使用交叉反应性内分泌糖蛋白激素类似物的清除剂的TSH免疫测定制造技术

本发明专利技术涉及使用ELISA夹心测定进行的促甲状腺激素(TSH)免疫测定，所述夹心测定使用清除或消耗性珠粒来减小由交叉反应性内分泌糖蛋白激素类似物例如滤泡刺激激素(FSH)、促黄体激素(LH)和绒毛膜促性腺激素(CG)引起的干扰。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用交叉反应性内分泌糖蛋白激素类似物的清除剂的TSH免疫测定相关申请的交叉参考本专利技术要求2011年5月27日提交的美国临时申请号61/491，077 (将其完整内容和公开内容通过引用并入本文)的优先权。专利
本专利技术总地来说涉及在具有交叉反应性内分泌糖蛋白激素类似物的系统中进行免疫测定，特别是促甲状腺激素(TSH)免疫测定的方法。该测定受益于包含减小干扰性物质例如内分泌糖蛋白激素类似物的作用的清除剂(scavenging reagents)。专利技术背景最早于1959年开发的免疫测定已成为用于人和兽医学健康以及环境测试的有用的灵敏诊断工具(Wu，2006，Clinica Chimica Acta, 369:119)。其应用已是广泛的并且在本领域是熟知的。存在几个进行免疫测定的方法，本专利技术聚焦在非竞争性或夹心免疫测定上。免疫测定还可被分类为非均相的或均相的。均相测定具有更简单的测定特征，但已被限定于高浓度药物(Engel&Khanna, 1992, Journal of Immunological Methods, 150:99)。非均相测定需要将结合的材料与未结合的材料分离并且是本专利技术的焦点。夹心免疫测定通常作为两步测定来进行，所述测定包括首先将含抗原样品引入共价连接至固体支持物的捕获抗体。然后洗掉非特异性样品组分，留下结合至固体支持抗体的目标抗原。在第二步骤中，将检测或信号抗体引入测定，随后进行另一个洗涤步骤。最后，将检测底物添加至测定中来定量抗原浓度。具有相关洗涤步骤的两步骤免疫测定通常是优选的，因为它们减弱本底信号，从而允许高灵敏性检测。“一步”夹心免疫测定可通过将检测抗体和含抗原样品一起引入共价连接至固体支持物的捕获抗体来进行。洗涤所得的测定以除去未结合的试剂。最后，将检测底物添加至测定以定量抗原浓度。存在对具有有限洗涤液体积的一步测定的需要，因为它们更简单并且需要更少的步骤和更少的相关硬件复杂性来进行操作(特别是在护理现场应用中)。对于护理现场设备，减少或消除对洗涤步骤的需要减少了装置成本和测定时间、硬件成本和复杂度以及一次性装置的尺寸，这继而有益于减少环境中的废弃物以及其成本。迄今为止，具有有限洗涤步骤或无洗涤步骤的一步免疫测定未曾用于抗原，其中内源相关抗原的存在产生混淆检测结果的高本底。当内源抗原以超过目标抗原的高摩尔浓度被发现(这对于一些疾病状况是常见的)时，这尤其如此。有问题的抗原的实例是促甲状腺激素(TSH)，也称为促甲状腺素，其通常与相关的内分泌糖蛋白激素绒毛膜促性腺激素(CG)、促黄体激素(LH)和滤泡刺激激素(FSH)组合地存在。这4种相关激素具有相同的a亚基和高度相似的P亚基(Vassart，2004，Trendsin Biochemical Sciences, 29 (3): 119)。因此，抗a亚基的抗体不区分这4种激素(ffada, 1982, Clinical Chemistry, 28 (9): 1862)。也难以鉴定可区分所述4种相关激素的3 -特异性抗体(特别是在极高浓度的污染性激素存在的情况下)，因为这些激素具有极相似的初级序列(Cornell, 1973，The Journal of Biological Chemistry, 248(12):4327) ?此外，还难以鉴定TSH上的独特(抗原性)表位以及难以获得识别这些独特表位的抗体。对于夹心测定，还很重要的是:使用不重叠的捕获和信号抗体，所述抗体具有适当的特异性特征，这进一步限制了抗体的选择。夹心免疫测定中的洗涤步骤帮助减少反应中的污染性激素的浓度，这减少了与污染性物质相关的信号。因此，不具有洗涤步骤或具有有限洗涤能力的一步夹心免疫测定一直以来在相关污染性激素分子存在的情况下，尤其当污染物以极高浓度存在时，不能特异性检测TSH。参见，例如，US20080311676，其描述了在免疫测定中使用洗涤步骤来减少交叉反应性物质的浓度的重要性。解决这些问题的努力可见于Hashida等人1986，AnalyticalLetters, 19，1121-36; Soos 等人，1984，Journal of Immunological Methods, 73，237;和Lode 等人,2003Clinical Biochemistry, 36, 121 中。EP173973描述了用于TSH的测定的方法，其中使用具有特定缔合常数值的抗-(6-亚基TSH单克隆抗体。相关EP212522描述了特征在于TSH-P亚基特异性单克隆抗体识别不同表位的测定。该方法寻求减小因其它糖蛋白激素例如LH、CG和FSH存在而导致的抑制。存在对具有减少的或消除的洗涤能力的一步骤夹心免疫测定(特别是用于护理现场测定的那些免疫测定)，以及特别地用于检测TSH的一步夹心免疫测定的需要。此外，存在对鉴定能够进行这样的免疫测定的抗体试剂的需要。专利技术概述本专利技术涉及用于检测液体样品中的促甲状腺激素(TSH)，同时使由高度相关的内源内分泌糖蛋白激素滤泡刺激激素(FSH)、促黄体激素(LH)和绒毛膜促性腺激素(CG)引起的干扰降至最低的装置、免疫测定和方法。在一个实施方案中，本专利技术是TSH夹心免疫测定，包括至少两种表位相容性抗体，包括至少一种捕获抗体和至少一种信号抗体，其中两种抗体对于TSH的解离常数(Kd)小于InM或为约InM，例如不超过0.5nM或不超过0.15nM，并且其中测定还包括利用针对滤泡刺激激素FSH、LH和CG的珠粒抗体涂覆的清除珠粒(scavenger bead),其中每一种珠粒抗体对于FSH、LH和CG的Kd分别小于约InM，并且每一种所述FSH、LH和CG抗体对于TSH的Kd大于250nM。在另一个实施方案中，本专利技术是用于进行TSH免疫测定的方法，该方法包括步骤:(a)将液体样品插入于导管中包含免疫传感器的装置，所述免疫传感器具有针对TSH的捕获抗体；(b)将信号抗体溶解入所述液体样品中；(c)利用针对FSH、LH和CG中的一个或多个的清除珠粒修正所述液体样品；(d)在所述免疫传感器上形成夹心复合物，所述复合物包含所述捕获抗体、TSH和所述信号抗体；(e)利用洗涤液从传感器洗掉未复合的信号抗体；和(f)检测，例如光学地或电化学地检测，与所述复合的信号抗体相关的信号。在优选实施方案中，捕获抗体和信号抗体各自具有不超过0.15nM的对于TSH的解离常数(Kd)。捕获抗体对于FSH的Kd值大于1000nM,大于2500nM或大于3000nM，并且信号抗体对于FSH的Kd值大于250nM或大于1000nM。优选地，捕获抗体对于LH的Kd大于500nM，大于IOOOnM或大于3000nM，并且捕获抗体对于CG的Kd大于200nM，大于500nM或大于2500nM。信号抗体对于LH的Kd优选大于35nM，大于200nM或大于250nM，并且信号抗体对于CG的Kd优选大于35nM或大于250nM。清除珠粒可任选地是磁性或非磁性的。当清除珠粒是磁性的时候，方法优选还包括在施加磁场后将所述清除珠粒保留在保留区域中的步骤。保留区域优选是免疫传感器的上游。在一个方面，清除珠粒包含具有小于约0.15nM的对于FSH、LH和CG的每一个的Kd和本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种促甲状腺激素(TSH)夹心免疫测定，其包括至少两种表位相容性抗体，包含至少一种捕获抗体和至少一种信号抗体，其中两种抗体对于TSH的解离常数(Kd)均小于1nM或为约1nM，并且其中该测定还包括以针对滤泡刺激激素(FSH)、促黄体激素(LH)和绒毛膜促性腺激素(CG)的珠粒抗体涂覆的清除珠粒，其中每一种珠粒抗体对于FSH、LH和CG的Kd分别小于约1nM，并且每一种所述FSH、LH和CG抗体对于TSH的Kd大于250nM。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.05.27 US 61/491,0771.一种促甲状腺激素(TSH)夹心免疫测定，其包括至少两种表位相容性抗体，包含至少一种捕获抗体和至少一种信号抗体，其中两种抗体对于TSH的解离常数(Kd)均小于InM或为约InM，并且其中该测定还包括以针对滤泡刺激激素(FSH)、促黄体激素(LH)和绒毛膜促性腺激素(CG)的珠粒抗体涂覆的清除珠粒，其中每一种珠粒抗体对于FSH、LH和CG的Kd分别小于约InM，并且每一种所述FSH、LH和CG抗体对于TSH的Kd大于250nM。2.权利要求1的免疫测定，其中捕获抗体和信号抗体各自具有不超过0.5nM的对于TSH 的 Kd03.权利要求1的免疫测定，其中捕获抗体和信号抗体各自具有不超过0.15nM的对于TSH 的 Kd04.权利要求1的免疫测定，其中捕获抗体对于TSH的Kd小于0.15nM并且捕获抗体对于FSH、LH和CG的Kd分别大于1000nM,大于1000nM和大于500nM。5.权利要求1的免疫测定，其中信号抗体对于TSH的Kd小于0.15nM并且信号抗体对于FSH、LH和CG的Kd分别大于300nM，大于35nM和大于35nM。6.权利要求1的免疫测定，其中所述免疫测定使用单个洗涤步骤。7.权利要求1的免疫测定，其中所述清除珠粒是非磁性的。8.权利要求1的免疫测定，其中所述清除珠粒是磁性的。9.一种用于进行TSH免疫测定的方法，所述方法包括步骤: (a)将液体样品插入于导管中包含免疫传感器的装置，所述免疫传感器具有针对TSH的捕获抗体； (b)将信号抗体溶解进入所述液体样品； (c)利用针对滤泡刺激激素(FSH)、促黄体激素(LH)和绒毛膜促性腺激素(CG)中的一种或多种的清除珠粒修正所述液体样品； (d)在所述免疫传感器上形成夹心复合物，所述复合物包含所述捕获抗体、TSH和所述信号抗体； (e)利用洗涤液从传感器洗掉未复合的信号抗体；和 (f)检测与所述复合信号抗体相关的信号。10.权利要求9的方法，其中所述清除珠粒是磁性的，所述方法还包括在施加磁场后将所述清除珠粒保留在保留区域的步骤。11.权利要求9的方法，其中所述清除珠粒包含具有对于FSH、LH和CG的每一种小于约0.15nM的Kd和大于约250nM的Kd(TSH)的珠粒抗体。12.权利要求9的方法，其中所述清除珠粒包含用于清除FSH的第一清除珠粒、用于清除LH的第二清除珠粒以及用于清除CG的第三清除珠粒。13.权利要求9的方法，其中捕获抗体和信号抗体各自具有不超过...

【专利技术属性】
技术研发人员：G·B·科里尔，J·E·欧马科尔，
申请(专利权)人：雅培医护站股份有限公司，
类型：
国别省市：