一种藻红蛋白纯度的计算方法技术

本发明专利技术涉及一种藻红蛋白纯度的计算方法。属于荧光蛋白纯度表达方法及计算技术领域。其特征在于包括下述步骤：1)从海洋红藻中分离提取出藻红蛋白，2)用紫外-可见光光度计，从280-800nm全程扫描，扫描步长1.0-5.0nm，获得藻红蛋白溶液的吸收光谱图，3)按照附图1所示，分别计算出由藻红蛋白溶液的吸光值与横坐标数轴在280-800nm波长扫描区间所围包的A区域面积，B区域面积和C区域面积，4)由于B区域面积是藻红蛋白典型特有的吸收光谱图，而A区域面积C区域面积代表了其它杂蛋白的吸收光谱图。因此藻红蛋白的纯度P(％)可以方便、准确地表达为P(％)＝100*B区域面积/(A区域面积+B区域面积+C区域面积).本发明专利技术专利所述的藻红蛋白纯度的计算方法具有简易方便性，较高准确性，适用于获得不同的藻红蛋白纯化样品的纯度值以及比较评估不同的藻红蛋白纯化产品的优劣性。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及。属于荧光蛋白纯度表达方法及计算
。其特征在于包括下述步骤：1)从海洋红藻中分离提取出藻红蛋白，2)用紫外-可见光光度计，从280-800nm全程扫描，扫描步长1.0-5.0nm，获得藻红蛋白溶液的吸收光谱图，3)按照附图1所示，分别计算出由藻红蛋白溶液的吸光值与横坐标数轴在280-800nm波长扫描区间所围包的A区域面积，B区域面积和C区域面积，4)由于B区域面积是藻红蛋白典型特有的吸收光谱图，而A区域面积C区域面积代表了其它杂蛋白的吸收光谱图。因此藻红蛋白的纯度P(％)可以方便、准确地表达为P(％)＝100*B区域面积/(A区域面积+B区域面积+C区域面积).本专利技术专利所述的藻红蛋白纯度的计算方法具有简易方便性，较高准确性，适用于获得不同的藻红蛋白纯化样品的纯度值以及比较评估不同的藻红蛋白纯化产品的优劣性。【专利说明】
本专利技术涉及。属于荧光蛋白纯度表达方法及计算
。
技术介绍
某些海洋藻类的细胞体中，除了含有植物常见的叶绿素a外，还含有一类特殊的水溶性辅助采光色素，称为藻胆蛋白(Phycobiliprotein),主要包括藻红蛋白(Phycoerythrin, PE)，藻蓝蛋白(Phycocyanin, PC),藻红蓝蛋白(PhycoerythrocyaninPEC)和别藻蓝蛋白(Allo-phycocyanin, APC)。藻胆蛋白不仅是藻细胞体内重要的光合作用色素蛋白，而且具有具有多方面的功能作用和广泛的应用价值。在藻胆蛋白中，藻红蛋白是藻胆蛋白中最重要的荧光蛋白，具有无毒性、摩尔消光系数大、荧光量子产率高、斯托克位移大、红橙色特征荧光、背景光干扰小、不易淬灭、性质稳定可较长期保存等特点，是一种荧光特异性强的标记物。因此，藻红蛋白在临床医学诊断、免疫化学及生物工程等研究领域具有广泛的应用价值。具有强荧光性的藻红蛋白分子可与特异的抗体或其它的生物分子发生结合作用，当这种结合态抗体附到细胞或组织的特异受体位点时，很容易通过它们发出的特异性荧光而进行跟踪观察，可作为效果良好的荧光示踪物，而且这种结合态物对生物体本身无任何毒性副作用和损害，具有很好的适用安全性。最近的研究表明，藻红蛋白可作为有效的光敏剂，用于治疗肿瘤、癌症等。已有许多报道指出，藻红蛋白能有效清除体内的各种有害自由基，提高机体免疫力，具有抗辐射、抗衰老、抗肿瘤作用，其样品市场大，是目前极有发展潜力的健康保健品。另外，藻红蛋白也可作为添加剂，可广泛应用于各类食品和化妆品行业，具有增强食品美丽色彩或养颜护肤的功效。根据全球生物化学样品最大的供应商Sigma公司的标价，高纯度的藻红蛋白目前的市场售价已达200-800美元/毫克不等，而某些生物蛋白分子与藻红蛋白结合物的现成品的售价更高。 从海洋红藻中分离提取藻红蛋白，由于涉及的藻源材料不同，或者由于采用的分离提取、纯化方法和技术存在差异性，因而必然存在所获得的藻红蛋白纯度会有很大的差别。因为藻红蛋白的纯度是涉及到藻红蛋白的荧光性能，是一个非常重要的理化指标值，直接关系到所分离提取藻红蛋白在质量上的优劣性。至目前为止，传统上表达和计算分离提取的藻红蛋白纯度采用的是测定出藻红蛋白在在280nm、565nm和625nm波长的吸光值，用A565A280的比值和A625A565的比值表示分离提取的藻红蛋白纯度。但这种表达和计算藻红蛋白纯度的方法只是一种很粗略的藻红蛋白纯度计算值，因为仅仅是用3个单一波长上的吸光值表达藻红蛋白纯度。为了能更全面、合理、准确地反映出分离提取的藻红蛋白纯度，需要建立一种更好的表达和计算藻红蛋白纯度的方法。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题就是针对上面所述的
技术介绍
，采用准确、适宜的计算方法，获得藻红蛋白样品的纯度值P(% )，根据计算的纯度值大小，可以方便、准确地比较分离提取的不同藻红蛋白样品在纯度方面的差异性。 本专利技术采用的技术方案及技术特征: 取从海洋红藻中分离纯化的藻红蛋白样品溶液4毫升，用紫外-可见光光度计，从280-800nm全程扫描，扫描步长1.0-5.0nm，获得藻红蛋白溶液的吸收光谱图，见附图1所示。如附图1所示，分别计算出由藻红蛋白溶液的吸光值与横坐标数轴在280-800nm波长扫描区间所围包的A区域面积，B区域面积和C区域面积。a分点是藻红蛋白溶液在280nm波长光的吸收值，b分点是藻红蛋白溶液在刚开始出现其典型的吸收谱时的吸收值，c分点是藻红蛋白溶液在结束出现其典型的吸收谱时的吸收值。藻红蛋白溶液经紫外-可见光光度计扫描得到的吸收值转入到Excel界面后，实施各区域面积的计算。其具体的相应面积的含义和计算操作过程如下: A区域面积的含义和计算:A区域面积是指从a分点至b分点，藻红蛋白溶液的吸光值与横坐标围成的面积。A区域面积实际上代表了分离提取的藻红蛋白溶液中，小分子杂质蛋白及其他一些杂质分子的光吸收谱所形成。其面积的计算方法是:以扫描藻红蛋白溶液时，每相邻两个步长下(步长为1.0-5.0nm)获得的吸光值作为计算该A区域每个微小块梯形面积的上底和下底，而两个相邻步长就是计算每个微小块梯形面积时的高。计算出A区域中所有的微小块梯形面积，计算A区域中所有的微小块梯形面积相加的总和值。 B域面积的含义和计算:B区域面积是指从b分点至c分点，藻红蛋白溶液的吸光值与横坐标围成的面积。B域面积实际上就是代表了典型、特有的藻红蛋白吸收光谱所形成。其面积的计算方法是:以扫描藻红蛋白溶液时，每相邻两个步长下(步长为1.0-5.0nm)获得的吸光值作为计算该B区域每个微小块梯形面积的上底和下底，而两个相邻步长就是计算每个微小块梯形面积时的高。计算出B区域中所有的微小块梯形面积，计算A区域中所有的微小块梯形面积相加的总和值。 C区域面积的含义和计算:C区域面积是指从c分点至800nm波长,藻红蛋白溶液的吸光值与横坐标围成的面积。C区域面积实际上代表了分离提取的藻红蛋白溶液中，可能存在的其他藻胆蛋白(例如藻蓝蛋白)吸收光谱所形成。其面积的计算方法是:以扫描藻红蛋白溶液时，每相邻两个步长下(步长为1.0-5.0nm)获得的吸光值作为计算该C区域每个微小块梯形面积的上底和下底，而两个相邻步长就是计算每个微小块梯形面积时的高。计算出C区域中所有的微小块梯形面积，计算C区域中所有的微小块梯形面积相加的总和值。 获得上述3个区域面积的数值后，接着用公式计算分离提取的藻红蛋白溶液的纯度P(% ) = 100*B区域面积/(A区域面积+B区域面积+C区域面积)。 【专利附图】【附图说明】 图1为本专利技术藻红蛋白的扫描光谱图，以及计算藻红蛋白纯度时，藻红蛋白的扫描光谱所呈现的不同物质占有的面积域的确定。即A区域面积的确定:从a分点至b分点，藻红蛋白溶液的吸光值与横坐标围成的面积，代表了分离提取的藻红蛋白中，小分子杂质蛋白及其他一些杂质分子的光吸收谱所形成。B区域面积的确定:从b分点至c分点，藻红蛋白溶液的吸光值与横坐标围成的面积，代表了典型、特有的藻红蛋白吸收光谱。C区域面积的确定:从c分点至SOOnm波长，藻红蛋白溶液的吸光值与横坐标围成的面积，代表了分离提取的藻红蛋白中，可本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种藻红蛋白纯度的计算方法，其特征在于：从海洋红藻中分离提取出藻红蛋白，用紫外‑可见光光度计，从280‑800nm全程扫描，扫描步长1.0‑5.0nm，获得藻红蛋白溶液的吸收光谱图.根据获得的吸收光谱图，从a分点(280nm)开始至800nm，将吸收光谱与横坐标所围包的区域面积分成3个区域面积，即分成A区域面积，B区域面积和C区域面积.其中A区域面积是指从a分点起至刚开始出现典型藻红蛋白吸收谱的b分点，吸收谱与横坐标所围包的区域面积，此区域面积代表了分离提取的藻红蛋白中，小分子杂质蛋白及其他一些杂质分子的光吸收谱所形成。B区域面积是指从刚开始出现典型藻红蛋白吸收谱的b分点至典型藻红蛋白吸收谱的结束点c分点，吸收谱与横坐标所围包的区域面积，此区域面积代表了典型、特有的藻红蛋白吸收光谱所形成。C区域面积是指从c分点起至800nm，吸收谱与横坐标所围包的区域面积，此区域面积代表了分离提取的藻红蛋白中，可能存在的其他藻胆蛋白(例如藻蓝蛋白)吸收谱所形成。以每相邻两个步长下获得的吸光值作为计算各个区域每个微小块梯形面积的上底和下底，步长为计算每个微小块梯形面积时的高。总和各个区域中所有的微小块梯形面积，分别获得A区域面积、B区域面积和C区域面积。藻红蛋白的纯度P(％)的计算表达为P(％)＝100*B区域面积/(A区域面积+B区域面积+C区域面积)。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：林汝榕，邢炳鹏，蔡文旋，柯秀蓉，张稚兰，
申请(专利权)人：国家海洋局第三海洋研究所，
类型：发明
国别省市：福建;35