抗c-Met抗体制造技术

本发明专利技术涉及特异性地与人c-Met受体蛋白结合并且充当肝细胞生长因子(HGF)介导的c-Met受体活化的严格拮抗剂以及也抑制非HGF依赖性人c-Met蛋白活化的抗体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗c-Met抗体
本专利技术涉及特异性地与人c-Met受体蛋白结合并且充当肝细胞生长因子(hepatocytegrowthfactor，HGF)介导的c-Met受体活化的严格拮抗剂和/或抑制非HGF依赖性c-Met受体活化的抗体。
技术介绍
受体酪氨酸激酶c-Met及其配体肝细胞生长因子(HGF)已成为靶向癌症治疗的主要候选。c-Met是肝细胞生长因子(HGF)的细胞表面受体，也称为分散因子。c-Met受体是由胞外α链和β链组成的以二硫键连接的异二聚体。α链异二聚到β链的氨基末端部分，形成胞外结构域中主要的配体结合位点。HGF结合诱导c-Met受体同二聚作用和催化位点中两个酪氨酸残基(Y1234和Y1235)磷酸化，调节激酶活性。HGF介导c-Met活化导致称为“侵袭性生长”的复杂遗传程序，该程序由在正常生理条件下的胚胎发育过程中以及病理地肿瘤发生过程中发生的一系列生理过程(包括增殖、侵袭和血管生成)组成。经c-Met的信号转导通过多种下游效应子促进增殖和细胞存活。在肿瘤细胞中，c-Met活化引起多个系列的信号转导级联的引发，导致细胞生长、增殖、侵袭和免受细胞凋亡。c-Met致瘤性的基本生物学机制通常以3种不同方式得到：(a)HGF/c-Met自分泌环的建立；(b)通过c-Met或HGF过表达；和(c)c-Met受体编码序列中激酶活化突变的存在。已在大多数实体肿瘤的肿瘤活检中观察到HGF和c-Met表达，并且c-Met信号转导记载于广泛范围的人恶性肿瘤中，包括膀胱癌、乳腺癌、子宫颈癌、结直肠癌、胃癌、头颈癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肾癌和甲状腺癌。c-Met被其配体HGF的活化可以旁分泌或自分泌方式发生。在异常HGF产生的存在下，旁分泌活化可变为病理性。在肿瘤细胞异常表达HGF及其受体二者时发生自分泌活化。另外，c-Met活化可以非HGF依赖性方式发生，由c-Met同二聚作用介导。广泛范围的人恶性肿瘤表现出持续c-Met刺激、过表达或突变，包括乳腺癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、肾癌和甲状腺癌。在有特定遗传类型的乳头状肾癌的患者中鉴定出了阳性的c-Met活化突变，直接表明c-Met参与肿瘤发生。由c-Met受体的调节异常或其配体HGF的过表达引起的c-Met信号转导通路的异常信号转导与侵袭性的表型相关。c-Met信号转导参与若干癌症的进展和扩散的大量证据和对其在疾病中的作用的加深理解使得对c-Met和HGF在癌症药物开发中作为主要靶标产生了相当大的兴趣(Eder等，ClinCancerResearch；15(7)；2009)。具有潜在临床应用的许多c-Met通路拮抗剂目前在进行临床研究。潜在c-Met拮抗剂包括阻断c-Met与其配体HGF相互作用的单克隆抗体。最深入描述的是由Genentech(WO96/38557)产生的抗-c-Met5D5抗体。当单独添加时，5D5在多种模型中单独添加时起有效激动剂的作用，而当用作Fab片段或单臂抗体(MetMab)时起拮抗剂的作用。WO2009/007427描述了c-Met的小鼠单克隆抗体和嵌合变体，在所述嵌合变体中小鼠单克隆抗体的抗原结合结构域或其人源化变体与人IgG1的恒定区偶联。但是，虽然最初小鼠单克隆抗体224G11表现出拮抗剂活性而没有显著的内在激动剂活性，但是224G11的抗原结合结构域与人IgG1的偶联产生了嵌合形式的224G11，其表现出与降低的拮抗剂效力相关的一些激动剂活性。可以通过在人IgG1的重链铰链结构域中进行工程点突变来回复(reverse)嵌合形式的224G11所表现出的激动剂活性。在该改造变体中，铰链区中的若干人源氨基残基被发生在鼠IgG1序列中对应位置处的鼠残基所替代。所得改造变体的c-Met受体拮抗剂活性恢复，但与人抗体的总体结构同源性和序列同源性因铰链区所需的突变而降低。此外，224G11中的至少一个高变环采用未见于人抗体库的典型结构。WO2007/126799描述了c-Met的全人单克隆抗体。这些抗体起到与HGF相互作用的拮抗剂的作用，但未示出关于这些抗体的内在激动剂活性或其抑制c-Met二聚作用的能力的数据。WO2010/059654也描述了单克隆c-Met抗体。这些抗体的特征在于与人c-Met的α链结合并且诱导细胞表面人c-Met的内化。专利技术描述本文提供了分离的抗体，或其抗原结合片段，其特异性地与人c-Met蛋白结合，其中所述抗体表现出下述特性中的至少两个或全部三个：(a)是HGF介导人c-Met蛋白活化的严格拮抗剂，(b)抑制非HGF依赖性人c-Met蛋白活化，和(c)不诱导细胞表面人c-Met蛋白的显著下调。在一个实施方案中，提供了分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性地与人c-Met蛋白结合，其中所述抗体表现出下述特性：(a)是HGF介导人c-Met蛋白活化的严格拮抗剂，(b)抑制非HGF依赖性人c-Met蛋白活化。在一个实施方案中，提供了分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性电极与人c-Met蛋白结合，其中所述抗体表现出下述特性：(a)是HGF介导人c-Met蛋白活化的严格拮抗剂，和(c)不诱导细胞表面人c-Met蛋白的显著下调。在一个实施方案中，提供了分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性地与人c-Met蛋白结合，其中所述抗体表现出下述特性：(b)抑制非HGF依赖性的人c-Met蛋白活化，和(c)不诱导细胞表面人c-Met蛋白的显著下调。在另一实施方案中，提供了分离的抗体，或其抗原结合片段，其特异性地与人c-Met蛋白结合，其中所述抗体表现出全部下述特性：(a)是HGF介导人c-Met蛋白活化的严格拮抗剂，(b)抑制非HGF依赖性的人c-Met蛋白活化，和(c)不诱导细胞表面人c-Met蛋白的显著下调。在一个特定实施方案中，所述抗体或抗原结合片段可以与人c-Met蛋白的IPT区中的表位、特别是人c-Met蛋白的IPT结构域1-2、2-3或3-4中的表位结合，或者与人c-Met蛋白的PSI-IPT1区中的表位结合。在另一实施方案中，所述抗体或抗原结合片段可以与所述人c-Met蛋白的PSI-IPT1区中的氨基酸序列523-RSEECLSGTWTQQICLPAIYKVFPNSAPLEGGTRLTICGWDFGFRRNNKFDLKKTRVLLGNESCTLTLSESTMNTLKCTVGPAMNKHFNMSIIISNGHGTTQYSTFSYVDP-633(SEQIDNO：136)中的表位结合。在又一实施方案中，所述抗体或抗原结合片段可以阻断HGF与人c-Met蛋白的高亲和力HGF结合位点的结合。在又一实施方案中，提供了这样的抗体或其抗原结合片段：(a)与人c-Met蛋白的SEMA结构域中的表位结合，(b)不诱导细胞表面人c-Met蛋白的显著下调。在一个示例性实施方案中，该抗体或其抗原结合片段与人c-Met的SEMA结构域中的肽98-VDTYYDDQLISCGSVNRGTCQRHVFPHNHTADIQSEVHCIFSPQIEEPSQCPDCVVSALGAKVLSSVKDRFINFFVGNTINSSYFPDHPLHSISVRRLKETK-199(SEQIDNO：181)中的表位相结合。该抗体或抗原结合片段可以阻断本文档来自技高网...

【技术保护点】
分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性地与人c?Met蛋白结合，其中所述抗体或其抗原结合片段表现出下述特性中的至少两个或全部三个：(a)是HGF介导人c?Met蛋白活化的严格拮抗剂，(b)抑制非HGF依赖性的人c?Met蛋白活化，以及(c)不诱导细胞表面人c?Met蛋白的显著下调。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.11.03 US 61/409,8661.分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段特异性地结合人c-Met蛋白，所述抗体或其抗原结合片段包含含有CDR3、CDR2和CDR1的重链可变结构域，以及含有CDR3、CDR2和CDR1的轻链可变结构域，其中：所述可变重链CDR3序列为SEQIDNO:21；所述可变重链CDR2序列选自SEQIDNO:20、SEQIDNO:83和SEQIDNO:84；所述可变重链CDR1序列是SEQIDNO:19；所述可变轻链CDR3序列是SEQIDNO:33；所述可变轻链CDR2序列是SEQIDNO:32；以及所述可变轻链CDR1序列是SEQIDNO:31。2.根据权利要求1所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中：所述可变重链CDR3序列是SEQIDNO:21；所述可变重链CDR2序列是SEQIDNO:83；所述可变重链CDR1序列是SEQIDNO:19；以及所述可变轻链包含CDR3、CDR2和CDR1，其中：所述可变轻链CDR3序列是SEQIDNO:33；所述可变轻链CDR2序列是SEQIDNO:32；所述可变轻链CDR1序列是SEQIDNO:31。3.根据权利要求2所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变结构域（VH）由如SEQIDNO:94所示的氨基酸序列组成，或者由与SEQIDNO:94具有至少85%、或至少90%、或至少95%、或至少97%、或至少99%序列同一性的序列组成，其中所述可变重链CDR3序列是SEQIDNO:21，所述可变重链CDR2序列是SEQIDNO:83，以及所述可变重链CDR1序列是SEQIDNO:19；并且所述轻链可变结构域（VL）由如SEQIDNO:95所示的氨基酸序列组成，或者由与SEQIDNO:95具有至少75%、或至少80%、至少85%、或至少90%、或至少95%、或至少97%、或至少99%序列同一性的序列组成，其中所述可变轻链CDR3序列是SEQIDNO:33，所述可变轻链CDR2序列是SEQIDNO:32以及所述可变轻链CD...

【专利技术属性】
技术研发人员：安娜·胡尔特贝里，迈克尔·桑德斯，乔纳斯·德哈德，艾丽斯·费斯特延斯，纳塔利·德扬，保罗·米基耶利，克里斯蒂娜·巴西利科，托尔斯滕·德赖尔，
申请(专利权)人：阿尔金X公司，
类型：
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