一种草莓中ABA提取与测定的方法技术

本发明专利技术提供一种草莓中ABA提取与测定的方法，其利用体积比为50∶50∶1的甲醇、乙酸乙酯及甲酸形成的混合液作为提取溶剂，能够在较短的时间内提取草莓果肉中的ABA成分，再经抽滤弃去残渣，将所得滤液置于35℃下减压旋蒸至干，接着加入超高效液相色谱的流动相溶解，收集溶液，过0.22μm滤膜得草莓ABA的提取液；把所得提取液注入设定好色谱条件的超高效液相色谱仪中进行测定分析。本发明专利技术具有提取速度快、测定精密度高、灵敏度强、重复性好的特点，且测定的结果准确可靠、试剂用量少，从而大大提高了测定速度和减少了溶剂消耗。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术提供一种草莓中ABA提取与测定的方法，其利用体积比为50∶50∶1的甲醇、乙酸乙酯及甲酸形成的混合液作为提取溶剂，能够在较短的时间内提取草莓果肉中的ABA成分，再经抽滤弃去残渣，将所得滤液置于35℃下减压旋蒸至干，接着加入超高效液相色谱的流动相溶解，收集溶液，过0.22μm滤膜得草莓ABA的提取液；把所得提取液注入设定好色谱条件的超高效液相色谱仪中进行测定分析。本专利技术具有提取速度快、测定精密度高、灵敏度强、重复性好的特点，且测定的结果准确可靠、试剂用量少，从而大大提高了测定速度和减少了溶剂消耗。【专利说明】—种草莓中ABA提取与测定的方法【
】本专利技术涉及一种植物中成分提取与测定的方法，尤其涉及一种草莓中ABA提取与测定的方法。【
技术介绍
】脱落酸(Abscisic acid，ABA)是调节植物生长的重要内源激素之一，广泛存在高等植物中。脱落酸能抑制植物细胞分裂和种子萌发，促进芽和种子休眠，以及促进叶和果实的衰老和脱落等。草莓(Fragaria ananassa Duch)属典型的非呼吸跃变型果实,其成熟调控以及采后保鲜困难一直是生产、运输及销售过程中的一个难题。ABA是否对草莓成熟过程起着关键调控作用是当今研究的一个热点。准确测定草莓中ABA的含量，研究其变化规律，对于探索果实成熟及贮藏保鲜具有重要意义。从植物组织中提取ABA是对其进行定性定量分析的首要步骤，目前主要的提取方法是用80%甲醇溶液过夜浸提，但浸提法存在着浸提时间长，一般需18-23小时，提取步骤复杂，过多的操作影响了 ABA的回收率等缺点。所以甲醇浸提法提取ABA总体效率不高，因此改进提取步骤是对ABA进行精细分析的重要研究内容之一。测定植物内源激素的方法众多，近些年比较常用的是高效液相色谱法分析(High performanceliquid chromatography, HPLC)。超高效液相色谱(Ultra performance liquidchromatography, UPLC)是在HPLC基础上推出的一种新的液相色谱技术，具有比HPLC更高的分离速度和灵敏度，目前主要应用在蛋白组学、药物分析、环境监测等众多高端领域。但利用UPLC测定分析草莓ABA的研究中还未见报道。【
技术实现思路
】 本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种草莓中ABA提取与测定的方法，不仅具有较高的提取效率，而且建立了采用超高效液相色谱法测定ABA的体系。本专利技术是通过以下技术方案解决上述技术问题的:一种草莓中ABA提取与测定的方法，该方法具体操作如下:(I)标准溶液的制备:称取ABA对照品，之后采用色谱纯甲醇进行溶解并定容以获得标准溶液的母液，该母液的浓度为2.5mg/mL，然后将母液稀释成不同浓度梯度的标准溶液；(2)提取液的制备:称取草莓果肉，采用液氮将其研磨至粉末状，之后置具塞锥形瓶中，并加入提取溶剂，且每克草莓果肉需加入40mL提取溶剂，剧烈震荡提取5min后，抽滤弃去残渣，将所得滤液置于35°C下减压旋蒸至干，接着加入超高效液相色谱的流动相溶解，收集溶液即得草莓ABA的提取液，将所得提取液过0.22 μ m滤膜得待测液；其中，所述提取溶剂的组分及其体积比为:甲醇:乙酸乙酯:甲酸=50:50:1 ；( 3 )超高效液相色谱检测:在色谱柱上，以体积比为20:10:70的甲醇-乙腈-0.1%甲酸为流动相，等梯度洗脱分离出ABA，色谱条件如下:检测仪器:超高效液相色谱仪；色谱柱:ACQUITYUPLC BEH C18 规格为 2.1mmX 100mm, 1.7u m 的色谱柱；流动相:甲醇-乙腈-0.1%甲酸；流速:0.3ml/min ；检测波长:265nm;进样体积:IOul ;柱温:30O;(4)测定:分别取制备获得的标准溶液及待测液，并采用上述色谱条件进行进样检测，记录色谱图，经过色谱仪器自带软件积分得到峰面积，计算得到待测液中ABA的含量。进一步地，所述母液保存于_20°C下待用。本专利技术一种草莓中ABA提取与测定的方法的有益效果在于:提供了一种适用于草莓ABA提取与采用超高效液相色谱法对提取的ABA提取液进行测定的方法，且该方法大大缩短了从草莓果肉中提取ABA的时间，提高了提取效率，而且在 申请人:设定的色谱条件下进行超高效液相色谱法测定ABA提取液，具有测定精密度高、灵敏度强、重复性好的特点，且测定的结果准确可靠、试剂用量少，从而大大提高了测定速度和减少了溶剂消耗。【【专利附图】【附图说明】】`下面参照附图结合实施例对本专利技术作进一步的描述。图1是本专利技术中ABA标准溶液的超高效液相色谱图。图2是本专利技术中实施例一待测液的超高效液相色谱图。图3是本专利技术中实施例二待测液的超高效液相色谱图。【【具体实施方式】】结合如下实施例对本专利技术一种草莓中ABA提取与测定的方法进行进一步说明。且各实施例中所采用的仪器与试剂如下:超高效液相色谱仪为美国WATERS ACQUITY UPLCH-Class，包括四元溶剂管理器、自动进样器、柱温箱、PDA检测器以及Empower色谱工作站；ABA对照品为美国Sigma公司产品；乙睛和甲醇为色谱纯，来自Fisher公司；其他试剂均为分析纯。实施例一1、标准溶液的制备:称取25mg ABA对照品，加入IOmL色谱纯甲醇进行溶解并定容，以制成浓度为2.5mg/mL的标准溶液母液(需要说明的是，当配成的母液未立即使用时，需将其放置于-20°C下进行保存)，然后将母液分别稀释成0.1、0.25,0.5,0.75、1、2.5、及5 μ g/mL7个浓度梯度；2、提取液的制备:称取5g草莓青果果肉，采用液氮将其研磨至粉末状，之后置具塞锥形瓶中，并加入200mL提取溶剂(甲醇、乙酸乙酯、甲酸按50:50:1体积比混合而成)，剧烈震荡提取5min后，抽滤弃去残渣，将所得滤液置于35°C下减压旋蒸至干，接着加入超高效液相色谱的流动相溶解，收集溶液即得草莓ABA的提取液，将所得提取液过0.22 μ m滤膜得待测液；( 3 )超高效液相色谱检测:在色谱柱上，以体积比为20:10:70的甲醇-乙腈-0.1%甲酸为流动相，等梯度洗脱分离出ABA，色谱条件如下:检测仪器:超高效液相色谱仪；色谱柱:ACQUITYUPLC BEH C18 规格为 2.1mmX 100mm, 1.7u m 的色谱柱；流动相:甲醇-乙腈-0.1%甲酸；流速:0.3ml/min ；检测波长:265nm；进样体积:IOul ;柱温:30°C;4、测定:分别取制备获得的标准溶液及待测液注入上述色谱条件的超高效液相色谱仪中进行分析测定，得到ABA对照品的回归方程及样品的超高效液相色谱图，具体地，回归方程:y=98200x-2160，R2=0.9987 (x进样浓度，y峰面积);标准溶液的超高效液相色谱图如图1所示，待测液的超高效液相色谱图如图2所示(图2中的a为截断线)，且经过色谱仪器自带软件积分得峰面积，计算得到待测液中ABA的含量为0.23ug/g。为了不重复累赘，对以下实施例仅针对不同点进行阐述说明。实施例二提取液的制备:称取IOg草莓红果果肉，采用液氮将其研磨至粉末状，之后置具塞锥形瓶中，并加入400mL提取溶剂(甲醇、乙酸乙酯、甲本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种草莓中ABA提取与测定的方法，其特征在于：该方法具体操作如下：（1）标准溶液的制备：称取ABA对照品，之后采用色谱纯甲醇进行溶解并定容以获得标准溶液的母液，该母液的浓度为2.5mg/mL，然后将母液稀释成不同浓度梯度的标准溶液；（2）提取液的制备：称取草莓果肉，采用液氮将其研磨至粉末状，之后置具塞锥形瓶中，并加入提取溶剂，且每克草莓果肉需加入40mL提取溶剂，剧烈震荡提取5min后，抽滤弃去残渣，将所得滤液置于35℃下减压旋蒸至干，接着加入超高效液相色谱的流动相溶解，收集溶液即得草莓ABA的提取液，将所得提取液过0.22μm滤膜得待测液；其中，所述提取溶剂的组分及其体积比为：甲醇：乙酸乙酯：甲酸＝50：50：1；（3）超高效液相色谱检测：在色谱柱上，以体积比为20：10：70的甲醇?乙腈?0.1%甲酸为流动相，等梯度洗脱分离出ABA，色谱条件如下：检测仪器：超高效液相色谱仪；色谱柱：ACQUITY?UPLC?BEH?C18规格为2.1mm×100mm,1.7u?m的色谱柱；流动相：甲醇?乙腈?0.1%甲酸；流速：0.3ml/min；检测波长：265nm；进样体积：10ul；柱温：30℃；（4）测定：分别取制备获得的标准溶液及待测液，并采用上述色谱条件进行进样检测，记录色谱图，经过色谱仪器自带软件积分得到峰面积，计算得到待测液中ABA的含量。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：朱海生，马宏棋，温庆放，
申请(专利权)人：福建省农业科学院作物研究所，
类型：发明
国别省市：