一种玉米种子纯度鉴定方法技术

本发明专利技术公开了一种玉米种子纯度鉴定方法。与传统技术相比，本发明专利技术（1）通过对丙烯酸胺和N，N’一亚甲基双丙烯酰胺的浓度进行调整，分离胶胶片的韧性和硬度得到大幅度提高；（2）删除浓缩胶，并通过降低电压降低电泳速度，分子量大小不同的蛋白质在进入分离胶之前能聚集在同一水平线上；（3）本发明专利技术筛选出了甲基绿AR-0721，其迁移速度与蛋白质分子迁移速度同步，便于查看试验程序是否完成；（4）改进了样品提取温度和染色条件，大大缩短了提取和鉴定时间，提高了鉴定效率，同时还简化了分离胶的固定程序。（5）增加了胶片的清洗和保存程序，研制出清洗液和保存液，既方便了试验结果鉴定又便于凝胶胶片保存。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种玉米种子纯度鉴定方法，包括溶液配制、样品提取、凝胶制备、点样、电泳、卸板、凝胶染色和结果计算，其特征是，所述凝胶染色后还需要清洗凝胶胶片；其中：（1）溶液配制包括配制电极缓冲液、样品提取液、分离胶溶液、3%的过氧化氢溶液、染色液和凝胶胶片清洗液；所述样品提取液中采用甲基绿AR?0721为指示剂；所述分离胶溶液为：取1.43mL乳酸钠加去离子水980mL；然后加入丙烯酸胺129.38g，N，N’一亚甲基双丙烯酰胺4.31g，抗坏血酸0.25g，硫酸亚铁8.0mg；溶解后，用乳酸调至pH3.0，再加去离子水定容至1000mL，过滤于棕色瓶中，在4℃条件下保存；所述凝胶胶片清洗液为：取碳酸钠6.0g，十二烷基苯磺酸2.0g，羧甲基纤维素0.6g，三聚磷酸钠1.0g，40wt%的硅酸钠溶液0.4g，用水溶解，定容至500ml备用；（2）样品提取将粉碎后的玉米种子加入样品提取液在30℃恒温箱静置提取20分钟，取上清液用于电泳；（3）凝胶制备将预先洗净晾干的玻璃板装入胶条中，平放在桌面上；取分离胶溶液于烧杯中，用微量进样器加入3%的过氧化氢溶液，迅速摇匀，沿长玻璃板边缘均匀倒入，马上插好样品梳，放平；（4）点样分离胶聚合后，拔出样品梳并将样品槽清理干净，用微量进样器在每个样品槽中加入不同籽粒的样品上清液；（5）电泳、卸板加样完毕后，倒入电极缓冲液；接通电源，采用300V稳压进行电泳，待甲基绿AR?0721指示剂下移至胶底部边缘时，关闭电源；卸板；（6）凝胶染色、清洗凝胶胶片在35℃恒温条件下胶片染色30分钟，将胶片取出置于凝胶胶片清洗液中，并轻轻振荡3分钟；清洗完毕后，用水清洗三次后观察电泳图谱并进行结果计算。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：颜廷进，李群，王效睦，孔维国，田茜，戴双，张文兰，段乃彬，
申请(专利权)人：山东省农作物种质资源中心，
类型：发明
国别省市：