本发明专利技术公开了一种建立金黄色葡萄球菌感染的糖尿病足溃疡大鼠实验模型的方法，包括下述步骤：大鼠经高脂饲料喂养8周后，注射链脲佐菌素，制成糖尿病模型，稳定后在大鼠皮肤上制成深II度烫伤，三天后，每个溃疡处皮下注射菌株为金黄色葡萄球菌混悬液。此外，本发明专利技术还公开了一种用于建立金黄色葡萄球菌感染的糖尿病足溃疡大鼠实验模型的试剂盒，该试剂盒包括金黄色葡萄球菌混悬液。本发明专利技术的糖尿病溃疡实验动物模型通过对药物干预后生化指标的变化的检测，结果表明，本模型具有糖尿病足溃疡伴发革兰氏阳性菌感染的特征，溃疡创面愈合时间较长，对药物反应敏感等特点。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种建立金黄色葡萄球菌感染的糖尿病足溃疡大鼠实验模型的方法，包括下述步骤：大鼠经高脂饲料喂养8周后，注射链脲佐菌素，制成糖尿病模型，稳定后在大鼠皮肤上制成深II度烫伤，三天后，每个溃疡处皮下注射菌株为金黄色葡萄球菌混悬液。此外，本专利技术还公开了一种用于建立金黄色葡萄球菌感染的糖尿病足溃疡大鼠实验模型的试剂盒，该试剂盒包括金黄色葡萄球菌混悬液。本专利技术的糖尿病溃疡实验动物模型通过对药物干预后生化指标的变化的检测，结果表明，本模型具有糖尿病足溃疡伴发革兰氏阳性菌感染的特征，溃疡创面愈合时间较长，对药物反应敏感等特点。【专利说明】建立金黄色葡萄球菌感染的糖尿病足溃疡大鼠实验模型的方法及试剂盒
本专利技术属实验动物模型领域，具体涉及一种建立金黄色葡萄球菌感染的糖尿病足溃疡大鼠实验模型的方法及试剂盒。
技术介绍
随着我国的糖尿病发病率急剧升高，糖尿病溃疡患者的数量也随之增加，在动物整体水平建立真实模拟糖尿病溃疡的疾病模型，是探讨糖尿病溃疡发病机制及临床前药效学评价等医学研究的必要条件，具有十分重要的科学意义和临床意义。目前糖尿病足溃疡动物模型多为诱发性动物模型。文献研究结果显示，现有糖尿病足溃疡的动物模型多模拟单一发病因素(如外周动脉病变，神经病变或感染)，同时动物模型与实际模拟相似程度与研究目的存在较大的差距，而实际上二种以上因素的复合致病在临床上更为普遍。因此，多因素复合的糖尿病足溃疡动物模型更能模拟临床实际的发病情况。因此，根据临床实际的发病特征及病理改变建立模拟程度较高的动物模型对于糖尿病溃疡的发病机制的研究及相关的手术，药物等干预的疗效评价具有重要的实际意义。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题之一是提供一种可重复性高，稳定，疾病模拟程度高，便于评价的金黄色葡萄球菌感染的糖尿病足溃疡大鼠实验动物模型的建立方法。本专利技术要解决的技术问题之二是提供一种用于建立金黄色葡萄球菌感染的糖尿病足溃疡大鼠实验模型的试剂盒。本专利技术要解决的技术问题之三是提供一种上述试剂盒在建立金黄色葡萄球菌感染的糖尿病足溃疡大鼠实验模型中的应用。在本专利技术的一方面，提供一种建立金黄色葡萄球菌感染的糖尿病足溃疡大鼠实验模型的方法，包括下述步骤:大鼠经高脂饲料喂养8周后，注射链脲佐菌素，制成糖尿病模型，稳定后在大鼠皮肤上制成深II度烫伤，三天后，每个溃疡处皮下注射菌株为金黄色葡萄球菌混悬液。作为优选的技术方案，所述金黄色葡萄球菌混悬液包括金黄色葡萄球菌-ATCC25923和稀释液，该金黄色葡萄球菌混悬液的浓度为I X IO8Ufc.ml—1，该稀释液为PBS 液。作为优选的技术方案，所述注射金黄色葡萄球菌混悬液感染后24小时候去创面做病原微生物及药敏检测， 用于确定细菌定植情况。作为优选的技术方案，所述注射链脲佐菌素具体为:1.5%链脲佐菌素溶解于PH值4.5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液在大鼠左下腹注射。作为优选的技术方案，所述高脂饲料包含以下重量百分比的组分:基础饲料73 %，猪油20 %，奶粉2 %，胆固醇I %，蔗糖4%;所述基础饲料由以下重量百分比的组分组成:大麦15%，小麦31%，玉米15%，麸皮15%,鱼粉6%，豆柏、油和盐共18%。在本专利技术的另一方面，提供一种用于建立金黄色葡萄球菌感染的糖尿病足溃疡大鼠实验模型的试剂盒，该试剂盒包括金黄色葡萄球菌混悬液。作为优选的技术方案，所述金黄色葡萄球菌混悬液包括金黄色葡萄球菌-ATCC25923和稀释液，该金黄色葡萄球菌混悬液的浓度为I X IO8Ufc.ml—1，该稀释液为PBS 液。作为优选的技术方案，所述试剂盒还包括1.5%链脲佐菌素，PH值4.5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，注射器，无菌拭子，无菌手套，安尔碘液。在本专利技术的另一方面，还提供上述试剂盒在建立金黄色葡萄球菌感染的糖尿病足溃疡大鼠实验模型中的应用。本专利技术实验动物模型属于复合制备糖尿病足溃疡大鼠模型，模型制备分为三个阶段，各有其具体的制备方法及评价方法，具体分为糖尿病模型制备阶段，溃疡模型制备阶段，复合感染模型制备阶段。本专利技术的糖尿病溃疡实验动物模型通过对药物干预后生化指标的变化的检测，结果表明，本模型具有2性糖尿病足慢性溃疡的特征，金黄色葡萄球菌感染的糖尿病足溃疡创面愈合时间较普通溃疡的愈合时间更长，对药物反应敏感等特点。【专利附图】【附图说明】 图1是本专利技术实施例1中糖尿病足溃疡大鼠动物模型制作方法流程图。图2是本专利技术实施例1中大鼠烫伤后的病理切片HE染色示意图。【具体实施方式】本专利技术的模型制备及验证通过下述实验证实:实施例1运用高脂饲料配合链脲佐菌素诱导的大鼠2型糖尿病，使用烫伤仪制成深II度烫伤诱导皮肤溃疡，采用皮下注射质控菌金黄色葡萄球菌-ATCC25923 (Staphylococcusaureus)株制成糖尿病足溃瘍感染大鼠模型。I材料和方法1.1动物:SD雄性大鼠，SPF级，体重(180±10)g，由上海中医药大学实验动物中心提供。1.2主要试剂及药物:链脲佐菌素(Streptozotocin, STZ),购自Alexis公司；高脂饲料(成份:基础饲料73 %，猪油20 %，奶粉2 %，胆固醇I %，蔗糖4 % ;其中基础饲料配方:大麦15%，小麦31%，玉米15%，麸皮15%，鱼粉6%，豆柏、油和盐共18%，该基础饲料购自中国人民解放军海军医学研究所)，高脂饲料的制备方法为:首先，将大麦15%，小麦31%，玉米15%，麸皮15%，鱼粉6%按比例搅拌混合均匀后，加入豆柏、油、盐混匀后加压成型制成基础饲料，然后，将基础饲料73 %，猪油20 %，奶粉2 %，胆固醇I %，蔗糖4%按比例搅拌混合均匀后加压成型制成高脂饲料，成品为圆柱块状；质控菌株金黄色葡萄球菌-ATCC25923 (Staphylococcus aureus)，由曙光医院病原微生物室提供，原始来源:购自美国模式培养物集存库(American type culture collection),间接来源为:上海市疾病预防控制中心国际实验工作站；外用重组牛碱性成纤维细胞生长因子(商品名:贝复济，Recombinant Bovine Basic Fibroblast Growth Factor For External Use,rb_bFGF),珠海亿胜生物制药有限公司，国药准字S10980077。安尔碘液(遗弃菌液灭活使用)；lml注射器，无菌拭子，无菌手套。1.3主要仪器:烫伤仪SQL-5Q烫伤仪，上海欣软信息科技有限公司。1.4方法:60只大鼠随机分为正常溃疡组(N)(12只)，糖尿病对照组(DM) (12只)，糖尿病溃疡组(DU) (12只)，金葡菌对照组(SD-C) (12只)，金葡菌治疗组(SD-T) (12只)。正常溃疡组普通饲料喂养；糖尿病对照组及金葡菌对照组、金葡菌治疗组高脂饲料饲养8周，空腹24小时后，腹腔注射1.5%STZ35mg.kg_S 3天后尾静脉取血测量血糖>16.7mmol.?Λ制成糖尿病模型；模型组血糖>16.7mmol -L-1 一周后；正常溃疡组(N)，糖尿病溃疡组(DU)，金葡菌对照组(SD-C)，金葡菌治疗组(SD-T) 3%戊巴比妥钠2ml.Kg—1剂量腹腔注射麻醉下本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种建立金黄色葡萄球菌感染的糖尿病足溃疡大鼠实验模型的方法，其特征是包括下述步骤：大鼠经高脂饲料喂养8周后，注射链脲佐菌素，制成糖尿病模型，稳定后在大鼠皮肤上制成深II度烫伤，三天后，每个溃疡处皮下注射菌株为金黄色葡萄球菌混悬液。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：柳国斌，韩强，
申请(专利权)人：上海中医药大学附属曙光医院，
类型：发明
国别省市：
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