术主要筛选了适合琼花茎尖启动、丛生芽分化、愈伤组织诱导和试管苗生根诱导的最佳培养基，对琼花离体培养条件作了改进，有效提高琼花离体繁育的成活率，提高了琼花种苗的繁殖系数；3、该方法为琼花的离体繁殖育苗提供了技术支持，为琼花保留较好的种质和快速繁殖提供实用可行方案。【具体实施方式】为了更好地理解本专利技术，下面通过具体的实施例来具体说明本专利技术的技术方案。实施例11.繁殖材料的选择试材取自扬州大学农学院琼花成年植株上腋芽。2.繁殖材料的消毒自来水流水冲洗2h后，用毛刷、洗衣粉将表面清洗干净，用70%的酒精表面消毒30s,0.1%吐温浸泡振荡冲洗20?30min，0.3%次氯酸钠消毒15min，最后用无菌水冲洗5?7遍。3.培养基配制、灭菌琼花茎尖启动培养初始培养基为:MS+BA1.0+ZT8.0+ΝΑΑ0.2 ；琼花丛生芽分化培养的培养基是:MS+BA1.0+ZT15 ；琼花叶片愈伤组织培养基为:MS+BA0.5+NAA2.0+2, 4-D0.5?1.0 ;琼花试管苗生根诱导培养基为:MS+NAA8.0。不同培养基加20g/L蔗糖，琼脂粉6.8g/L，ρΗ6.0?6.2，121 °C高温高压灭菌18min，培养基温度25°C ±2°C，光照12h/d，光照度约20001x。4.接种、培养将腋芽接种到启动培养基上，在接种过程中，琼花外植体的切口处一般都会迅速褐变，从而污染培养基，通过将外植体浸入无菌水进行切取，在培养基中增加0.5% Vc，增加转接培养基的次数可以大大减少褐变污染。经过40d生长后，将丛生芽苗剪成带节小苗，转接入丛生芽分化培养的培养基进行继代增殖培养。在琼花芽继代培养过程中，将多余的叶片剪成lcmX0.5cm左右长方块，接种于琼花叶片愈伤组织培养基。待愈伤组织分化成芽，移入生根培养基进行生根诱导。5.驯化移栽将达到移栽标准的生根试管苗移入温室，打开瓶口炼苗2?3d，取出洗净培养基，移栽在装有腐殖质土 +硅石(体积比2:1)的基质中，前2?3周每天喷水3?4次，之后适量饶水，培养50?60d即可移栽入大田。效果说明:琼花腋芽接种于启动培养基上，经过40d生长，芽萌发率为86.7%，长势优秀，叶色为绿色；继代培养中，芽分化效果好，生长迅速，丛生芽数量多，诱导率高，丛芽增殖倍数达到10.57。取叶片在愈伤组织培养基培养10d后，叶片与培养基接触的边缘愈伤组织生长迅速，30d后叶片消失，形成团状带白色和淡绿色的众多微小突起，愈伤组织诱导率达到94.3%。接种到生根培养基，30d后幼苗开始陆续生根，生根率达到83.3%。驯化后，移栽成活率可达70本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种琼花离体培养和快速繁殖的方法，其特征在于包括以下步骤：步骤一，选择琼花的腋芽作为繁殖材料；步骤二，繁殖材料的消毒；步骤三，培养基配制、灭菌；所述培养基具体配置经过对比试验确定，在多种方案下寻找最佳的培养基；琼花茎尖启动培养最佳初始培养基为：MS+BA1.0+ZT8.0+NAA0.2；琼花丛生芽分化培养的最佳培养基是：MS+BA1.0+ZT15；琼花叶片愈伤组织最佳培养基为：MS+BA0.5+NAA2.0+2,4‑D0.5～1.0；琼花试管苗生根诱导最佳培养基为：MS+NAA8.0；步骤四，接种、培养，包括琼花试管苗的培育、试管苗叶片愈伤组织培养和生根培养；步骤五，驯化移栽。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：金飚，张莉，李良俊，王莉，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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