独一味的HPLC检测方法及指纹图谱检测技术技术

本发明专利技术提供了独一味的HPLC检测方法。本发明专利技术还提供了独一味的HPLC指纹图谱检测技术。本发明专利技术检测方法中，出峰数量较多，分离度良好，基线平稳，指认了8种成分，专属性好，能够对独一味进行有效检测，为保障药材质量提供给了新的选择。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术提供了独一味的HPLC检测方法。本专利技术还提供了独一味的HPLC指纹图谱检测技术。本专利技术检测方法中，出峰数量较多，分离度良好，基线平稳，指认了8种成分，专属性好，能够对独一味进行有效检测，为保障药材质量提供给了新的选择。【专利说明】独一味的HPLC检测方法及指纹图谱检测技术
本专利技术涉及独一味的HPLC检测方法及指纹图谱检测技术。
技术介绍
独一味Lamiophlomis rotata化en化?）Kudo系大宗常用藏药，功能活血止血，法风 止痛，临床广泛用治外科手术后的刀口疼痛、出血、风湿癖痛等症，疗效确切，镇痛作用尤其 显著W，具有广阔的应用前景。 独一味药材来源全部依靠野生资源，由于其需求量剧增，资源紧缺，被列为一级瀬 危藏药。为了保护日益减少的独一味野生资源，2010年版中国药典将其入药部位由全草修 订为地上部分?。然而，现有关于独一味药材质量控制的报道主要集中在根及根茎W或全 草W，较少涉及地上部分W。现代研究表明，独一味的活性成分主要有3大类;环帰離 聰巧类化合物，具有很好的止血、促凝血作用，是止血活性成分；苯己醇巧类化合物，具有抗 炎、抗氧化活性；黄丽类化合物，具有镇痛止血、抗炎、抗肿瘤活性。现有报道多为采用HPLC 法测定其中1?2类成分尚无同时检测3类W上成分的相关报道。
技术实现思路
为了进一步完善独一味的质量控制标准，本专利技术拟采用HPLC法对独一味地上部 分样品进行分析评价，并希望指认涵盖环帰離聰巧、苯己醇巧、黄丽、咖啡醜4类成分的化 合物，能更加全面反映该独一味药材的成分特征，可为该药材的质量控制提供科学依据。 本专利技术提供了独一味的HPLC检测方法，它包括如下操作步骤： [000引 （1)取待检药材，W甲醇或含水甲醇提取，制备供试品溶液； 似将供试品溶液注入高效液相色谱仪中，检测即可，色谱条件如下： 色谱柱：十八焼基键合娃胶为填料 检测波长；235nm + 5nm 流动相；A ;己膳，B ;0. 1?0. 5%磯酸水溶液，梯度洗脱程序为；0?10min，5%? 8% A ;10 ?27min，8%?12% A ;27 ?35min，12%?12% A ;35 ?70min，12%?17% A ; 70?80min，17%?19%A;80?110min，19%?36%A;110?120min，36%?50%A。 进一步地，步骤（1)中，所述含水甲醇中甲醇浓度为50?90%，优选为65?75%， 更优选为70%。 更进一步地，步骤（1)中，提取的方法选自回流、超声、浸溃或渗漉。 进一步地，步骤（2)中，磯酸水溶液浓度为0. 1%?0.3%，优选为0. 1%。 进一步地，所述色谱柱的尺寸为4. 6mmX 250mm，5 y m。 更进一步地，色谱柱柱温为30 +2°C。 进一步地，所述检测方法中，选用胡麻属巧、山檐巧甲醋、绿原酸、马钱巧、8-0-己 醜山檐巧甲醋、连翅醋巧B、木犀草巧、麦角留巧中的一种或两种W上的组合物为对照品。 本专利技术还提供了独一味的HPLC指纹图谱检测方法，它包括如下操作步骤： [001引（I)取待检药材，W甲醇或含水甲醇提取，制备供试品溶液； [001引 似将供试品溶液注入高效液相色谱仪中，检测即得供试品指纹图谱，色谱条件如 下： 色谱柱：十八焼基键合娃胶为填料 检测波长；235nm±5nm [002引流动相；A ;己膳，B ;0. 1?0. 5%磯酸水溶液，梯度洗脱程序为；0?10min，5%? 8% A ;10 ?27min，8%?12% A ;27 ?35min，12%?12% A ;35 ?70min，12%?17% A ; 70?80min，17%?19%A;80?110min，19%?36%A;110?120min，36%?50%A; (3)将供试品指纹图谱与对照指纹图谱比较，各共有峰保留时间相似度在0. 9 W 上的药材即为独一味；其中，对照指纹图谱中，共有峰14个，W山檐巧甲醋为参照峰，各 共有峰相对保留时间如下；〇. 65、0. 68、0. 77、1、1. 20、1. 26、1. 50、1. 58、2. 44、3. 16、3. 28、 3. 39、3. 72、4. 13。 本专利技术中需要指出，由于独一味中所含的黄丽类成分和苯己醇巧类具有相似的色 谱保留行为，将该两大类成分完全分离具有较大难度，梯度条件变化时，该两类成分的多个 色谱峰相对保留时间变化较大，甚至出现色谱峰位置的互换，因此在同一色谱条件下实现 独一味中的黄丽类成分和苯己醇巧类成分全部达到基线分离是难点。目前公开的独一味色 谱条件，尚无法实现同时对该两类成分的完全分离，更没有同时将环帰離聰巧、苯己醇巧、 黄丽及咖啡醜4类成分有效分离检测的方法。 本专利技术检测方法中，出峰数量较多，分离度良好，基线平稳，能够对独一味进行有 效检测，为保障药材质量提供给了新的选择。本专利技术首次在同一色谱条件下检测出了上述 环帰離聰巧、苯己醇巧、黄丽及咖啡醜4类成分，共指认了 8个具体化合物，可更全面更准确 地用于独一味药材的质量控制。 W下通过实施例形式的【具体实施方式】，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说 明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于W下的实例。凡基于本专利技术上述内容 所实现的技术均属于本专利技术的范围。 【专利附图】【附图说明】 图1样品及对照品色谱图（A、B独一味样品HPLC指纹图谱，C.对照品色谱图），其 中，3.胡麻属巧、4.山檐巧甲醋、5.绿原酸、8.马钱巧9. 8-0-己醜山檐巧甲醋、10.连翅醋 巧B、ll.木犀草巧、12.麦角留巧 图2主成分投影图 图3不同部位指纹图谱比较（A.果序B.地下部分C.地上部分与13号样品来源 相同） 图4不同生长期独一味指纹图谱比较（A.成株B.幼苗与11号样品来源相同） [003。 图5不同胆存时间样品指纹图谱比较（A.胆存1年样-23号样品B.新采样-5号 样品） 图6对比条件1的色谱图 [003引图7对比条件2的色谱图，其中，1.山檐巧甲醋；2.绿原酸；3. 8-0-己醜山檐巧甲 醋；4.连翅醋巧B点芦下；6.麦角留巧；7.木犀草巧 图8迪马钻石Cis柱色谱图 [00；3引 图 9Hypersil 0DS2Ci8 柱色谱图 【具体实施方式】 实施例1本专利技术检测方法 (1)供试品溶液的制备 取独一味（中粉）约0. 6g，精密称定，精密加入70%甲醇30血，称定重量，回流提 取90min，放冷，再称定重量，用溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 (2)对照品溶液的制备 取胡麻属巧、山檐巧甲醋、绿原酸、马钱巧、8-0-己醜山檐巧甲醋、连翅醋巧B、木 犀草巧、麦角留巧对照品适量，精密称定，加75%甲醇配制成含胡麻属巧0.0576111肖/111^山 檐巧甲醋0. 〇695mg/mL、绿原酸0. 0502mg/mL、马钱巧0. 0408mg/mL、8-0-己醜山檐巧甲醋 0. 0524mg/mL、连翅醋巧 BO. 0790mg/mL、木犀草巧 0.本文档来自技高网...

【技术保护点】
独一味的HPLC检测方法，其特征在于：它包括如下操作步骤：(1)取待检药材，以甲醇或含水甲醇提取，制备供试品溶液；(2)将供试品溶液注入高效液相色谱仪中，检测即可，色谱条件如下：色谱柱：十八烷基键合硅胶为填料检测波长：235nm±5nm流动相：A：乙腈，B：0.1～0.5％磷酸水溶液，梯度洗脱程序为：0～10min，5％～8％A；10～27min，8％～12％A；27～35min，12％～12％A；35～70min，12％～17％A；70～80min，17％～19％A；80～110min，19％～36％A；110～120min，36％～50％A。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：古锐，钟世红，
申请(专利权)人：成都中医药大学，
类型：发明
国别省市：四川;51