本发明专利技术涉及一种用于证实液态样品中的细胞的方法，具有下列步骤：i)通过多孔薄膜过滤液态样品，该薄膜适合保留待证实的细胞，其中，载体(1)的至少一部分区域设计成透明的支承体(3)并且薄膜以这样的方式平面地布置在透明的支承体(3)上，使得待证实的细胞保留在薄膜表面的至少一部分上，并且至少一部分的样品液体经过薄膜，ii)施加液态的光学介质，该光学介质具有与支承体基本上相同的折射率，iii)光学检测薄膜的至少一部分面以便探测待证实的细胞。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术涉及一种用于证实液态样品内的细胞的方法以及装置，所述装置可用于实施该方法。显微术是分析化学中的广泛流行的方法。尤其在“生命科学”中，显微术是不可缺少的工具，以便表示例如组织和细胞的特征。已建立目标载体作为待检查的介质与待成像的显微镜构件之间的“接口”。它在此是26*76mm(IS08255-2)的、厚度为I至1.5mm的玻片。目标例如在更薄的层中(组织薄片，液体膜)施加到目标载体上并且大多情况下以盖玻片(通常18mm*18_ ；0.16mm厚)覆盖。过滤技术同样是广为流行的尤其是用于不同大小的固体或液体分离的实验室技术，在结合显微术和过滤技术时，过滤器残渣紧接过滤过程通过显微技术检查。为此，过滤介质，例如过滤器薄膜必须从过滤器装置中提取并且放置在目标载体上。该过程尤其在较薄的薄膜(例如IOym厚度，25mm直径)中需要较高的实验技巧并且非常耗时。若该过程要每日且成本低廉地例如实验在医学诊断中，例如在检查从血样中过滤出的肿瘤细胞时必须开发一种简单且廉价的溶液，该溶液也由未经过训练的人员实施。尤其是分离所选择的单独细胞，例如循环肿瘤细胞，(circulatmg tumor cells mCTCs)或用于下列分子诊断的检查的细胞集合体(Zellveri^nden)基于科学的进步在领域上今后越来越重要。因此，本专利技术所要解决的技术问题是，提供一种光学分析和特异性分离生物学样品的装置和方法，该装置和方法可以通过具有高质量的标准方法使用并且简单地构造，简单地操作以及是成本低廉的。本专利技术所要解决的技术问题尤其是一种用于光学分析并且特异性分离生物学样品的装置和方法，该装置和方法很好地适合之后的显微检查。在此，应当可以使用具有标准紧固件的标准装置的设备，以便可以大批量简单地且廉价地在过滤残渣上实施例如光照显微或荧光显`微检查。尤其是本专利技术所要解决的技术问题是，能够实现在(循环)肿瘤细胞(CTC)的获得和检查中的使用。本专利技术涉及一种按权利要求1所述的方法和按权利要求11所述的装置。在按本专利技术的过滤过程中，通过过滤器，例如过滤器薄膜过滤悬浮液。在此将渗透物挤压通过过滤器并且将保留物保留在过滤器表面上(或也在细孔和过滤器的空穴中)。因此，在过滤过程中，通过该过滤器存在渗透物的现行流动方向，因此会涉及在过滤器的上游区域和下游区域，在该上游区域内保留保留物(其包含作为主要组成部分的细胞)，保留物会被压入该下游区域内并且例如在此聚集。与现行流动方向无关地，在例外情况下，例如在回冲过滤器时也可以使流动方向反向。为了将渗透物挤压通过过滤器，可以产生压差，其中，然后在过滤器上游存在比下游更高的压力。这可以通过下列方式实现:在过滤器上游设置过压、在过滤器下游设施低压或由这两种方式构成的组合。为阻止渗透物流过过滤器(减小到零)，可以将压差设定为零。这与过滤器在空间中的定向无关。此外对于特殊情况，在过滤器上的流动方向垂直地走向或具有垂直的分量(也就是说顺着或逆着地心引力的方向)还要考虑，过滤器上的水柱有助于压差。对于按本专利技术的方法的一些应用优选的是，过滤物在过滤器上的流动方向顺着地心引力的方向延伸。由此保留的保留物位于过滤器的表面，这例如能够实现保留物(细胞)简单的再加工。对于一定的应用优选的是，例如在保留物浮起时或为了使细胞在过滤之后从过滤器的下侧聚集在收集容器中，不是顺着地心引力的方向，而是逆着地心引力的方向过滤。本专利技术涉及一种用于证实在液态样品中的细胞的方法，具有下列步骤:i)通过多孔的薄膜过滤液态样品，该多孔的薄膜适合保留待证实的细胞，其中，载体的至少一部分区域设计成透明的支承体并且其中，薄膜平面地这样布置在透明的支承体上，使得待证实的细胞保留在薄膜表面的至少一个部分上，并且样品液体的至少一部分经过薄膜，ii)施加液态的光学介质,该光学介质基本上具有与支承体相同的折射率，iii)光学检测薄膜的至少一部分面以便探测待证实的细胞。在支承体上可以设置薄膜。该支承体用于支承薄膜并且能够实现排出滤液。薄膜可以支承在支承体上。为此，在支承体的表面中构造通道，以确保滤液的排出。按备选的实施形式，在支承体中也可以提供孔或细孔。支承体可以作为单独的部分构造在载体的凹处中，但它也可以与载体的部分区域成一整体地构造在载体的部分区域内。折射率为真空光速CO与光在介质M中的传播速度CM的比:n=cO/cM折射率是无度量尺寸的数。基本上相等的折射率意味着，折射率差别不大于0.1，优选不大于0.01，更明显优选不大于0.001。载体优选基本上具有显微术目标载体的尺寸。薄膜和支承体例如可以具有基本上正方形、圆形或椭圆形的底面。通过按本专利技术使用与支承体的材料适配的光学介质，明显改善了光学检测。薄膜和支承体优选选择为，使得它们同样具有基本上相等的折射率。按本专利技术的一方面，待证实的细胞在过滤之前或之后标记以含有第一标记物的第一器件，用于标记待证实的细胞。适合用于标记的器件包括可以使非特异性或特异性细胞着色的标记物。非特异性的标记物例如可以是着色剂，该着色剂使蛋白质、核酸或另外的细胞组成部分着色。特异性的标记物可以是例如抗体、特异性寡核苷酸、缩氨酸或另外的分子，它们与蛋白质、核酸序列或另外的细胞特异性的结构特异性地结合。标记物可以用可证实的标记物直接地标记，例如铬精着色剂、荧光着色剂、同位素标记等。备选地，也可以通过二次证实试剂(例如二次抗体或酵素-基质-系统)证实标记物。按本专利技术优选的方面，在该方法中，在过滤之后，在薄膜上的细胞借助着色剂通过用相应过程液体的培养来着色。为此，可以选择使细胞或细胞组成部分着色并且从细胞学和组织学已知的着色剂。这可以是活或死着色剂，使特异性细胞核或另外细胞器着色或使特异性确定细胞成分，例如核酸或蛋白质着色的着色剂。已知的细胞着色剂是例如台盼蓝染色、DAPI和类似物。待证实的细胞可以在薄膜上不着色或着色地还用显微镜分析。薄膜平面地优选位于透明的支承体上并且至少部分地或完全地覆盖该支承体。按本专利技术的一方面，载体是用于显微术的目标载体，该目标载体由玻璃或塑料，尤其是环烯烃类共聚物(COC)或聚碳酸酯构成。优选的COC以商品名称TOPAS?而被熟知。按本专利技术的一方面，支承体结构化和/或是多孔的，并且由塑料、环烯烃类共聚物(COC)或聚碳酸酯，尤其是由与载体相同的材料构成。按本专利技术的一方面，载体和支承体整体地由一主体构成，并且薄膜完全覆盖载体中的凹处并且尤其是平坦地支承在支承体上凹处的区域内。按本专利技术的一方面，支承体包括构造在面朝过滤器薄膜的一侧的通道，该通道与过滤器薄膜流体接触。通道可以构造成在支承体和/或载体中的开口，由此，液体远离薄膜通过支承体或载体流走或吸走。开口例如可以设计成垂直的、从支承体或载体的上侧到下侧的孔。薄膜和支承体可以例如具有基本上正方形的、圆形或椭圆形的底面。开口可以以规则的距离处于底面的边缘上。该优选的装置能够实现滤液均匀的流走。同时，薄膜基本上覆盖支承体，以便在用光学介质填满薄膜和支承体之间的间隙时和即使在用该介质可能填满薄膜细孔时也存在具有同样折射率的光学单元，在该光学单元上可以非常好地用显微镜检验。备选地，这些开口也可以基本上均匀地分布在支承体的底面上。按本专利技术的一方面，薄膜和支承体形成共同的接触面，本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于证实液态样品中的细胞的方法，该方法具有下列步骤：i)通过多孔薄膜过滤所述液态样品，该薄膜适合保留待证实的细胞(9)，其中，载体的至少一部分区域设计成透明的支承体(1)，并且，所述薄膜(5)以这样的方式平面地布置在所述透明的支承体(1)上，使得待证实的细胞(9)保留在所述薄膜的表面的至少一部分上，所述样品液体的至少一部分经过所述薄膜(5)，ii)施加液态的光学介质(11)，所述光学介质(11)基本上具有与所述支承体相同的折射率，iii)光学检测所述薄膜(5)的至少一部分面以便探测待证实的细胞(9)。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.05.20 DE 102011076238.81.一种用于证实液态样品中的细胞的方法，该方法具有下列步骤: i)通过多孔薄膜过滤所述液态样品，该薄膜适合保留待证实的细胞(9)，其中，载体的至少一部分区域设计成透明的支承体(1)，并且，所述薄膜(5)以这样的方式平面地布置在所述透明的支承体(1)上，使得待证实的细胞(9)保留在所述薄膜的表面的至少一部分上，所述样品液体的至少一部分经过所述薄膜(5)， ?)施加液态的光学介质(11)，所述光学介质(11)基本上具有与所述支承体相同的折射率， iii)光学检测所述薄膜(5)的至少一部分面以便探测待证实的细胞(9)。2.按权利要求1所述的方法，其中，在所述过滤之前或之后以包含第一标记物、用于标记所述待证实的细胞的第一器件标记所述待证实的细胞(9)。3.按前述权利要求之一所述的方法，其中，所述载体是用于所述显微术的目标载体，所述目标载体由玻璃或塑料，尤其是环烯烃类共聚物构成，和/或所述支承体(1)结构化，和/或由塑料，尤其是由相同的材料构成多孔的。4.按前述权利要求之一所述的方法，其中，所述载体和所述支承体(1)整体地由一主体构成，所述薄膜(5)完全覆盖所述支承体(1)并且尤其是平坦地支承在所述支承体上。5.按前述权利要求之一所述的方法，其中，所述支承体(1)包括在靠近所述过滤器薄膜的一侧构造的通道(3)，所述通道(3)构造为与所述薄膜(5)流体接触。6.按前述权利要求之一所述的方法，其中，所述薄膜(5)和所述支承体(1)具有多个共同的位于所述接触面的、平面平行的平坦平面内的接触部位，其中，尤其是所述薄膜(5)具有到平坦接触面的小于小于100 μ m的最大距离。7.按前述权利要求之一所述的方`法，其中，所述薄膜(5)是径迹蚀刻过滤器薄膜，该薄膜由聚碳酸酯薄膜构造并且包括直径为2 μ m-100 μ m,尤其是5_10 μ m的细孔。8.按前述权...
【专利技术属性】
技术研发人员：W冈布雷科特，J班杰特，K弗里德里克，K希尔陶斯基，P波利卡，M斯坦泽尔，
申请(专利权)人：西门子公司，
类型：发明
国别省市：德国;DE
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。